基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油軟膏的制備及其效果研究

朱雨涵 蔣革 羅鋒 吳艷華 楊澤慶

摘要：[目的]篩選基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油軟膏的配方，并觀察其傷口愈合效果。方法]以正交設(shè)計(jì)法篩選出軟膏最佳配比，并通過眼刺激實(shí)驗(yàn)、愈傷性實(shí)驗(yàn)觀察其毒副作用及傷口愈合效果。[結(jié)果]透明質(zhì)酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氫化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸餾水81.7g、NaOH極少量可作為軟膏的配方，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得到無毒、無刺激性軟膏，對傷口愈合有一定功效。[結(jié)論]上述配方所制備的基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油軟膏性質(zhì)穩(wěn)定，可有效促進(jìn)傷口愈合，為油茶油的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：透明質(zhì)酸;油茶油;軟膏劑

中圖分類號(hào)：G642.0 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? ? 文章編號(hào)：1674-9324（2016）42-0080-03

透明質(zhì)酸（HA）[1]具有良好保濕作用，又是皮膚和其他組織中廣泛存在的天然生物分子，被譽(yù)為理想的天然保濕因子，HA通過促進(jìn)表皮細(xì)胞的增殖和分化以及清除氧自由基的作用，可促進(jìn)受傷部位皮膚再生。

油茶油[1]，又名山茶（籽）油，是從山茶科山茶屬植物普通油茶的成熟種子中提取的純天然高級(jí)食用植物油。油茶油中不飽和脂肪酸含量高達(dá)80%，富含維生素E、茶多酚和山茶甙等物質(zhì)。在治療刀傷、燙傷、防紫外等方面有良好功效。油茶是我國特有的品種，分布于我國十三四個(gè)省，適生范圍廣泛[2-3]。然而茶油的利用還僅僅集中在食用方面，利用率極低。迄今為止，國內(nèi)尚無上市的油茶油外用制劑及相關(guān)臨床研究。

本次研究將具有保水及促進(jìn)藥物吸收作用的HA作為軟膏的基質(zhì)促進(jìn)皮膚對油茶油的吸收，增大有效作用率，為油茶油多功能性的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)，具有重要意義和廣泛應(yīng)用前景。

一、儀器與材料

1.儀器。電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;85-2型恒溫磁力攪拌器（上海儀表集團(tuán)供銷公司）;GL—20G—II型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）;DV215CD型電子天平（美國Ohaus公司）。

2.材料。油茶油（深圳華之貢食品有限公司）、透明質(zhì)酸（新疆阜豐有限公司）、卡波姆（武漢諾輝醫(yī)藥化工有限公司）、PEG-40氫化蓖麻油、精確pH試紙（上海生工生物工程有限公司）、小鼠（大連醫(yī)科大學(xué)）。

二、方法與結(jié)果

1.輔料的選擇。PEG-40氫化蓖麻油是一種高效增溶劑，可作為乳化劑使軟膏穩(wěn)定均一?？ú穂4]具有良好的乳化性、增稠性、助懸性和成膜性，對人安全，未見刺激性、過敏性或變應(yīng)性反應(yīng)。在pH值和濃度合適時(shí)，對眼、鼻均無刺激性，是迄今唯一被認(rèn)為可作內(nèi)服用的藥品級(jí)樹脂，于半固體制劑中使用濃度通常為0.5%—3.0%，可作為軟膏的增稠劑。油茶油本身具有抑菌作用，故本品不需添加防腐劑。

2.實(shí)驗(yàn)方法。

（1）油茶油軟膏劑制備方法。

水相：稱取HA粉末、蒸餾水溶解并70℃預(yù)熱30min。

油相：稱取油茶油、PEG-40氫化蓖麻油70℃預(yù)熱30min。

將水相緩緩加入油相，邊加邊攪拌，乳化20—30min成軟膏。取卡波姆加入軟膏中繼續(xù)攪拌直至溶解，逐滴加入1%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.0—7.4。

（2）耐熱、常溫、耐寒實(shí)驗(yàn)。將制備的軟膏分別置于45℃、20℃、-20℃環(huán)境下，觀察分層、色澤、粘性、質(zhì)地等情況，若產(chǎn)品未出現(xiàn)分層及液化現(xiàn)象，色澤透徹，粘性適中，質(zhì)地細(xì)膩均一則為最佳[5]。

（3）離心實(shí)驗(yàn)。將制備的軟膏分裝至15ml離心管5—10ml，置于離心機(jī)3000r/min離心20min，觀察油水分層情況，若產(chǎn)品未出現(xiàn)分層、色澤透徹、粘性適中、質(zhì)地細(xì)膩均一則為最佳。

3.正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選主料配比。為尋求軟膏劑主成分的最佳配比，采用正交設(shè)計(jì)法進(jìn)行篩選，以尋得最佳范圍的理化指標(biāo)。

（1）因素與水平的確定。確定考察因素為透明質(zhì)酸（A）、PEG-40氫化蓖麻油（B）、油茶油（C）的處方量，每個(gè)因素安排低、中、高3個(gè)濃度水平進(jìn)行優(yōu)選[6]，實(shí)驗(yàn)因素與水平安排見表1。

