HPLC法測(cè)益康膠囊中非法添加格列本脲的含量

王卓琰，杜妍，趙云鶴

1.吉林省白城市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林白城137000；2.吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林吉林132000

HPLC法測(cè)益康膠囊中非法添加格列本脲的含量

王卓琰1，杜妍2，趙云鶴1

1.吉林省白城市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林白城137000；2.吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林吉林132000

目的用HPLC法測(cè)益康膠囊中非法添加格列本脲的含量。方法以格列本脲對(duì)照品作對(duì)照，采用HPLC法測(cè)定益康膠囊中非法添加的格列本脲含量。結(jié)果在優(yōu)化色譜條件下，益康膠囊中含有格列本脲，其中的格列本脲線性范圍1.0～50 μg?；貧w方程為：Y=390.1006 814X-13.531 980 3 r=0.999 9。含量測(cè)定的回收率為：98.34%RSD=0.798 2%。結(jié)論所建立的方法專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適用于對(duì)益康膠囊中非法添加的格列本脲含量的測(cè)定。

高效液相色譜法；格列本脲；益康膠囊；非法添加；含量測(cè)定

益康膠囊是由山藥，肉桂，黃精，葛根，大麥芽，苦瓜精等組成的膠囊劑，主要成份是黃酮，苦瓜素，多糖，微量元素等，是用于糖尿病患者的保健食品。益康膠囊中可能非法添加格列本脲（別名：優(yōu)降糖，達(dá)安療，達(dá)安寧，乙磺己脲，優(yōu)格魯康，氯磺環(huán)己脲；外文名Glibenclamide）。格列本脲是第二代磺脲類藥，具有明顯的降糖作用，但是其不良反應(yīng)也比較多，因此很多患者不適合服用。如果在不知情的情況下服用格列本脲就更加危險(xiǎn)了，長(zhǎng)期大量的服用，可導(dǎo)致患者低血糖和腎病，甚至死亡。益康膠囊是降糖類的食品，標(biāo)識(shí)不含化藥成分，如果非法添加，而患者在不知情的情況下長(zhǎng)期服用，會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的后果，因此，我們建立HPLC法測(cè)益康膠囊中非法添加格列本脲的含量［1］，使益康膠囊質(zhì)量可控，確保人民使用安全有效。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器Agilent 1260高效液相色譜儀，Sartorlus-BP211D型電子天平，JCX—400G超聲清洗器，UV-2450日本島津紫外分光光度計(jì)

1.1.2試藥①對(duì)照品：格列本脲對(duì)照品［中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100135-200404（供含量測(cè)定用）103℃干燥3 h后使用，約50 mg］。②藥品：某廠家生產(chǎn)的益康膠囊（批號(hào)為：20130916，20130920，20130924）；③試劑：甲醇：色譜純（美國(guó)），超純水（自制），其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

2.1.1溶液的制備供試品溶液取本品2粒，傾出內(nèi)容物，稱取約0.8 g（相當(dāng)2粒重量），精密稱定，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，殘?jiān)蛹状纪?，再重?fù)提取2次，合并濾液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液取格列本脲對(duì)照品10 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶，加甲醇適量溶解，稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為每1 mL含0.1 mg的對(duì)照品溶液。陰性對(duì)照品溶液取處方中藥材的1/10量，按法制成片，再按供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.2色譜條件的確定色譜柱：①ODS HYPERSIL C18 200 mm×4.6 mm 5 μm。②Shim-pack VP-ODS C18 150mm×4.6mm5μm。③AlltimaODSC18150mm×4.6 mm 5 μm；流動(dòng)相：A：乙腈B：0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸：甲酸：乙腈（60∶20∶20）；柱溫：25℃；流速：0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；理論板數(shù)以格列本脲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。波長(zhǎng)：根據(jù)光譜掃描結(jié)果及參考有關(guān)格列本脲研究資料［2-3］，選用230 nm作為該試驗(yàn)格列本脲含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。流動(dòng)相：采用A：乙腈B：0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸：甲酸：乙腈（60∶20∶20）為流動(dòng)相，經(jīng)試驗(yàn)，分離效果好，保留時(shí)間適度，故確定其為本法的流動(dòng)相。取格列本脲對(duì)照品溶液，濾膜濾過，自動(dòng)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果無干擾，色譜條件符合要求。

2.2線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液1、3、5、10、15、30、50 μL注入色譜儀中，記錄峰面積，見表1。

表1　標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算得回歸方程：Y=390.100 6814 X-13.531 980 3 r=0.999 97。結(jié)果表明格列本脲在1.0～50 μg范圍內(nèi)呈線性。

2.3精密度試驗(yàn)

取格列本脲對(duì)照品（批號(hào)：100135-200404），按含量測(cè)定方法制得供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積［4］，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2　精密度的試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果：RSD=0.139 6%。表明該方法所用儀器精密度良好。

