E6/E7 mRNA表達在陰道鏡檢查陰性女性宮頸上皮內瘤變隨訪評估中的價值

劉麗 張慶元 陳育梅 郭芳

E6/E7 mRNA表達在陰道鏡檢查陰性女性宮頸上皮內瘤變隨訪評估中的價值

劉麗 張慶元 陳育梅 郭芳

目的 探討人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA表達在陰道鏡檢查陰性女性宮頸上皮內瘤變（CIN）隨訪評估中的價值。方法 選取2014—2015年陰道鏡活檢陰性（宮頸炎性疾?。┣野橛懈呶Ｐ虷PV感染、年齡＞25歲的195例女性為研究對象，行細胞學、HPV-DNA、E6/E7 mRNA檢測。隨訪1年后，分析E6/E7 mRNA表達與高危型HPV陽性檢出率、CINⅡ+發(fā)生率的關系。結果 隨訪1年后，E6/E7 mRNA表達陽性者高危型HPV陽性檢出率、CINⅡ+發(fā)生率率均明顯高于E6/E7 mRNA表達陰性者（均P＜0.05）。E6/E7 mRNA陽性表達且年齡≥40歲的女性，其CINⅡ+發(fā)生率明顯高于＜40歲者。結論 E6/E7 mRNA陽性表達對CINⅡ+的發(fā)生具有一定的預測價值，特別是年齡≥40歲的女性。

宮頸上皮內瘤變 人乳頭瘤病毒E6/E7 基因表達 隨訪評估

挪威的一項研究發(fā)現(xiàn)陰道鏡活檢陰性的520例女性在2005—2009年隨訪期間有7例發(fā)生宮頸癌變[1]，可見陰道鏡檢查及陰道鏡活檢會漏診一部分高級別宮頸病變患者，其原因可能與陰道鏡檢查很難發(fā)現(xiàn)一些微小病灶有關。陰道鏡檢查的準確性直接影響了宮頸癌前篩查的靈敏度[2]。因此找到一種更有效的標記物用于宮頸癌風險評估顯得尤為重要。病毒癌基因E6/E7可作為這種標記物，E6、E7蛋白過度表達提示宮頸癌危險性增加，監(jiān)測其表達可以達到預測宮頸病變進展的目的[3]。本文就E6/E7 mRNA檢測在陰道鏡活檢陰性女性隨訪期間發(fā)生宮頸上皮內瘤變（CIN）風險評估中的價值作一探討。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2014年1月至2015年1月行陰道鏡活檢病理學檢查結果陰性（宮頸炎性疾?。┑?95例女性為研究對象，年齡25～67（41.6±10.2）歲；均伴有高危型人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染；均無CIN史、宮頸癌史、盆腔放射治療史、子宮全切術史；就診時均非妊娠狀態(tài)。E6/E7 mRNA陽性109例，陰性86例。

1.2 方法

1.2.1 宮頸細胞學檢查 用宮頸刷在宮頸鱗狀上皮與柱狀上皮交界區(qū)旋轉3～5圈，并在ThinPrep液內充分刷洗，最大限度地收集脫落細胞，送細胞室進行系統(tǒng)程序化處理，由專業(yè)婦科病理醫(yī)師參照2001年修改后的描述式診斷系統(tǒng)（TBS）分類系統(tǒng)進行細胞學診斷。

1.2.2 HPV-DNA檢測 使用HPV分型基因芯片檢測系統(tǒng)、Hbri Max醫(yī)用核酸分子快速雜交儀和HPV擴增分型檢測試劑盒（上海凱普生物化學有限公司）以及PE5700基因擴增儀（美國PE公司），HPV擴增分型檢測試劑盒以凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交儀為平臺，利用導流雜交原理，在已固定好核酸探針的低密度基因芯片膜上，一次性快速檢測21種HPV亞型的基因分型，包括13種高危亞型（16、18、31、33、35、39、45、5l、52、56、58、59、68型）、5種低危亞型（6、11、42、43、44型）和3種中國人群常見亞型（53、66、CP8304型）。

1.2.3 E6/E7 mRNA檢測 使用Quanti Virus HPV E6/E7 mRNA診斷試劑盒（河南Kodia生物技術公司），采用支鏈DNA技術對14種高危HPV亞型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68）進行檢測。

1.2.4 病理學檢查 隨訪1年后再行液基薄層細胞（TCT）、HPV-DNA檢測，若TCT檢測結果為非典型鱗狀上皮細胞（ASCUS）以上或高危病毒持續(xù)感染，則行陰道鏡下宮頸組織活檢病理學檢查，病理學檢查結果由2位專業(yè)醫(yī)師參照世界衛(wèi)生組織分類標準[4]進行診斷，即按病理檢查結果分為正常/炎癥、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級、宮頸癌；以病理診斷為金標準，以CINⅡ＋（包括CINⅡ級、CINⅢ級和宮頸癌）為研究終點。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 E6/E7 mRNA表達與高危型HPV陽性檢出率的關系 隨訪1年后，E6/E7 mRNA陽性者高危型HPV陽性檢出率為47.71%（52/109），明顯高于E6/E7 mRNA陰性者的6.98%（6/86），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=38.16，P＜0.05）。

