金銀花中綠原酸提取純化工藝研究進(jìn)展

摘要：在查閱、收集大量國(guó)內(nèi)金銀花中綠原酸提取、分離純化工藝文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，綜述近幾年來(lái)金銀花中綠原酸的提取、分離純化工藝研究進(jìn)展，旨在為進(jìn)一步開(kāi)展金銀花相關(guān)研究提供理論參考。

關(guān)鍵詞：綠原酸；金銀花；提??；純化

中圖分類(lèi)號(hào)：R932 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2016）07-0055-03

金銀花（Flos Lonicerae）為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或初開(kāi)花，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱、保肝利膽等功效，是常用中藥材之一。金銀花之所以具有清熱解毒等功效，是因?yàn)槠浜幸环N有效成分—綠原酸（chlorogenic acid）。綠原酸是一種多酚類(lèi)化合物，分式子為C16H18O9，易溶于水、醇、丙酮等，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血壓、降血脂、提高白細(xì)胞數(shù)量、增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)、增香護(hù)色等作用。近年來(lái)，常以綠原酸含量高低來(lái)評(píng)價(jià)金銀花質(zhì)量好壞。國(guó)內(nèi)對(duì)于金銀花中綠原酸的提取、分離純化工藝等進(jìn)行了大量研究，在查閱收集大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，綜述近幾年來(lái)金銀花中綠原酸的提取、分離純化工藝研究進(jìn)展，旨在為相關(guān)研究提供參考。

1 金銀花中綠原酸提取方法

1.1 溶劑提取法

用溶劑提取金銀花中綠原酸是較為傳統(tǒng)的提取工藝，按提取介質(zhì)分為水提法和醇提法，按提取方式分為煎煮法和回流法。其中水提法成本低，操作簡(jiǎn)單，但因提取物中蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等雜質(zhì)比較多，提取液易發(fā)霉等原因而應(yīng)用較少。目前較為常用的是醇提回流法，與水提法相比，該法提取時(shí)耗用大量乙醇，加大了生產(chǎn)成本，但提取物中水溶性雜質(zhì)少，且提取液不易發(fā)霉變質(zhì)，后期處理較方便。近幾年金銀花中綠原酸醇提研究的工藝參數(shù)見(jiàn)表1。

1.2 超聲波輔助提取

超聲波輔助提取是在水浸提的同時(shí)加超聲波輔助。此法不僅縮短提取時(shí)間、提高提取率，同時(shí)避免高溫對(duì)有效成分的影響。

袁飛采用正交試驗(yàn)優(yōu)化綠原酸超聲波提取工藝，確定影響超聲提取綠原酸的因素為溶劑類(lèi)型>預(yù)處理>提取時(shí)間>物料比，最佳提取工藝為：60%乙醇為溶劑，物料比1︰30，提取時(shí)間45 min，遠(yuǎn)紅外微波1 min。試驗(yàn)結(jié)果還表明，溶劑為60%乙醇得到的綠原酸含量比水、乙酸乙酯高近2倍。同時(shí)，微波破壁浸提加速綠原酸提取速率，超聲提高提取率。周蓮比較超聲波和索氏提取金銀花葉中綠原酸的效果，結(jié)果表明：超聲法的最優(yōu)工藝條件為提取溫度60 ℃、提取時(shí)間240 min、乙醇濃度35%、超聲功率200 W、料液比1︰40，綠原酸得率10.5 mg/g；索氏法的最優(yōu)工藝條件為提取時(shí)間240 min、乙醇濃度55%、料液比1︰10，綠原酸得率10.18 mg/g。從結(jié)果可以看出，雖然超聲法的得率和索氏提取法的得率幾乎一樣，但超聲提取的原料用量更少且能控制提取溫度。

1.3 微波輔助提取

微波輔助提取是在水浸提的同時(shí)加入微波，與傳統(tǒng)的水浸提法相比，微波輔助提取具有選擇性高、操作時(shí)間短、溶劑消耗小、有效成分收率高的特點(diǎn)。

李燕婷等研究乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率和微波處理時(shí)間對(duì)綠原酸提取率的影響，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定微波輔助提取法的最佳工藝為：乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、微波處理時(shí)間9 min、微波功率300 W、料液比1︰10（g︰mL），提取率3.779%；與傳統(tǒng)提取方法相比，操作時(shí)間明顯縮短，且無(wú)需回收溶劑。

張霞等以甲醇濃度、料液比、提取時(shí)間為考察因素，以提取液在327 nm波長(zhǎng)的吸光度為響應(yīng)值，采用響應(yīng)曲面法確定最佳提取工藝為：43%的甲醇溶液做提取劑，液料比40 mL/g，微波功率400 W，提取時(shí)間8 min，綠原酸提取率為7.62%。