2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

取益康膠囊樣品（批號(hào)：20130916），按含量測(cè)定方法制得供試品溶液，分別于0、3、6、12、24 h間隔進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以峰面積為指標(biāo)，考察其穩(wěn)定性［5］，結(jié)果見表3。

表3　穩(wěn)定性的試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果：RSD=0.190 8%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：20130916），依法獨(dú)立含量測(cè)定6次［6］，試驗(yàn)結(jié)果，見表4。

表4　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果：RSD=1.914%，表明該法重現(xiàn)性良好。

2.6回收率測(cè)定試驗(yàn)

采用加樣回收測(cè)定法［7-8］，取本品已知含量的樣品（批號(hào)：20130916、格列本脲含量為1.41 mg/粒、平均粒重為0.401 2 g）適量，分別取6份（每份約0.4g），精密稱定，每份各精密加入格列本脲對(duì)照品溶液14.1 mL，混勻，按含量測(cè)定法制備供試品溶液，并依法測(cè)定含量，結(jié)果見表5。

表5　格列本脲回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明：該法平均回收率為98.34%，RSD為0.798 2%，表明本法準(zhǔn)確度較好，方法可行。

2.7樣品含量測(cè)定

取益康膠囊樣品（20130916，20130920，20130924），按制備供試品溶液及對(duì)照品溶液的方法制備，分別各取10 μL，注入色譜儀，依法測(cè)得，按外標(biāo)法計(jì)算含量（n=3），結(jié)果見表6。

表6　格列本脲含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

根據(jù)光譜掃描結(jié)果及參考有關(guān)格列本脲研究資料，試驗(yàn)表明選用230 nm作為該試驗(yàn)格列本脲含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)，測(cè)定結(jié)果適宜。

3.2線性關(guān)系考察試驗(yàn)

格列本脲在1.0～50 μg范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系，表明該法可行。

3.3精密度試驗(yàn)

RSD值為0.139 6%，表明實(shí)驗(yàn)儀器精密度良好。

3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

本品甲醇溶液在常溫24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。此外，樣品甲醇溶液在實(shí)驗(yàn)過程中放置24 h內(nèi)含量基本未發(fā)生變化。

3.5重現(xiàn)性試驗(yàn)

RSD值為1.914%，表明該試驗(yàn)方法重現(xiàn)性好。

3.6回收率試驗(yàn)

平均回收率為98.34%，RSD為0.798 2%，表明該試驗(yàn)方法準(zhǔn)確、可靠。

4　結(jié)語

通過實(shí)驗(yàn)探究發(fā)現(xiàn)運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定益康膠囊中非法添加格列本脲的含量，該方法結(jié)果準(zhǔn)確，方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性及回收率均理想，對(duì)于制定該藥的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)具有重要的參考價(jià)值。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).《中國(guó)藥典》2010年版二部［M］.北京.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］劉亞麗，段木盛，彭方.降糖中成藥中格列苯脲的檢測(cè)［J］.中國(guó)藥師，2005，8（7）：613.

［3］張翠英，李振國(guó)，徐金玲.中藥制劑及保健品中違禁添加7種降糖藥物的LC-MS/MS定性檢測(cè)［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43（9）：707.

［4］薛恒躍，王玉蘭，于黎明，等.中藥制劑中添加化學(xué)藥品苯巴比妥的檢測(cè)方法研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17（2）：216.

［5］張平，黃趙剛，程剛，等.降糖寧中摻有西藥降糖成分的檢測(cè)［J］.安徽醫(yī)藥，2006，10（3）：184.

［6］FDA.Guidance for Industry：Analytical procedures and methods Validation，chemistry，manufacturing，and controls documen tation（Draft）［S］.2000.

［7］ICH Q2A：Test on Validation of Analytical Procedures［S］. 2007.

［8］ICH Q2B：Validation of Analytical Procedures：Methodology［S］. 2007.

HPLC Method in Measuring the Content of Illegal Additive of Glibenclamide in Yikang Capsule

WANG Zhuo-yan1，DU Yan2，ZHAO Yun-he1
1.Food and Drug Inspection Institute，Baicheng，Jilin Province，137000 China；2.Food and Drug Inspection Institute，Jilin，Jilin Province，132000 China

Objective To measure the content of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule by HPLC method. Methods The content of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule was measured by HPLC method taking the glibenclamide control articles for control.Results Under the optimized chromatography condition，yikang capsule included the glibenclamide，the glibenclamide linearity range was from 1.0 μg to 50 μg，and the regression equation was Y=390.100 681 4X-13.531 980 3 r=0.999 9，the recycle rate of content measure was 98.34%RSD=0.7982%.Conclusion The specificity of the established method is strong with easy operation，accurate result and good repeatability，which is suitable for the measurement of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule.

High performance liquid chromatography；Glibenclamide；Yikang capsule；Illegal additive；Content measurement

R19

A

1672-5654（2016）10（a）-0079-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.28.079

王卓琰（1989.5-），女，吉林白城人，本科，藥師，研究方向：藥品檢驗(yàn)。

（2016-07-06）