昆明龍膽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步探究

趙明智　張慶芝　趙萌萌　陳鈺沁 *

1.昆明醫(yī)科大學(xué)海源學(xué)院，云南　昆明　650106；2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南　昆明　650500；3. 黑龍江省傳染病防治院，黑龍江　哈爾濱　150500

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昆明龍膽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步探究

趙明智1張慶芝2趙萌萌3陳鈺沁1*

1.昆明醫(yī)科大學(xué)海源學(xué)院，云南昆明650106；2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500；3. 黑龍江省傳染病防治院，黑龍江哈爾濱150500

目的：為昆明龍膽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究提供參考依據(jù)。方法：按照藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，對(duì)昆明龍膽進(jìn)行較為系統(tǒng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。結(jié)果：對(duì)昆明龍膽的植物來(lái)源、藥材性狀、顯微鑒別、理化鑒別及檢查進(jìn)行描述。結(jié)論：初步制定昆明龍膽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

昆明龍膽；鑒別；檢查

龍膽，苦，寒，歸肝、膽經(jīng)。具有清熱燥濕，瀉肝膽火的功效。用于濕熱黃疸、陰癢陰腫、帶下、濕熱瘙癢、肝火目赤、耳鳴耳聾、脅痛口苦、驚風(fēng)抽搐[1]。《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)收載龍膽品種為：龍膽科植物條葉龍膽Gentianamanshurica. Kitag、龍膽Gentianascabra. Bge、三花龍膽Gentianatriflora.或堅(jiān)龍膽gentianarigescens. Franch.的干燥根及根莖[1]。條葉龍膽、龍膽和三花龍膽主要分布在東北地區(qū)，以野生為主，兼有部分栽培品供應(yīng)市場(chǎng)。堅(jiān)龍膽主要分布在云南、四川、廣西、湖南及貴州等海拔在1100～3000m的山坡草地、灌木叢、林下及山谷中。由于連年采挖，資源銳減，使得尋找堅(jiān)龍膽資源的研究成為必要。

昆明龍膽與堅(jiān)龍膽為同屬植物，為龍膽科Gentianaceae龍膽屬Gentiana植物昆明龍膽Gentianaduclouxii. Franch的干燥全草，分布于滇中山區(qū)?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》(2015年版)中規(guī)定堅(jiān)龍膽含龍膽苦苷不得少于1.5%[1]。文獻(xiàn)報(bào)道昆明龍膽不同部位龍膽苦苷含量均大于2.4%[2]?？梢猿醪綖槔ッ鼾埬懽鳛閳?jiān)龍膽的資源提供依據(jù)。為有效開(kāi)發(fā)和利用昆明龍膽這一資源，特對(duì)昆明龍膽全草進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為今后昆明龍膽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供詳盡的科學(xué)依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器RM 2235輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)(德國(guó)Leica)、高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)、80i生物數(shù)碼攝影顯微鏡(日本Nikon)、HI1220熔片爐(德國(guó)Leica)、恒溫水浴鍋(深圳國(guó)華儀器廠)、101A-2電熱干燥箱(寧波自動(dòng)化儀表廠)、KQ-3200B超聲波清洗器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)、HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)、CS101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(重慶試驗(yàn)設(shè)備廠)、ZHWY-103D 恒溫振蕩箱(上海智城分析儀器制造有限公司)、JJ1000型精密電子天平(常熟雙杰測(cè)試儀器廠)、BS224S 分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)、CS101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(重慶試驗(yàn)設(shè)備廠)、電阻爐(上海意豐電爐有限公司)、高效液相色譜儀(Dionex Ultimate 3000 系列，USA、色譜柱：依利特惠杰型 (4.6×250mm，5μm)、薄層層析硅膠G板(青島海洋化工廠)；

1.2材料龍膽苦苷對(duì)照品(批號(hào)：110770-200611，中國(guó)藥品生物制品檢定所)。甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。昆明龍膽見(jiàn)表1，由云南中醫(yī)學(xué)院張慶芝教授鑒定。

表1　昆明龍膽的來(lái)源

2　方法與結(jié)果

2.1植物來(lái)源標(biāo)本來(lái)源見(jiàn)表1，經(jīng)鑒定為龍膽科植物昆明龍膽GentianaDuclouxiiFranch.，標(biāo)本存于云南中醫(yī)學(xué)院標(biāo)本館。