（2）正交實(shí)驗(yàn)篩選處方比例。以上述確定的3因素3水平按照L9（34）正交表的設(shè)計(jì)制備9份軟膏樣品。依據(jù)乳劑型軟膏的性狀以及經(jīng)驗(yàn)，選取考察軟膏的幾項(xiàng)指標(biāo)，并設(shè)定各項(xiàng)的權(quán)重。通過耐寒、耐熱、常溫、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)分，時(shí)間設(shè)為24h（即溫度對軟膏的影響，各占總評(píng)分的25%）;離心穩(wěn)定性評(píng)分（占總評(píng)分的25%）。綜合評(píng)分10分為滿分，其中綜合評(píng)分=耐寒穩(wěn)定性評(píng)分×25%+耐熱穩(wěn)定性評(píng)分×25%+常溫穩(wěn)定性評(píng)分×25%+離心穩(wěn)定性評(píng)分×25%。正交設(shè)計(jì)表及結(jié)果分析見表2[7]。

極差R的大小反映了考察的3個(gè)因素對配方質(zhì)量的影響程度，由表3的結(jié)果得知，3個(gè)因素對配方影響程度為A>C>B。得出最優(yōu)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為A3B2C3，即透明質(zhì)酸0.01 g/ml，油茶油0.15 g/ml，PEG-40氫化蓖麻油0.005 g/ml。由于此處理結(jié)果未出現(xiàn)于上述實(shí)驗(yàn)中，故設(shè)計(jì)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)以確定該處理結(jié)果的正確性。經(jīng)證實(shí)含HA（透明質(zhì)酸）1% g/ml，PEG-40氫化蓖麻油0.5% g/ml和油茶油15% g/ml為最優(yōu)實(shí)驗(yàn)組。結(jié)果見表3。

4.配比微調(diào)優(yōu)化處方。

（1）乳化劑用量。為確定透明質(zhì)酸和油茶油含量，將乳化劑PEG-40氫化蓖麻油中濃度（0.5%）范圍內(nèi)設(shè)置5個(gè)梯度：0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%并按1—5依次編號(hào)。通過耐寒、耐熱、常溫、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)分確定其最佳配比為0.7%。結(jié)果見表4。

（2）輔料添加。考慮到透明質(zhì)酸高濃度時(shí)不利于藥品透皮吸收，且價(jià)格較為昂貴，為增強(qiáng)軟膏效果，縮減高昂的成本，將透明質(zhì)酸成分量減至0.5%，使用卡波姆增稠穩(wěn)定。設(shè)置6個(gè)濃度梯度：0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%，通過耐寒、耐熱、常溫、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)分確定其最佳配比為2.0%。結(jié)果見表5。

綜上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定軟膏的配方為透明質(zhì)酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氫化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸餾水81.7g、NaOH極少量。

5.油茶油軟膏的質(zhì)量檢查。

（1）穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取上述配方所得軟膏樣品在45℃、20℃、-20℃環(huán)境下分別放置10d，20d，30d，通過耐寒、耐熱、常溫實(shí)驗(yàn)進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)分并測定pH值（取適量蒸餾水，加入足量軟膏至飽和，使用精密pH試紙測定）[8]。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。

（2）軟膏的眼刺激性實(shí)驗(yàn)。選擇健康成年小鼠6只（眼睛已做檢查），雌雄各半，輕輕拉開小鼠一側(cè)眼睛的下眼瞼，將受試物0.05mL（1滴）滴入結(jié)膜囊中，使上、下眼瞼被動(dòng)閉合1s，以防止受試物丟失。另一側(cè)眼睛不處理作自身對照。1h、12h、24h后分別用強(qiáng)光照射并用放大鏡進(jìn)行觀察。結(jié)果小鼠視線無異常，由此可知，軟膏溫和無刺激。

（3）軟膏效果實(shí)驗(yàn)。選擇健康成年小鼠6只，雌雄各半，分開飼養(yǎng)，將小鼠背部脊柱兩側(cè)毛脫去面積各約1㎡，消毒，再用注射針頭將去毛消毒皮膚劃破，以有滲血為度。給藥一側(cè)傷口，另一側(cè)不處理作自身對照。12h給藥一次，持續(xù)10d，每天拍照觀察兩側(cè)傷口恢復(fù)情況[9-13]。結(jié)果證明軟膏有良好的愈傷功效。

三、討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以透明質(zhì)酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氫化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸餾水81.4g、NaOH極少量制備的油茶油軟膏穩(wěn)定性高，有抑菌愈傷功效，天然無刺激性、涂抹膚感油性適中，色澤好，因此可以采用此配方制備基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油軟膏制劑。但對其透皮吸收功能以及祛疤等功效需要進(jìn)一步地深入研究。

本制劑成分天然單純，制備工藝簡單，所使用成分均有益于人體。以透明質(zhì)酸為基質(zhì)更使膏體及皮膚保濕細(xì)膩，本實(shí)驗(yàn)制備的基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油乳劑型軟膏天然保濕，愈傷祛疤，為進(jìn)一步開發(fā)油茶油的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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Study on Preparation and Effect of Oil Tea Ointment Based on Hyaluronic Acid

ZHU Yu-han，JIANG Ge，LUO Feng，WU Yan-hua，YANG Ze-qing

（College of life science and technology，Dalian University，Dalian，Liaoning 116622，China）

Abstract：[Objective]The formula of oil tea ointment based on hyaluronic acid matrix was screened，and observe the wound healing effect.[method] the optimal ratio of ointment was selected by orthogonal design method，and the effect of toxicity and wound healing was observed by eye irritation test.[results] hyaluronic acid 0.5g，camellia oil 15g，PEG-40 hydrogenated castor oil 0.7g，card 2g Bohm，distilled water 81.7g，NaOH very little can be as a paste formulation.Through animal experiments to be non-toxic，non irritating ointment，the wound healing has a certain effect.[Conclusion] the preparation of the above formula based on hyaluronic acid matrix oil ointment is stable，can effectively promote wound healing，and provides a scientific basis for the development of camellia oil.

Key words：hyaluronic acid;camellia oil;ointment