尤秀麗、肖卓炳等分別采用微波超聲雙輔助提取綠原酸，結(jié)果均表明：采用超聲波和微波雙輔助提取技術(shù)得到的綠原酸提取率較單獨(dú)采用超聲波或微波輔助得到的綠原酸高。

1.4 其他提取方法

除以上常用的提取方法外，有很多研究采用其他提取技術(shù)，如酶解法輔助提取、酶法輔助聚二乙醇（PEG）-200提取、微波輔助聚二乙醇（PEG）提取、破壁法輔助提取等，均取得了較好的提取效果。

2 金銀花中綠原酸純化方法

2.1 大孔樹(shù)脂柱層析

大孔樹(shù)脂吸附量大、選擇性好、易解吸、易再生、成本低、效率高，特別適用水溶性化合物的提取分離。利用大孔吸附樹(shù)脂分離純化綠原酸，工藝較簡(jiǎn)單、成本低、產(chǎn)率高，現(xiàn)較多采用。

龔志華以金銀花粗提物為原料，比較NKA-2、D1400、聚酰胺、HP2MGL、ADS-21、D101及AB-8 等7種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)金銀花綠原酸靜態(tài)吸附與解吸的效果，結(jié)果表明，NKA-2樹(shù)脂吸附效果最好，靜態(tài)飽和吸附量可達(dá)212.17 mg/g，在乙醇含量為90%下的解吸率達(dá)81.4%，綠原酸純度可達(dá)53.07%，得率達(dá)73.33%。蘭雪萍、凌益平等分別考察各種類(lèi)型的大孔樹(shù)脂對(duì)金銀花中綠原酸的提取，結(jié)果表明，HPD450大孔樹(shù)脂、ADS-21型大孔樹(shù)脂和D101型大孔樹(shù)脂均對(duì)綠原酸有較好的純化效果，可用工業(yè)化大生產(chǎn)。

2.2 膜分離

膜分離技術(shù)對(duì)無(wú)機(jī)物、有機(jī)物等均適用，應(yīng)用范圍廣泛，尤其適用于對(duì)熱過(guò)敏物質(zhì)的分離。大多數(shù)膜分離過(guò)程不發(fā)生相的變化，具有無(wú)需加熱、能耗低、不需添加任何物質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)。但膜面易污染，耐壓性、耐熱性、耐溶劑能力有限。

高紅寧等采用醇沉、離心-超濾、微濾-超濾、大孔吸附樹(shù)脂等4種工藝對(duì)金銀花水提液進(jìn)行精制，并采用HPLC法測(cè)定金銀花水提液中綠原酸的含量。結(jié)果表明，金銀花水提液經(jīng)醇沉、離心-超濾、微濾-超濾、大孔吸附樹(shù)脂工藝處理后，其綠原酸的轉(zhuǎn)移率分別為59.30%，83.07%，80.13%，23.47%；固形物去除率分別為36.59%，40.12%，39.81%，90.07%。范遠(yuǎn)景等以金銀花為原料，以平均通量、膜截留率、綠原酸透過(guò)率為指標(biāo)，比較3種微濾膜（MF1，MF2和MF3）、4種超濾膜（UF1、UF2、UF3和UF4）及2種兩種反滲透膜（RO1和RO2）對(duì)綠原酸提取液的過(guò)濾特性，并研究濃縮液洗濾對(duì)綠原酸截留率的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：MF1、UF1和RO2膜的過(guò)濾性能明顯優(yōu)于其他同類(lèi)型膜，使用MF1-UF1-RO2膜組合處理效果最佳，其綠原酸回收率可達(dá)67.75%，產(chǎn)品純度可達(dá)13.21%以上。

潘廣勇等以金銀花為原料，通過(guò)微濾、超濾、納濾3級(jí)膜純化金銀花中的綠原酸。結(jié)果表明：微濾膜Ⅱ、超濾膜Ⅰ、納濾膜Ⅰ組合能達(dá)到純化效果，微濾膜通量186.7 L/hm2，透過(guò)率92.2%；超濾膜通量50.1 L/hm2，透過(guò)率89.7%；納濾膜通量32.8 L/hm2，透過(guò)率1.5%。

2.3 凝膠柱層析

徐曉偉、闕斐在對(duì)金銀花提取液進(jìn)行D101大孔樹(shù)脂純化和絮凝處理的基礎(chǔ)上，再通過(guò)SephadexLH-20層析柱進(jìn)行分離純化，結(jié)果表明，綠原酸的純度分別為86.16%和98.3%。

3 結(jié)語(yǔ)

金銀花是一類(lèi)傳統(tǒng)中藥材，具有較高的藥用價(jià)值和保健價(jià)值，而綠原酸是金銀花中的有效成分，開(kāi)展綠原酸提取、分離純化等方面的研究，對(duì)金銀花資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用具有重要意義。

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