本品為多年生草本，高3～5cm。須根肉質(zhì)。主莖直立或平臥呈匍匐狀，淡黃褐色，長(zhǎng)可達(dá)8～9cm，有分枝。葉大部分基生，呈蓮座狀，葉片匙形或矩圓狀倒披針形，先端鈍圓，基部漸狹，長(zhǎng)1～4cm，寬0.5～1.2cm，邊緣微外卷，光滑，葉柄具狹翅，長(zhǎng)1～4cm；莖生葉2～3對(duì)，與基生葉相似而略小，葉片長(zhǎng)8～10mm，寬2.5～3mm，葉柄長(zhǎng)1～10mm?；ㄖ?～8個(gè)呈黃綠色，由葉腋中抽出，具1～3朵花，花簇生于枝端；無(wú)花梗；花萼呈狹倒錐形，長(zhǎng)1～1.5cm，裂片小，呈三角形或鉆形，先端急尖，彎缺圓形或截形，長(zhǎng)1～2mm；花冠呈薔薇色，漏斗形，冠檐具多數(shù)藍(lán)色斑點(diǎn)，長(zhǎng)3～4cm，裂片卵狀三角形，長(zhǎng)4～5mm，先端鈍，全緣，褶偏斜，長(zhǎng)1.5～2mm，邊緣有整齊細(xì)齒；雄蕊不整齊，著生于冠筒下部，花絲線形，長(zhǎng)10～14mm，花藥矩圓形，長(zhǎng)1～1.3mm，子房呈線狀橢圓形，兩端漸狹，長(zhǎng)1.2～1.5cm，柄長(zhǎng)1～1.9cm，花柱線形，長(zhǎng)3～4mm，柱頭2裂，裂片線形。蒴果，橢圓形，長(zhǎng)1.7～2cm，柄長(zhǎng)至2cm；種子矩圓形，淡黃色，有光澤，長(zhǎng)約1mm，表面具蜂窩狀網(wǎng)隙。與文獻(xiàn)表述一致[3]。見(jiàn)圖1。

2.2藥材性狀根據(jù)應(yīng)用情況及擴(kuò)大昆明龍膽應(yīng)用范圍，本品藥用部位選用全草。通過(guò)對(duì)新平磨盤(pán)山、峨山縣塔甸鄉(xiāng)、新化光頭山三個(gè)產(chǎn)地產(chǎn)昆明龍膽藥材的比較，性狀無(wú)明顯差異。根莖多直生，呈圓柱形，呈不規(guī)則結(jié)節(jié)狀，長(zhǎng)約1～3cm，直徑約0.1～0.3cm。表面暗灰棕色或棕褐色，上有殘莖殘留，基部可見(jiàn)殘存麟葉，周?chē)拖露酥鄶?shù)細(xì)長(zhǎng)的根。根呈圓柱形，細(xì)長(zhǎng)，稍彎曲，長(zhǎng)5～9cm，直徑約0.1～0.3cm，有的外皮脫落。表面淡黃色或黃棕色，有縱皺紋及支根痕，質(zhì)堅(jiān)硬，易折斷，斷面可見(jiàn)白色木心。葉大部分基生，呈蓮座狀，葉片匙形或矩圓狀倒披針形，先端鈍圓，基部長(zhǎng)漸狹，邊緣微外卷，光滑，長(zhǎng)1～4cm，寬0.5～1.2cm，中脈在上面不明顯或凹下，在下面稍突起，葉柄長(zhǎng)1～3.5cm，具狹翅；莖生葉2～3對(duì)，與基生葉相似而略小，葉片長(zhǎng)8～10mm，寬2.5～3mm，葉柄長(zhǎng)1～10mm。氣微味苦。與文獻(xiàn)表述一致[4]，見(jiàn)圖2。