2.2 E6/E7 mRNA表達與CINⅡ+發(fā)生率的關系 隨訪1年后，E6/E7 mRNA陽性者CINⅡ+（包括CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌）發(fā)生率為11.01%（12/109），明顯高于E6/E7 mRNA陰性者的2.33%（2/86），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.3 不同年齡段E6/E7 mRNA表達與CINⅡ+發(fā)生率的關系 將109例E6/E7 mRNA陽性者分為＜40歲組57例和≥40歲組52例，≥40歲組隨訪1年后CINⅡ+發(fā)生率為17.31%，明顯高于＜40歲組的5.26%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.03，P＜0.05），見表1。

表1 不同年齡段E6/E7 mRNA表達與CINⅡ+的關系

3 討論

高危型HPV感染是宮頸癌的始發(fā)因素，但其風險提示意義非常有限。高危型HPV感染宮頸上皮細胞，帶入病毒癌基因E6/E7，活動期引起E6/E7 mRNA的轉錄并產生2種癌蛋白（E6和E7蛋白）；癌蛋白可與宿主細胞的細胞周期調節(jié)蛋白（抑癌蛋白如p53、RB等）相結合，導致細胞周期控制失常，發(fā)生癌變[5]。因此，存在病毒癌基因E6/E7 mRNA表達的高危型HPV感染才是真正具有致癌風險的HPV感染。

本研究結果發(fā)現(xiàn)E6/E7 mRNA表達陽性的女性，即使陰道鏡檢查結果為陰性，1年后隨訪發(fā)現(xiàn)高危型HPV持續(xù)感染率仍明顯高于E6/E7 mRNA表達陰性者；提示檢測E6/E7癌基因的表達可以辨別高危型HPV是否持續(xù)感染[6-7]。由于高危型HPV持續(xù)感染是多數(shù)宮頸癌前病變和宮頸癌的主要原因[8-9]，檢測E6/E7 mRNA表達可以間接預測CINⅡ+發(fā)生風險。本研究還發(fā)現(xiàn)E6/E7 mRNA陽性表達的≥40歲女性，其CINⅡ+發(fā)生率明顯高于＜40歲者。因此，建議E6/E7 mRNA陽性，特別是≥40歲的女性，即使第1次陰道鏡檢查結果陰性，亦須密切隨訪觀察，必要時行第2次陰道鏡檢查，及早發(fā)現(xiàn)并治療CINⅡ+。此外，本研究發(fā)現(xiàn)E6/E7 mRNA表達陰性的女性發(fā)生高危型HPV持續(xù)感染率為6.98%，CINⅡ+發(fā)生率為2.33%；均分別低于E6/E7 mRNA表達陽性者；與Giorgi等[10]、Persson等[11]研究結果相似。因此，對于E6/E7 mRNA表達陰性的女性，建議適當延長隨訪時間，盡量減輕患者的心理負擔。

綜上所述，E6/E7 mRNA陽性表達對CINⅡ+的發(fā)生具有一定的預測價值，特別是對于年齡≥40歲的女性。但本文存在隨訪時間較短、樣本量偏小等不足，下一步將延長隨訪時間、擴大樣本量，以進一步研究E6/E7 mRNA表達量與CINⅡ+的發(fā)生的相關性。

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Value of E6/E7 mRNA expression in follow-up of women with negative cervical biopsy

LIU Li，ZHANG Qingyuan，CHEN Yumei,et al.Department of Gynecology and Obstetrics,Wenzhou People's Hospital,Whenzhou 325000,China

Objective To assess the value of E6/E7 mRNA expression in follow-up of women negative cervical biopsy. Methods One hundred and ninety-five women aged over 25 with HR-HPV infection and negative colposcopic cervical biopsy underwent cytology,HPV-DNA,E6/E7 mRNA tests from 2014 to 2015.All subjects were followed-up for one year.Results After one year follow-up the women with positive E6/E7 mRNA expression had a higher rate of HR-HPV persistent infection and a higher incidence rate of high grade cervical intraepithelial neoplasia (CINII+)than those with negative E6/E7 mRNA expression (P＜0.05),and women aged over 40 with E6/E7 mRNA positive expression had a higher incidence rate of CINII+than those younger than 40. Conclusion Positive expression of E6/E7 mRNA may have a predictive value for CINII+in women with HR-HPV infection and negative cervical biopsy,especially for those aged over 40.

Uterine cervicalneoplasms Human papillomavirus E6/E7 mRNA Gene Expression Follow-up studies

2015-12-31）

（本文編輯：陳丹）

溫州市科技局課題（Y20140556）

325000 溫州市人民醫(yī)院婦產科（劉麗、陳育梅、郭芳），神經內科（張慶元）

劉麗，E-mail：13819737703@163.com