• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    涼州熏醋釀造過程產(chǎn)乙偶姻酵母菌篩選及其發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

    2016-09-10 06:54:45趙風琴贠建民趙小瑞李宏珍賈亞莉
    食品工業(yè)科技 2016年11期
    關鍵詞:食醋氮源發(fā)酵液

    趙風琴,贠建民,趙小瑞,李宏珍,賈亞莉

    (甘肅農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院,甘肅蘭州 730070)

    ?

    涼州熏醋釀造過程產(chǎn)乙偶姻酵母菌篩選及其發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

    趙風琴,贠建民*,趙小瑞,李宏珍,賈亞莉

    (甘肅農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院,甘肅蘭州 730070)

    乙偶姻是涼州熏醋特征風味成分四甲基吡嗪的前體。本實驗從涼州熏醋發(fā)酵料醅中分離獲得了一株產(chǎn)乙偶姻酵母菌T8,通過經(jīng)典鑒定方法結(jié)合ITS基因測序的方法,確定其為葡萄汁有孢漢遜酵母(Hanseniasporauvarum)。為探明T8菌株生長及代謝產(chǎn)乙偶姻的營養(yǎng)需求,本實驗對產(chǎn)乙偶姻酵母菌T8發(fā)酵培養(yǎng)基進行了優(yōu)化,以期為傳統(tǒng)食醋釀造工藝現(xiàn)代化改造過程中人工接種增香酵母種子的制備提供培養(yǎng)基。通過研究不同碳源、氮源、無機鹽對T8菌株產(chǎn)乙偶姻的影響,確定了發(fā)酵培養(yǎng)基的最終組分:葡萄糖60 g/L,蛋白胨10 g/L,酵母膏10 g/L,(NH4)2HPO48 g/L,KH2PO40.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.75 g/L,MnSO40.6 g/L。培養(yǎng)基優(yōu)化后,乙偶姻產(chǎn)量達到15.236 g/L,與初始發(fā)酵培養(yǎng)基相比提高了20.65%。人工接種T8菌株種子液所釀食醋中四甲基吡嗪的含量較對照提高了22.1%,增香效果明顯,證明H.UvarumT8菌株可以作為食醋釀造的增香酵母。

    食醋釀造,乙偶姻,酵母菌,發(fā)酵培養(yǎng)基,優(yōu)化

    涼州熏醋是甘肅名優(yōu)產(chǎn)品,采用傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵技術,經(jīng)糖化、酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵三個階段釀造而成[1]。四甲基吡嗪是涼州熏醋特征風味成分,它與其它揮發(fā)性成分共同作用,形成了涼州熏醋酸不澀口、醇厚綿長、濃郁和諧、口感柔和的品質(zhì)特點[2-3]。

    研究報道表明,乙偶姻是四甲基吡嗪的前體物質(zhì),可由微生物代謝產(chǎn)生,具有奶香味,是一種重要的食品風味物質(zhì),廣泛存在于多種發(fā)酵食品中[4]。目前已報道的產(chǎn)乙偶姻微生物多為細菌,如醋酸菌(Acetobacter)、乳球菌(Galactococcus)、腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)、沙門氏菌(Salmonella)等[5-6],但有關酵母菌產(chǎn)乙偶姻的研究報道相對較少。而酵母菌是涼州熏醋酒精發(fā)酵階段的主要功能菌,除了代謝生產(chǎn)酒精外,對食醋風味的形成也至關重要[7]。因此,篩選高產(chǎn)乙偶姻酵母菌及人工接種增香酵母是提高傳統(tǒng)食醋風味的可能途徑,探明產(chǎn)乙偶姻酵母菌株在菌體生長及代謝過程的營養(yǎng)需求顯得非常重要,可為增香菌株的人工接種種子液的制備提供理論依據(jù)。

    為此,本實驗依據(jù)微生物營養(yǎng)學基本原理,采用單因素及正交設計,擬對所分離酵母菌T8產(chǎn)乙偶姻發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化研究,旨在為涼州熏醋釀造過程酒精發(fā)酵階段人工接種增香酵母菌種子液的制備提供優(yōu)良的培養(yǎng)基,以期實現(xiàn)傳統(tǒng)食醋釀造工藝的現(xiàn)代化改造,改善食醋的風味和品質(zhì)。

    1 材料與方法

    1.1材料及儀器

    涼州熏醋發(fā)酵第3 d酒醅由甘肅益民食品有限公司提供。

    酵母菌分離培養(yǎng)基(YEPD):葡萄糖20 g,酵母膏10 g,蛋白胨20 g,瓊脂20 g,蒸餾水1000 mL,121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min,備用。

    初始發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖80 g,酵母膏20 g,蛋白胨10 g,KH2SO41 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,(NH4)2SO42 g,MnSO40.2 g,蒸餾水1000 mL,121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

    DH-600A臺式恒溫振蕩器上海躍進醫(yī)療器械廠;SW-CJ-1FD潔凈工作臺蘇州安泰空氣技術有限公司;PHS-3C型pH計上海佑科儀器儀表有限公司;HHS型電熱恒溫水浴鍋上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠;UV756CRT紫外可見分光光度計上海佑科儀器儀表有限公司;FA1004B電子天平上海佑科儀器儀表有限公司;101-1-S-Ⅱ電熱恒溫培養(yǎng)箱北京科偉永興儀器有限公司;YX280B手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器上海三申醫(yī)療器械有限公司;GC 6890N 氣相色譜儀、DB-WAX 色譜柱美國 Agilent scientific公司;頂空固相微萃取裝置、DVB/CAR/PDMS萃取器美國surpelco公司。

