臨床常見分離菌對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦的藥敏差異

趙 越，張莉滟，陳 蓮，葉倩君

(1 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 廣東省人民醫(yī)院，廣東 廣州 510080； 2 廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬骨傷科醫(yī)院，廣東 廣州 510240； 3 廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗學(xué)院，廣東 廣州 510182)

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·論著·

臨床常見分離菌對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦的藥敏差異

趙 越1，張莉滟1，陳 蓮2，葉倩君3

(1 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 廣東省人民醫(yī)院，廣東 廣州 510080； 2 廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬骨傷科醫(yī)院，廣東 廣州 510240； 3 廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗學(xué)院，廣東 廣州 510182)

目的 了解臨床常見病原菌對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦藥敏紙片的耐藥性，為臨床合理選擇頭孢哌酮/舒巴坦提供依據(jù)。方法 收集某院2014年上半年臨床分離病原菌1 141株，采用紙片擴散法檢測不同病原菌對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片(70/35 μg與75/75 μg)的抗菌活性。結(jié)果 1 141株病原菌中腸桿菌科細(xì)菌675株(59.16%)，非發(fā)酵菌447株(39.18%)，其他革蘭陰性桿菌19株(1.66%)。對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片(70/35 μg、75/75 μg)的耐藥率：超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)陽性大腸埃希菌(eco，221株)分別為7.69%、2.26%,肺炎克雷伯菌(kpn，92株)分別為10.87%、3.26%；亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌(IRAB 295株)分別為54.92%、11.19%；兩種藥敏紙片抗菌活性比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ESBLs陰性腸桿菌科細(xì)菌(eco，135株；kpn，98株)、亞胺培南敏感鮑曼不動桿菌(51株)、銅綠假單胞菌(48株)、嗜麥芽窄食單胞菌(22株)對兩種頭孢哌酮/舒巴坦藥敏紙片的耐藥率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。結(jié)論 ESBLs陽性腸桿菌科細(xì)菌與IRAB對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦藥敏紙片的抗菌活性具有差異，臨床治療此類細(xì)菌引起的感染時要充分考慮頭孢哌酮/舒巴坦的劑型，以達(dá)到預(yù)期治療效果。

頭孢哌酮/舒巴坦； 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶； ESBLs； 腸桿菌科細(xì)菌； 亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌； 紙片擴散法； 耐藥性； 抗藥性，微生物； 合理用藥

[Chin J Infect Control，2016，15(10)：744-747]

現(xiàn)代臨床醫(yī)療中隨著抗菌藥物的大量應(yīng)用，超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)陽性大腸埃希菌(eco)與肺炎克雷伯菌(kpn)、產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌科細(xì)菌、多重耐藥銅綠假單胞菌、泛耐藥鮑曼不動桿菌等日趨增多，及時有效控制并治愈其引起的感染刻不容緩[1-2]。頭孢哌酮/舒巴坦(cefoperazone/sulbactam，SCF)是第三代頭孢菌素頭孢哌酮與酶抑制劑舒巴坦的復(fù)合制劑，兩者合用可出現(xiàn)協(xié)同效應(yīng)，臨床注射藥頭孢哌酮/舒巴坦主要有兩種配比[3]，近年來已被廣泛應(yīng)用于對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的病原菌，尤其是針對革蘭陰性菌所引起的中重度感染患者的治療[4]。藥敏試驗中頭孢哌酮/舒巴坦有70/35 μg與75/75 μg兩種藥敏紙片，本文旨在研究臨床常見病原菌對兩種頭孢哌酮/舒巴坦藥敏紙片的耐藥性，為臨床針對性選擇不同劑型提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 收集本院2014年上半年不同標(biāo)本分離革蘭陰性桿菌共1 141株(已剔除重復(fù)菌株)，其中腸桿菌科細(xì)菌675株，以eco (356株)和kpn (190株)為主；非發(fā)酵菌447株，以鮑曼不動桿菌(aba，346株)、銅綠假單胞菌(pae，48株)為主；其他革蘭陰性桿菌19株。

