125I粒子植入預防犬良性尿道狹窄內(nèi)切開術(shù)后復發(fā)的實驗研究

孫士恒+楚寧+王俊波

【摘要】 目的 評價125I粒子植入預防犬良性尿道狹窄內(nèi)切開術(shù)后復發(fā)療效， 并觀察犬尿道瘢痕組織中轉(zhuǎn)化因子β1（TGF β1）的表達。方法 選取16只健康雄性成年犬， 采用小兒電切鏡制作犬尿道狹窄動物模型， 待模型制作成功， 全身麻醉后行尿道狹窄切開術(shù)。術(shù)后5 d因感染死亡1只犬。將成年犬隨機分為125I粒子未置入粒子組（7只）和置入粒子組（8只）。術(shù)后4周， 檢查膀胱鏡觀察尿道情況。同時， 應用免疫組織化學方法檢測犬尿道狹窄段瘢痕組織中TGF β1的表達， 對比兩組犬動物模型的TGF β1表達情況。結(jié)果 置入粒子組形成尿道狹窄的1例（12.5%）， 未置入粒子組形成尿道狹窄的7例（100.0%）， 比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。置入粒子組尿道瘢痕組織的TGF β1表達較未置入粒子組少， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論 125I粒子植入對預防尿道狹窄有重要作用， 其抑制了TGF β1表達， 進而抑制瘢痕形成， 這為臨床研究提供了動物實驗的實驗依據(jù)， 對于其他相關的臨床研究具有一定的指導意義。

【關鍵詞】 尿道狹窄；125I粒子；免疫組化；轉(zhuǎn)化因子β1

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.26.192

由于尿道狹窄術(shù)后尿道瘢痕再生， 常常導致尿道狹窄復發(fā)， 需反復尿道切開或尿道擴張。由于術(shù)后遠期效果不確定以及狹窄復發(fā)率高， 因此臨床尋求一種更佳可靠的治療方式具有重要的意義。尿道狹窄的復發(fā)和局部瘢痕形成有密切的關系， 在瘢痕修復中的TGF β1表達明顯增高[1]。研究發(fā)現(xiàn)[2]， γ射線通過誘導細胞凋亡和周期阻滯， 而減少瘢痕細胞的形成， 而125I核素在衰敗過程中發(fā)射出γ射線的能量為36 keV， 穿透力較弱， 在組織的半價層為20 mm， 對患者和醫(yī)務人員都是安全的。本研究建立在尿道狹窄犬模型上， 對狹窄段行切開后， 植入125I粒子， 檢查尿道狹窄復發(fā)情況和TGF β1表達情況， 為臨床術(shù)后聯(lián)合應用125I粒子預防尿道狹窄提供了實驗依據(jù)。具體報告如下。

1 材料與方法

1. 1 尿道狹窄模型的建立 犬尿道狹窄模型制作參照陳琦等[3]建立的犬尿道狹窄模型， 其中根據(jù)實驗設計作相應改動。雄性成年犬16只， 分批用10 g/L戊巴比妥鈉（30 mg/kg） 靜脈注射麻醉， 仰臥位固定， 經(jīng)尿道外口插入好克公司的F10小兒電切鏡， 置鏡深度5～6 cm， 電切功率30 W， 5%葡萄糖作沖洗液， 在尿道鏡視野內(nèi)5～7點位置直視下用直徑2 mm環(huán)狀電極行犬前尿道電切術(shù)， 造成面積約2 ～3 mm穿透尿道全層的手術(shù)創(chuàng)面。術(shù)前1 d、術(shù)后3～5 d用青霉素80萬U溶于100 ml生理鹽水靜脈滴注， 2次/d。觀察每日犬排尿狀況。術(shù)后5 d因感染死亡1只犬， 繼續(xù)飼養(yǎng)4周。再次分批用10 g/L戊巴比妥鈉（30 mg/kg） 靜脈注射麻醉， 仰臥位固定， 經(jīng)尿道外口插入好克公司的F10小兒電切鏡， 用冷刀切開尿道狹窄部分。將成年犬隨機分為未置入粒子組（7只）和置入粒子組（8只）。

