¹²⁵I粒子植入預(yù)防犬良性尿道狹窄內(nèi)切開術(shù)后復(fù)發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究

孫士恒 楚寧 王俊波

【摘要】 目的 評(píng)價(jià)125I粒子植入預(yù)防犬良性尿道狹窄內(nèi)切開術(shù)后復(fù)發(fā)療效， 并觀察犬尿道瘢痕組織中轉(zhuǎn)化因子β1（TGF β1）的表達(dá)。方法 選取16只健康雄性成年犬， 采用小兒電切鏡制作犬尿道狹窄動(dòng)物模型， 待模型制作成功， 全身麻醉后行尿道狹窄切開術(shù)。術(shù)后5 d因感染死亡1只犬。將成年犬隨機(jī)分為125I粒子未置入粒子組（7只）和置入粒子組（8只）。術(shù)后4周， 檢查膀胱鏡觀察尿道情況。同時(shí)， 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)犬尿道狹窄段瘢痕組織中TGF β1的表達(dá)， 對(duì)比兩組犬動(dòng)物模型的TGF β1表達(dá)情況。結(jié)果 置入粒子組形成尿道狹窄的1例（12.5%）， 未置入粒子組形成尿道狹窄的7例（100.0%）， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。置入粒子組尿道瘢痕組織的TGF β1表達(dá)較未置入粒子組少， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 125I粒子植入對(duì)預(yù)防尿道狹窄有重要作用， 其抑制了TGF β1表達(dá)， 進(jìn)而抑制瘢痕形成， 這為臨床研究提供了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)， 對(duì)于其他相關(guān)的臨床研究具有一定的指導(dǎo)意義。

【關(guān)鍵詞】 尿道狹窄；125I粒子；免疫組化；轉(zhuǎn)化因子β1

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.26.192

由于尿道狹窄術(shù)后尿道瘢痕再生， 常常導(dǎo)致尿道狹窄復(fù)發(fā)， 需反復(fù)尿道切開或尿道擴(kuò)張。由于術(shù)后遠(yuǎn)期效果不確定以及狹窄復(fù)發(fā)率高， 因此臨床尋求一種更佳可靠的治療方式具有重要的意義。尿道狹窄的復(fù)發(fā)和局部瘢痕形成有密切的關(guān)系， 在瘢痕修復(fù)中的TGF β1表達(dá)明顯增高[1]。研究發(fā)現(xiàn)[2]， γ射線通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和周期阻滯， 而減少瘢痕細(xì)胞的形成， 而125I核素在衰敗過(guò)程中發(fā)射出γ射線的能量為36 keV， 穿透力較弱， 在組織的半價(jià)層為20 mm， 對(duì)患者和醫(yī)務(wù)人員都是安全的。本研究建立在尿道狹窄犬模型上， 對(duì)狹窄段行切開后， 植入125I粒子， 檢查尿道狹窄復(fù)發(fā)情況和TGF β1表達(dá)情況， 為臨床術(shù)后聯(lián)合應(yīng)用125I粒子預(yù)防尿道狹窄提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。具體報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 尿道狹窄模型的建立 犬尿道狹窄模型制作參照陳琦等[3]建立的犬尿道狹窄模型， 其中根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)作相應(yīng)改動(dòng)。雄性成年犬16只， 分批用10 g/L戊巴比妥鈉（30 mg/kg） 靜脈注射麻醉， 仰臥位固定， 經(jīng)尿道外口插入好克公司的F10小兒電切鏡， 置鏡深度5～6 cm， 電切功率30 W， 5%葡萄糖作沖洗液， 在尿道鏡視野內(nèi)5～7點(diǎn)位置直視下用直徑2 mm環(huán)狀電極行犬前尿道電切術(shù)， 造成面積約2 ～3 mm穿透尿道全層的手術(shù)創(chuàng)面。術(shù)前1 d、術(shù)后3～5 d用青霉素80萬(wàn)U溶于100 ml生理鹽水靜脈滴注， 2次/d。觀察每日犬排尿狀況。術(shù)后5 d因感染死亡1只犬， 繼續(xù)飼養(yǎng)4周。再次分批用10 g/L戊巴比妥鈉（30 mg/kg） 靜脈注射麻醉， 仰臥位固定， 經(jīng)尿道外口插入好克公司的F10小兒電切鏡， 用冷刀切開尿道狹窄部分。將成年犬隨機(jī)分為未置入粒子組（7只）和置入粒子組（8只）。