1.2 試劑與儀器 M-H瓊脂培養(yǎng)基購自廣州市迪景微生物科技有限公司，頭孢哌酮/舒巴坦 70/35 μg與75/75 μg藥敏紙片均為OXOID公司產(chǎn)品。本研究所用菌株均采用法國生物梅里埃VITEK 2 Compact全自動微生物鑒定儀與其配套試劑鑒定。

1.3 質(zhì)控菌株 大腸埃希菌ATCC 25922和陰溝腸桿菌ATCC 700323由法國生物梅里埃公司提供。

1.4 菌株復(fù)活與藥敏試驗 菌株用哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)蘇并傳代，藥敏試驗依據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)需氧菌紙片擴散藥敏法(M02-A11)標(biāo)準(zhǔn)[5]進(jìn)行，同一菌株分別貼兩種頭孢哌酮/舒巴坦紙片,置于35 °C，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，檢測菌株抑菌環(huán)直徑大小并記錄。藥敏折點值參照食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)的頭孢哌酮折點值：≤15 mm為耐藥，16～20 mm為中介，≥21 mm為敏感。ESBLs通過VITEK 2 AST-GN13卡中的ESBLs反應(yīng)孔檢測，該反應(yīng)孔中含有藥物濃度分別為頭孢吡肟1 μg/mL，頭孢噻肟0.5 μg/mL，頭孢他啶0.5 μg/mL，頭孢吡肟/克拉維酸1/10 μg/mL，頭孢噻肟/克拉維酸0.5/4 μg/mL，頭孢他啶/克拉維酸0.5/4 μg/mL，確證試驗根據(jù)CLSI的紙片擴散法進(jìn)行[6]。

1.5 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用WHONET 5.6軟件與SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用χ2檢驗進(jìn)行分析，P≤0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ESBLs陽性腸桿菌科細(xì)菌藥敏結(jié)果 ESBLs陽性腸桿菌科細(xì)菌(其中eco 221株，kpn 92株)對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片的耐藥率：70/35 μg、75/75 μg分別為8.63%、2.55%，兩種藥敏紙片的抗菌活性比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。對70/35 μg和75/75 μg藥敏紙片的耐藥率：ESBLs陽性eco、kpn分別為7.69% VS 2.26%,10.87% VS 3.26%，兩種藥敏紙片的抗菌活性比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。見表1。

2.2 ESBLs陰性腸桿菌科細(xì)菌藥敏結(jié)果 ESBLs陰性腸桿菌科細(xì)菌(其中eco 135株，kpn 98株)對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片的耐藥率：70/35 μg和75/75 μg分別為9.44%與8.58%，抗菌活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。ESBLs陰性eco對70/35 μg和75/75 μg藥敏紙片的耐藥率分別為2.22%、2.22%，ESBLs陰性kpn的耐藥率分別為19.39%、17.35%，兩種菌對不同配比藥敏紙片的耐藥率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。

2.3 非發(fā)酵細(xì)菌 447株非發(fā)酵細(xì)菌中，亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌(IRAB)295株，亞胺培南敏感鮑曼不動桿菌(ISAB)51株，銅綠假單胞菌(pae)48株，嗜麥芽窄食單胞菌(pma)22株。IRAB對頭孢哌酮/舒巴坦70/35 μg紙片和75/75 μg紙片的耐藥率分別為54.92%和11.19%，兩種不同配比頭孢哌酮/舒巴坦的抗菌活性差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ISAB、pae、pma對兩種不同配比頭孢哌酮/舒巴坦的抗菌活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。

表1 常見臨床分離菌對不同配比頭孢哌酮/舒巴坦紙片的藥敏檢測結(jié)果(%，株)

Table 1 Susceptibility testing result of different ratios of cefoperazone/sulbactam to clinically isolated pathogens(%, No. of isolates)