1. 2 粒子植入方法 尿道切開術(shù)中， 將粒子植入針經(jīng)模板引導系統(tǒng)置入尿道狹窄部。

1. 3 評定標準[3] 復查膀胱鏡下可見尿道狹窄， 顯微鏡下觀察， 以細胞膜和（或）細胞漿染成棕黃色作為陽性判斷標準， 每張切片于400倍鏡下隨機選擇5個視野， 計數(shù)陽性成纖維細胞， 無陽性細胞或陽性細胞<5%判為陰性（-）， 陽性細胞百分率>5%判為陽性（+）。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組尿道狹窄發(fā)生情況比較 置入粒子組形成尿道狹窄的1例（12.5%）， 未置入粒子組形成尿道狹窄的7例（100.0%）， 比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2. 2 兩組尿道組織中的TGF β1的表達比較 置入粒子組尿道瘢痕組織的TGF β1表達較未置入粒子組少， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

1994年Bosnjakovic等[4]利用犬尿道狹窄模型， 研究了尿道內(nèi)支架置入療效； 2008年曹軍等[5]學者研究了犬尿道瘢痕組織中的TGF β1表達， 研究表明了尿道狹窄犬中的TGF β1表達增高。本文研究中仍然選擇犬模型制作尿道狹窄動物模型的原因是雄犬個體較大， 其尿道有尿道海綿體支撐， 組織形態(tài)更加類似人類的尿道情況。并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)尿道狹窄的犬中TGF β1表達增高， 說明TGF β1表達增高和犬尿道狹窄的發(fā)生是正相關的。本組研究對粒子植入犬和尿道狹窄犬進行TGF β1表達的比較， 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)粒子植入犬的TGF β1表達低于尿道狹窄犬?？紤]粒子植入可以抑制尿道狹窄。

瘢痕的形成是尿道狹窄和閉鎖的主要原因[6]。增生性瘢痕形成的原因[7]是由于微血管內(nèi)皮增生致使血管閉塞導致組織缺氧， 從而刺激血管再生， 引起纖維組織增生和過量的膠原形成， 而膠原形成主要受細胞因子的調(diào)控如TGF β1。Levy[8]等采用X線、β射線、光子束防治瘢痕疙瘩取得良好效果。而在2000年， 孫穎浩等[9]采用192Ir（銥）對復發(fā)性尿道狹窄患者進行了腔內(nèi)放療， 劑量為1000～1500 cGy， 說明腔內(nèi)放療對新生瘢痕有抑制作用。目前雖然對尿道狹窄的放療有了一定的研究進展， 然而針對動物的理論研究仍處于空白， 而且尚不明確放療作用于尿道瘢痕組織的何種因子。本實驗研究正好填補了放療在犬良性尿道狹窄研究中的空白。應用膀胱鏡對尿道瘢痕情況進一步驗證， 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)粒子植入犬尿道瘢痕組織較尿道狹窄犬的尿道組織的TGF β1表達少， 而且膀胱鏡檢查的結(jié)果和TGF β1的結(jié)果是一致的。

125I核素衰變過程中發(fā)射出γ射線， 而該射線能量為36 keV， 有穿通力弱的特點， 即使尿道黏膜較脆弱， 也不會對深部組織造成損害[10]。本組研究中， 置入粒子組8只尿道狹窄犬經(jīng)過粒子植入后有7只未復發(fā)， 而未置入粒子組尿道狹窄發(fā)生率約100.0%， 說明腔內(nèi)放療可抑制尿道瘢痕形成， 有助于預防尿道狹窄復發(fā)。在瘢痕形成過程中成纖維細胞的生物學效應主要受細胞因子的調(diào)控， 如TGF β1等， 是目前已知的與瘢痕過度形成關系最為密切的細胞因子， 研究表明抑制TGF β1表達進而抑制瘢痕的形成[11-13]。而且本文研究中植入125I粒子的犬尿道狹窄， 通過病理活檢發(fā)現(xiàn)TGF β1的表達減少， 說明125I粒子植入有助于預防良性尿道狹窄術(shù)后復發(fā)。

本次研究結(jié)果顯示， 置入粒子組形成尿道狹窄的1例（12.5%）， 未置入粒子組形成尿道狹窄的7例（100.0%）， 比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。標本中125I粒子植入組的TGF β1表達低于對照組（P<0.05）。

綜上所述， 125I粒子植入對預防尿道狹窄有重要作用， 其抑制了TGF β1表達， 進而抑制瘢痕形成， 這為臨床研究提供了動物實驗的實驗依據(jù)， 對于其他相關的臨床研究具有一定的指導意義。

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[收稿日期：2016-06-20]