2.3顯微鑒別

2.3.1根橫切面復(fù)表皮由2列細(xì)胞組成，細(xì)胞壁在角隅處增厚。皮層為3～8列細(xì)胞，細(xì)胞類(lèi)圓形或切向延長(zhǎng)成長(zhǎng)圓形。內(nèi)皮層細(xì)胞明顯，類(lèi)方形或長(zhǎng)方形，每個(gè)細(xì)胞被縱向壁分割為2～5個(gè)子細(xì)胞。韌皮部較寬廣，有散在的篩管群。外側(cè)細(xì)胞較大，呈多角形，內(nèi)側(cè)細(xì)胞較小，呈類(lèi)方形，韌皮部細(xì)胞排列緊密。形成層不明顯。木質(zhì)部排列呈環(huán)狀；導(dǎo)管呈放射狀緊密排列，內(nèi)側(cè)導(dǎo)管大小相近，較整齊。射線細(xì)胞1到多列不等。髓部較寬廣，有眾多散在的髓維管束。與文獻(xiàn)表述一致[4]。2.3.2根莖橫切面木栓層數(shù)列，外側(cè)易脫落,可見(jiàn)根跡維管束。皮層為3～8列細(xì)胞，細(xì)胞類(lèi)圓形或切向延長(zhǎng)成長(zhǎng)圓形。內(nèi)皮層細(xì)胞明顯，長(zhǎng)方形或類(lèi)方形，每個(gè)細(xì)胞被縱向壁分割為2～5個(gè)子細(xì)胞。維管束4個(gè)，韌皮部寬廣，有散在的篩管群。韌皮部細(xì)胞排列緊密。束中形成層較明顯，束間形成層不明顯。導(dǎo)管呈放射狀緊密排列，內(nèi)側(cè)導(dǎo)管較小，外側(cè)導(dǎo)管較大，較整齊。髓部寬廣，有眾多散在的髓維管束。皮層韌皮薄壁細(xì)胞及髓部薄壁細(xì)胞中均含有細(xì)小的草酸鈣棱晶及針晶。見(jiàn)圖3。

2.3.3葉橫切面上下表面呈波狀。①上下表皮由1列細(xì)胞組成，外被角質(zhì)層，排列較整齊。上表皮細(xì)胞較大。下表皮細(xì)胞較小，氣孔少見(jiàn)。②柵欄組織由1～3列長(zhǎng)柵狀細(xì)胞組成，不通過(guò)主脈。海綿組織排列疏松。③主脈維管束雙韌型，呈圓形。側(cè)脈維管束8個(gè)，雙韌型，左右對(duì)稱(chēng)，大小交替排列。與文獻(xiàn)表述一致[4]。2.3.4粉末特征黃綠色，氣味微苦。①花粉粒常見(jiàn)，單個(gè)或數(shù)個(gè)存在，直徑3～20μm。②導(dǎo)管常見(jiàn)具緣紋孔導(dǎo)管及螺紋導(dǎo)管。具緣紋孔導(dǎo)管直徑8～35μm，螺紋導(dǎo)管直徑10～15μm。③內(nèi)皮層細(xì)胞類(lèi)方形或長(zhǎng)形，細(xì)胞壁念珠狀增厚。④韌皮薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形或類(lèi)方形，細(xì)胞壁較厚，可見(jiàn)細(xì)胞間隙，直徑40～70μm。⑤葉下表皮細(xì)胞形狀不規(guī)則，細(xì)胞壁波狀彎曲，氣孔不等式，副衛(wèi)細(xì)胞3～4個(gè)。⑥可見(jiàn)大量油滴，直徑2～25μm。⑦葉上表皮細(xì)胞呈多角形、類(lèi)圓形、類(lèi)方形，直徑約50～110μm。細(xì)胞壁薄，呈念珠狀增厚。見(jiàn)圖4。

2.4理化鑒別取不同產(chǎn)地、不同部位藥材粉末約1g，加甲醇10mL，超聲處理45min，放置室溫，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，濃縮至5mL，作為供試品溶液，另取龍膽苦苷對(duì)照品5.0mg加甲醇溶解，定容至10mL，制成0.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，照《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版四部通則0502薄層色譜法)進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板薄層板上，以三氯甲烷：甲醇 (5∶1)為展開(kāi)系統(tǒng)，展開(kāi)后，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇溶液顯色，在105℃加熱至半點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果表明，供試品溶液與對(duì)照品龍膽苦苷溶液在相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。見(jiàn)圖5。

2.5檢查

2.5.1水分按照《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版四部通則0832水分測(cè)定法第二法)測(cè)定各產(chǎn)地昆明龍膽藥材水分含量，結(jié)果見(jiàn)表2。平均值為10.16%。根據(jù)測(cè)定情況結(jié)合一般養(yǎng)護(hù)經(jīng)驗(yàn)，水分限量不超過(guò)12.0%。

2.5.2總灰分及酸不溶性灰分按照《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版四部通則2302灰分測(cè)定法)測(cè)定各產(chǎn)地昆明龍膽藥材總灰分(表3)及酸不溶性灰分(表4)。