1. 2 粒子植入方法 尿道切開術(shù)中， 將粒子植入針經(jīng)模板引導(dǎo)系統(tǒng)置入尿道狹窄部。

1. 3 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)[3] 復(fù)查膀胱鏡下可見尿道狹窄， 顯微鏡下觀察， 以細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞漿染成棕黃色作為陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)， 每張切片于400倍鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野， 計(jì)數(shù)陽(yáng)性成纖維細(xì)胞， 無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞<5%判為陰性（-）， 陽(yáng)性細(xì)胞百分率>5%判為陽(yáng)性（+）。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組尿道狹窄發(fā)生情況比較 置入粒子組形成尿道狹窄的1例（12.5%）， 未置入粒子組形成尿道狹窄的7例（100.0%）， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2. 2 兩組尿道組織中的TGF β1的表達(dá)比較 置入粒子組尿道瘢痕組織的TGF β1表達(dá)較未置入粒子組少， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

1994年Bosnjakovic等[4]利用犬尿道狹窄模型， 研究了尿道內(nèi)支架置入療效； 2008年曹軍等[5]學(xué)者研究了犬尿道瘢痕組織中的TGF β1表達(dá)， 研究表明了尿道狹窄犬中的TGF β1表達(dá)增高。本文研究中仍然選擇犬模型制作尿道狹窄動(dòng)物模型的原因是雄犬個(gè)體較大， 其尿道有尿道海綿體支撐， 組織形態(tài)更加類似人類的尿道情況。并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)尿道狹窄的犬中TGF β1表達(dá)增高， 說(shuō)明TGF β1表達(dá)增高和犬尿道狹窄的發(fā)生是正相關(guān)的。本組研究對(duì)粒子植入犬和尿道狹窄犬進(jìn)行TGF β1表達(dá)的比較， 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)粒子植入犬的TGF β1表達(dá)低于尿道狹窄犬?？紤]粒子植入可以抑制尿道狹窄。

瘢痕的形成是尿道狹窄和閉鎖的主要原因[6]。增生性瘢痕形成的原因[7]是由于微血管內(nèi)皮增生致使血管閉塞導(dǎo)致組織缺氧， 從而刺激血管再生， 引起纖維組織增生和過(guò)量的膠原形成， 而膠原形成主要受細(xì)胞因子的調(diào)控如TGF β1。Levy[8]等采用X線、β射線、光子束防治瘢痕疙瘩取得良好效果。而在2000年， 孫穎浩等[9]采用192Ir（銥）對(duì)復(fù)發(fā)性尿道狹窄患者進(jìn)行了腔內(nèi)放療， 劑量為1000～1500 cGy， 說(shuō)明腔內(nèi)放療對(duì)新生瘢痕有抑制作用。目前雖然對(duì)尿道狹窄的放療有了一定的研究進(jìn)展， 然而針對(duì)動(dòng)物的理論研究仍處于空白， 而且尚不明確放療作用于尿道瘢痕組織的何種因子。本實(shí)驗(yàn)研究正好填補(bǔ)了放療在犬良性尿道狹窄研究中的空白。應(yīng)用膀胱鏡對(duì)尿道瘢痕情況進(jìn)一步驗(yàn)證， 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)粒子植入犬尿道瘢痕組織較尿道狹窄犬的尿道組織的TGF β1表達(dá)少， 而且膀胱鏡檢查的結(jié)果和TGF β1的結(jié)果是一致的。

125I核素衰變過(guò)程中發(fā)射出γ射線， 而該射線能量為36 keV， 有穿通力弱的特點(diǎn)， 即使尿道黏膜較脆弱， 也不會(huì)對(duì)深部組織造成損害[10]。本組研究中， 置入粒子組8只尿道狹窄犬經(jīng)過(guò)粒子植入后有7只未復(fù)發(fā)， 而未置入粒子組尿道狹窄發(fā)生率約100.0%， 說(shuō)明腔內(nèi)放療可抑制尿道瘢痕形成， 有助于預(yù)防尿道狹窄復(fù)發(fā)。在瘢痕形成過(guò)程中成纖維細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)主要受細(xì)胞因子的調(diào)控， 如TGF β1等， 是目前已知的與瘢痕過(guò)度形成關(guān)系最為密切的細(xì)胞因子， 研究表明抑制TGF β1表達(dá)進(jìn)而抑制瘢痕的形成[11-13]。而且本文研究中植入125I粒子的犬尿道狹窄， 通過(guò)病理活檢發(fā)現(xiàn)TGF β1的表達(dá)減少， 說(shuō)明125I粒子植入有助于預(yù)防良性尿道狹窄術(shù)后復(fù)發(fā)。

本次研究結(jié)果顯示， 置入粒子組形成尿道狹窄的1例（12.5%）， 未置入粒子組形成尿道狹窄的7例（100.0%）， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。標(biāo)本中125I粒子植入組的TGF β1表達(dá)低于對(duì)照組（P<0.05）。

綜上所述， 125I粒子植入對(duì)預(yù)防尿道狹窄有重要作用， 其抑制了TGF β1表達(dá)， 進(jìn)而抑制瘢痕形成， 這為臨床研究提供了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)， 對(duì)于其他相關(guān)的臨床研究具有一定的指導(dǎo)意義。

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[收稿日期：2016-06-20]