病原菌頭孢哌酮/舒巴坦(70/35μg)RIS頭孢哌酮/舒巴坦(75/75μg)RISχ2#P#χ2*P*腸桿菌科細(xì)菌 ESBLs陽性8.63(27)20.12(63)71.25(223)2.55(8)8.63(27)88.82(278)14.000.0030.240.00 eco7.69(17)13.12(29)79.19(175)2.26(5)5.88(13)91.86(203)7.990.0114.320.00 kpn10.87(10)36.96(34)52.17(48)3.26(3)15.22(14)81.52(75)6.90.0117.880.00 ESBLs陰性9.44(22)3.43(8)87.13(203)8.58(20)1.29(3)90.13(210)0.160.691.040.31 eco2.22(3)3.70(5)94.08(127)2.22(3)0(0)97.78(132)0.001.002.370.12 kpn19.39(19)3.06(3)77.55(76)17.35(17)3.06(3)79.59(78)0.140.710.120.73非發(fā)酵細(xì)菌 IRAB54.92(162)42.71(126)2.37(7)11.19(33)52.88(156)35.93(106)170.770.00107.280.00 ISAB1.96(1)7.84(4)90.20(46)0(0)1.96(1)98.04(50)-0.49a1.590.21 pae16.67(8)6.25(3)77.08(37)12.50(6)6.25(3)81.25(39)0.340.560.250.62 pma54.55(12)27.27(6)18.18(4)54.55(12)27.27(6)18.18(4)0.001.000.001.00

#：不計中介株，僅對耐藥株與敏感株進(jìn)行分析；*：將中介株與耐藥株歸為非敏感株，對非敏感株與敏感株進(jìn)行統(tǒng)計分析；a :采用Fisher 精確概率法

3 討論

近年來，隨著抗菌藥物的大量使用，細(xì)菌耐藥率逐年升高，因此產(chǎn)酶抑制劑在感染性疾病的治療過程中被廣泛應(yīng)用，尤其是頭孢哌酮/舒巴坦在臨床治療革蘭陰性菌所引起的中重度感染時備受青睞。目前，實驗室對頭孢哌酮/舒巴坦進(jìn)行體外藥敏試驗時通常采用105(70/35 μg)與150(75/75 μg)兩種藥敏紙片，后者含有舒巴坦劑量為前者的2.14倍。采用K-B法對病原菌進(jìn)行體外藥敏試驗，不同病原菌對兩種不同配比抗菌藥物的耐藥性是否存在差異，鮮有文獻(xiàn)報道。

本研究中ESBLs陽性腸桿菌科細(xì)菌(eco、kpn)和IRAB對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片的耐藥率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，可能因為舒巴坦與β-內(nèi)酰胺酶形成不可逆結(jié)合，從而強效抑制β-內(nèi)酰胺酶,這種保護(hù)作用使頭孢哌酮的β-內(nèi)酰胺環(huán)逃逸β-內(nèi)酰胺酶分解,從而產(chǎn)生強大的抗菌活性[7]；其還可與青霉素結(jié)合蛋白(PBP)結(jié)合，避免由PBP與抗菌藥物親和力下降引起的耐藥[4]。舒巴坦對不動桿菌屬細(xì)菌具有抗菌作用，故頭孢哌酮/舒巴坦對鮑曼不動桿菌擁有良好的抗菌活性和直接殺滅作用，所以需要選用含有足夠劑量舒巴坦的復(fù)合制劑治療鮑曼不動桿菌引發(fā)的感染[8-9]。對于一般感染，國內(nèi)舒巴坦應(yīng)用劑量≤4 g/d，而國外對于治療多重耐藥不動桿菌屬細(xì)菌的劑量可達(dá)6～8 g/d[10-11]。 舒巴坦對產(chǎn)不同類型酶的鮑曼不動桿菌(如廣泛耐藥與非廣泛耐藥鮑曼不動桿菌)效果不同，ESBLs亦存在不同的基因型，因此兩種配比頭孢哌酮/舒巴坦對不同ESBLs基因型菌株的抗菌活性是否存有差異還需進(jìn)一步研究[12]。