由于本品產(chǎn)地不同，及采收時(shí)間稍有差異，灰分限量確定為不超過(guò)9.0%，酸不溶性灰分限量確定為不超過(guò)5.0%。

2.5.3重金屬檢查按照《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版四部通則0821重金屬檢查法第二法)對(duì)昆明龍膽藥材進(jìn)行重金屬檢查，昆明龍膽藥材五個(gè)批次供試品溶液顏色均比對(duì)照品溶液顏色淺，說(shuō)明五個(gè)批次昆明龍膽藥材中重金屬不超過(guò)10ppm，檢查結(jié)果符合規(guī)定。表明昆明龍膽重金屬檢查合格。

表2　昆明龍膽含水量測(cè)定結(jié)果

表3　昆明龍膽總灰分測(cè)定結(jié)果

表4　昆明龍膽酸不溶性灰分測(cè)定結(jié)果

2.5.4浸出物按照《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版四部通則2201浸出物測(cè)定法)測(cè)定熱水浸出物結(jié)果見(jiàn)表5；冷水浸出物結(jié)果見(jiàn)表6；熱醇浸出物結(jié)果見(jiàn)表7；冷醇浸出物結(jié)果見(jiàn)表8。

表5　水溶性浸出物(熱浸法)測(cè)定結(jié)果

表6　水溶性浸出物(冷浸法)測(cè)定結(jié)果

表7　醇溶性浸出物(熱浸法)測(cè)定結(jié)果

表8　醇溶性浸出物(冷浸法)測(cè)定結(jié)果

由于本品產(chǎn)地、采收時(shí)間等對(duì)藥材質(zhì)量有影響，適當(dāng)下浮來(lái)設(shè)定限度較符合情況，因而限量確定為熱水浸出物不少于24.0%；冷水浸出物不少于21.0%；熱醇浸出物不少于24.0%；冷醇浸出物不少于18.0%。

4　討論

龍膽始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代醫(yī)書(shū)都有重要記載，傳統(tǒng)認(rèn)為，龍膽具有清熱燥濕、瀉肝膽火的功效，主治濕熱黃疸、陰腫陰癢、帶下、濕疹瘙癢、目赤、耳聾、脅痛、口苦、驚風(fēng)抽搐等癥。其主要成分龍膽苦苷具有抗炎[5]、鎮(zhèn)痛[6]、保肝[7]、健胃[8]作用。另外，有文獻(xiàn)報(bào)道，龍膽苦苷可抑制人肝癌細(xì)胞的增殖[9]、對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549有一定的抑制作用[10]、能增加膽汁分泌量[11]、具有抗菌和清除自由基作用[12]、有一定的體外抑菌效果[13]及對(duì)胃腸平滑肌有松弛作用[14]。

昆明龍膽為龍膽科龍膽屬植物，此屬植物大都具有清熱利濕的功效是治療黃疸、肝炎、頭痛發(fā)燒的主藥，經(jīng)理化鑒別及薄層色譜鑒別，均證明昆明龍膽含有龍膽苦苷成分，采用高效液相色譜法對(duì)昆明龍膽進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明昆明龍膽中龍膽苦苷的含量超過(guò)《中華人民共和國(guó)藥典》(2005年版)對(duì)龍膽藥材1.0%的含量限度要求[16]，可以為有效開(kāi)發(fā)昆明龍膽這一資源提供依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

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[3] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì)．《中國(guó)植物志》[M].北京：科學(xué)出版社，2006.

[4] 張慶芝，楊樹(shù)德，莊緒會(huì)，等．昆明龍膽的生藥學(xué)研究[J]．云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，31(4)：13-16.

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(編輯：陶希睿)

The Preliminary Study on Quality Criterion ofGentianaDuclouxii.Franch

ZHAO Mingzhi1ZHANG Qingzhi2ZHAO Mengmeng3CHEN Yuqin1*

1.Kunming Medical University Haiyuan College, Kunming 650106,China；2.Yunnan University of TCM,Kunming 650500，China；3.Heilongjiang Hospital for Prevention and Treatment of Tuberculosis, Harbin,150500,China

Objective to provide reference for the establishment of quality criterion ofGentianaDuclouxii.Franch. MethodBy According to the requirement of the quality standard of the medicinal , has been systematically investigated the quality of Gentiana Duclouxii.Franch. Result To describe Plant origin、Medicinal properties、Microscopic identification、Physical and chemical identification、Physicalchemical identification and inspect ofGentianaDuclouxii.Franch. Conclusion preliminary formulate the quality criterion ofGentianaDuclouxii.Franch.

GentianaDuclouxii.Franch; Identify; Inspect

2016-06-29

趙明智(1984-)，男，助教，碩士研究生。

陳鈺沁，E-mail:cyq379@126.com

R282.5

A

1007-8517(2016)16-0033-05