不同年齡稽留流產(chǎn)患者絨毛染色體異常特點觀察

黃存 　潘維君

[摘 要] 目的：觀察不同年齡段稽留流產(chǎn)患者絨毛染色體異常與流產(chǎn)關系。方法：選擇2012年至2015年在安徽省馬鞍山市婦幼保健院生殖中心就診的稽留流產(chǎn)54例患者，在人工流產(chǎn)同時無菌留取絨毛組織進行染色體分析，分為≥35歲、30～34歲、≤30歲三組，分析各組絨毛染色體異常特點。結(jié)果：≥35歲組異常核型百分比及數(shù)目異常核型占比高于其余兩組，組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。30～34歲組和≤30歲組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論：絨毛染色體核型異常是稽留流產(chǎn)主要原因，≥35歲孕婦絨毛染色體異常核型風險增高，對存在染色體結(jié)構異常者建議進一步檢查，降低再次稽留流產(chǎn)發(fā)生率。

[關鍵詞] 絨毛染色體；年齡；稽留流產(chǎn)

中圖分類號：R731.9 文獻標識碼：B 文章編號：2095-5200（2016）04-102-03

DOI：10.11876/mimt201604039

稽留流產(chǎn)又稱過期流產(chǎn)。是指胚胎或胎兒已死亡滯留宮腔內(nèi)未能及時自然排出者[1]。引起稽留流產(chǎn)的原因有多種，包括遺傳、子宮結(jié)構、內(nèi)分泌、免疫、血栓形成傾向、感染以及環(huán)境因素等。大量文獻報道，胎兒染色體異常是稽留流產(chǎn)的主要原因，胚胎染色體異常導致流產(chǎn)占50%～60%[2]。2012年以來我院開始對稽留流產(chǎn)患者絨毛染色體進行分析，探討不同年齡段孕婦絨毛染色體異常與稽留流產(chǎn)關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2012年至2015年在我院生殖中心診斷為稽留流產(chǎn)，要求行絨毛染色體檢查患者為研究對象。54例中≥35歲14例，30～34歲20例，≤30歲20例，孕周為8～13周。

1.2 絨毛染色體觀察方法

電動吸引器真空吸引絨毛組織，無菌生理鹽水漂洗抽吸取得絨毛組織去除血液，夾取絨毛組織約0.1g，去除蛻膜等異物，將絨毛組織剪成粥樣。15mL無菌離心管加入1.5mL絨毛膜細胞處理液，放入剪碎絨毛組織立即搖勻。離心管置37℃水浴內(nèi)，間歇搖動離心管，5～10min后觀察組到絨毛組織松開并可見到細胞時，離心后棄上清，加入培養(yǎng)液吹打使細胞重新懸浮，轉(zhuǎn)移細胞懸液至兩個培養(yǎng)瓶。置CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察細胞生長情況，見到梭形細胞克隆，換液，見到較多圓形及雙圓形細胞后收獲。如果絨毛組織新鮮有活性，接種后10天左右可收獲，若組織中活性細胞少則培養(yǎng)時間長達3～4周，超過1個月細胞仍不生長，為培養(yǎng)失敗[3]。對收獲細胞進行染色體制片分析，G顯帶320～400范圍。

1.3 統(tǒng)計學方法

SPSS19.0進行統(tǒng)計分析，異常構成百分比以n（%）表示，組間χ2檢查。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段染色體結(jié)果

54例稽留流產(chǎn)患者胚胎絨毛樣本均培養(yǎng)成功，成功率 100%。異常核型32例，占59.2%。

如表1所示，≥35歲組14例中正常核型4例，異常核型10例，占71.6%（10/14），異常核型中以常染色體三體多見，未見結(jié)構異常；30～34歲組20例中正常核型9例，異常核型11例，占55%（11/20），異常核型中以三倍體及常染色體單三體多見，結(jié)構異常1例；≤30歲20例中正常核型9例，異常核型11例，占55%（11/20），異常核型中以三倍體及常染色體單三體多見，結(jié)構異常1例。≥35組異常核型百分比高于其余兩組，組間差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 不同年齡組異常核型占比比較

參照馬光娟等[4]研究方法，計算各組異常核型構成比。結(jié)果如表2所示，≥35歲組數(shù)目異常核型占比高于30～34歲組和≤30歲組，組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。30～34歲組和≤30歲組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

3 討論

流產(chǎn)病因復雜而不確定，反復流產(chǎn)者病因也不固定，多年研究發(fā)現(xiàn)，染色體異常是流產(chǎn)主要原因[5-6]，絨毛細胞是胚胎外胚層細胞，具有與胚胎組織相同遺傳性狀[7]。

本研究中各組染色體異常絕大部分屬數(shù)目異常，常染色體三體占主要部分，≥ 35歲組染色體結(jié)構異常三倍體發(fā)生比例較低，非整倍體占異常染色體90%（9/10），在其他兩組分別是45.5%（5/11）和63.6%（7/11），常染色體三體異常占比為主，與文獻報道一致[8-9]。本研究顯示≥35組數(shù)目異常核型占比高于30～34歲組和≤30歲組，35歲以上女性，卵巢儲備功能下降，卵泡質(zhì)量下降，容易出現(xiàn)紡錘體老化，導致染色體不分離，使三體發(fā)生率增加[10]。本研究見3例染色體核型示結(jié)構異常，47，XY，+5，13P+，其中13P+屬于染色體多態(tài)性，是染色體微小變異，文獻報道[11]，15p+ 多為家族性變異染色體，但一般不會有臨床效應。46，XY，-8，+t（8：？）及46，XX，-18，+？18兩例均缺失了一條正常常染色體，而由一條可疑異常常染色體替代，對這兩對夫婦外周血染色體進行分析，核型均屬于正常。

文獻報道[12]，反復流產(chǎn)者絨毛染色體異常概率會增加。本研究病例有限未對流產(chǎn)次數(shù)與核型異常率相關性進行研究。胚胎植入前遺傳學診斷（PGD）或篩查（PGS），即在體外受精-胚胎移植（IVF）基礎上，對具有遺傳風險夫婦卵母細胞或植入前胚胎進行活檢[13]，選擇正常胚胎進行移植。其中PGD適用于攜帶有遺傳性疾病或遺傳風險患者[14-15]，PGS適用于染色體非整倍性篩查[16]。若能證實自然流產(chǎn)次數(shù)與異常率相關，那么針對反復流產(chǎn)絨毛染色體核型連續(xù)為非整倍體者，下次妊娠胎兒染色體異常風險增加，可以考慮行PGD。

對稽留流產(chǎn)患者進行絨毛染色體分析，發(fā)現(xiàn)本次流產(chǎn)病因并對下一次妊娠有重要指導意義。采用熒光原位雜交（FISH）技術檢測稽留流產(chǎn)絨毛染色體[17]快速簡便，不須細胞培養(yǎng)。但是該技術成本費用較高，檢查范圍局限，且僅能檢查部分非整倍體染色體，對結(jié)構異常者亦無法診斷，短時間內(nèi)在馬鞍山地區(qū)廣泛開展意義不大。我院目前絨毛培養(yǎng)技術比較成熟，采用培養(yǎng)法檢測絨毛染色體核型有一定優(yōu)勢，今后工作中要注意組織取材和保存，保持良好培養(yǎng)率。

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