本研究中ESBLs陰性腸桿菌科細(xì)菌、亞胺培南敏感鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌等其他病原菌對頭孢哌酮/舒巴坦兩種藥敏紙片的抗菌活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明兩種配比頭孢哌酮/舒巴坦紙片對不同類別細(xì)菌的抗菌活性不同，臨床要區(qū)別對待不同種屬細(xì)菌感染，合理選擇抗菌藥物。ESBLs陽性腸桿菌科細(xì)菌和多重耐藥鮑曼不動桿菌實驗室有必要選用不同配比頭孢哌酮/舒巴坦進(jìn)行藥敏試驗，其他菌株需與臨床進(jìn)行溝通后再決定。

綜上所述，在檢測ESBLs陽性eco和kpn、多重耐藥鮑曼不動桿菌等耐藥菌對頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥性時，應(yīng)當(dāng)在藥敏檢測報告中加注所選用頭孢哌酮/舒巴坦配比情況，正確指導(dǎo)臨床用藥，達(dá)到預(yù)期治療效果，遏制耐藥菌的廣泛播散。

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(本文編輯：豆清婭)

Difference in antimicrobial susceptibility of common clinical pathogens to different ratios of cefoperazone / sulbactam antimicrobial disks

ZHAOYue1,ZHANGLi-yan1,CHENLian2,YEQian-jun3

(1GuangdongAcademyofMedicalSciences/GuangdongGeneralHospital,Guangzhou510080,China; 2AffiliatedOrthopedicHospitalofGuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510240,China; 3KingMedDiagnosticsInstituteofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou510182,China)

Objective To understand the antimicrobial resistance of common clinical pathogens to antimicrobial disks containing different ratios of cefoperazone/sulbactam, so as to provide basis for rational application of cefoperazone /sulbactam in clinic. Methods 1 141 pathogens isolated from clinical specimens in a hospital in the first half year of 2014 were collected, disk diffusion method was adopted to detect antimicrobial activity of two kinds of cefoperazone/sulbactam disks (70/35 μg and 75/75 μg).Results Of 1 141 pathogenic strains, 675 (59.16%)were Enterobacteriaceae, 447 (39.18%) were non-fermentative bacteria, and 19 (1.66%) were other gram-negative bacilli. Resistance rates of pathogens to 70/35μg and 75/75 μg cefoperazone /sulbactam antimicrobial disks were as follows: extended-spectrum β-lactamases(ESBLs)-producingEscherichiacoli(n=221) were 7.69% and 2.26% respectively, ESBLs-producingKlebsiellapneumoniae(n=92) 10.87% and 3.26% respectively, imipenem-resistantAcinetobacterbaumannii(IRAB,n=295)54.92% and 11.19%respectively；there were significant differences in antimicrobial activity between two ratios of antimicrobial disks(P<0.05). While antimicrobial resistance rates of ESBLs-negativeEnterobacteriaceae(Escherichiacoli,n=135;Klebsiellapneumoniae,n=98), imipenem-sensitiveAcinetobacterbaumannii(ISAB,n=51),Pseudomonasaeruginosa(n=48 ), andStenotrophomonasmaltophilia(n=22) were not significantly different (allP>0.05). Conclusion Antimicrobial activity of two different ratios of cefoperazone/sulbactam antimicrobial disks to ESBLs-producing Enterobacteriaceae and IRAB is different, attention should be paid to ratios of cefoperazone/sulbactam during the treatment , so as to achieve the desired therapeutic effect.

cefoperazone/sulbactam; extended-spectrum β-lactamase; ESBLs； Enterobacteriaceae; imipenem-resistantAcinetobacterbaumannii; disk diffusion method; drug resistance; drug resistance, microbial; rational antimicrobial use

2015-12-24

趙越(1987-)，男(漢族)，黑龍江省牡丹江市人，檢驗師，主要從事臨床微生物檢驗研究。

張莉滟 E-mail:zlycml@126.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2016.10.006

R181.3+2

A

1671-9638(2016)10-0744-04