    1.2實驗方法

    1.2.1菌種分離純化采用梯度稀釋平板法對所需菌株進行分離[8]。采用分光光度法結(jié)合氣相色譜法[9]測定所分離菌株初始發(fā)酵培養(yǎng)基中乙偶姻的含量,篩選出產(chǎn)乙偶姻最高的菌株。

    1.2.2菌種鑒定形態(tài)學及生理生化鑒定參照《酵母菌特性及鑒定手冊》[10],采用經(jīng)典鑒定方法,通過菌體形態(tài)觀察,子囊孢子、擲孢子、假菌絲的形成,以及相應的生理生化實驗對菌株進行鑒定。

    將提取的基因組DNA委托甘肅金博研生物科技有限公司進行ITS序列擴增測序。測序結(jié)果提交GenBank數(shù)據(jù)庫,將得到的基因序列通過BLAST程序提交,NCBI數(shù)據(jù)庫中進行同源序列檢索[11]。將目標菌株和應用Blast檢索到的與之較高的同源性菌株的ITS序列作最大同源性比較分析。

    1.2.3發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化固定因素裝液量50 mL/250 mL錐形瓶,接種量10%(v/v),30 ℃、150 r/min培養(yǎng)72 h,對培養(yǎng)基進行優(yōu)化。

    挑取一環(huán)新鮮的斜面菌種,接入液體YEPD培養(yǎng)基中,裝液量50 mL/250 mL,30 ℃、150 r/min培養(yǎng)72 h,4 ℃保藏備用。

    在初始發(fā)酵培養(yǎng)基基礎上,分別選取淀粉、蔗糖、麥芽糖、葡萄糖為單一碳源,以80 g/L的添加量配制發(fā)酵培養(yǎng)基,測定發(fā)酵液中生物量和乙偶姻含量,研究不同碳源對T8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響;設置碳源濃度為0、20、40、60、80、100、120 g/L,測定發(fā)酵液中還原糖、生物量、乙偶姻含量,篩選最佳碳源濃度;分別選取玉米漿、蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、硝酸銨為單一氮源,以20 g/L的添加量配制發(fā)酵培養(yǎng)基,測定發(fā)酵液中生物量和乙偶姻含量,研究不同氮源對T8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響;設置酵母膏/蛋白胨含量為10 g/10 g(1∶1)、10 g/20 g(1∶2)、15 g/10 g(1.5∶1)、15 g/20 g(1.5∶2)、20 g/10 g(2∶1),測定發(fā)酵液中生物量和乙偶姻含量,確定復合有機氮源的最佳比例。在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加不同濃度的(NH4)2HPO40、2、4、6、8、10 g/L進行實驗,測定發(fā)酵液中pH、生物量和乙偶姻含量,研究(NH4)2HPO4對T8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響。

    根據(jù)微生物生長代謝以及產(chǎn)乙偶姻的營養(yǎng)要求[12,14],選取KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4為無機鹽配置發(fā)酵培養(yǎng)基,采用正交實驗設計研究K+、Mg2+、Mn2+對T8產(chǎn)乙偶姻的影響,因素水平表見表1。

    表1 正交實驗因素水平表(g)

    1.2.4分析方法(1)乙偶姻的測定方法:肌酸甲萘酚法[13-14]

    乙偶姻含量計算公式為

    其中:V-樣本體積,n-稀釋倍數(shù)。

    (2)還原糖含量測定:采用3,5-二硝基水楊酸比色法[15];

    (3)pH測定:采用pH計對發(fā)酵液pH進行測定;

    (4)生物量的測定:恒重法[16];

    (5)四甲基吡嗪的測定方法:氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[17]。

    1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    使用Excel 2010軟件處理數(shù)據(jù),計算標準偏差(±SE)并繪制折線圖、柱形圖。使用SPSS 19.0進行正交分析以及單因素方差分析(p<0.05為差異顯著)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1分離篩選結(jié)果

    將從涼州熏醋發(fā)酵第3 d酒醅中分離獲得的176株酵母菌分別接入初始發(fā)酵培養(yǎng)基中,裝液量為50 mL/250 mL三角瓶,30 ℃培養(yǎng)72 h。發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵液8000 r/min離心10 min,采用分光光度法測定各菌株發(fā)酵液中乙偶姻含量,選取發(fā)酵液中乙偶姻含量較高的前20株菌株采用氣相色譜(GC)進行二次發(fā)酵篩選,檢測發(fā)酵液中乙偶姻的含量,以不接種的樣品為對照,其中T8菌株發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的含量最大,達到11.642 g/L。

    表3 T8菌株基因比對結(jié)果

    2.2菌株鑒定

    2.2.1菌株形態(tài)學及生理生化鑒定根據(jù)表2實驗結(jié)果,查閱《酵母菌特性及鑒定手冊》,對已分離的T8酵母菌株進行初步鑒定,屬于漢遜酵母屬(Hanseniaspora)。

    表2 T8菌體形態(tài)及生理生化鑒定結(jié)果

    注:“+”代表陽性,“-”代表陰性。

    2.2.2菌株分子生物學鑒定對篩出菌株進行ITS基因序列分析,提取其DNA,進行PCR擴增,擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測,電泳結(jié)果如圖1所示。

    圖1 T8菌株的電泳圖Fig.1 Electrophoregram of strain T8注:“1”代表T8菌株ITS基因,“2”代表Marker。

    T8菌株DNA經(jīng)PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳,在約750 bp 的位置出現(xiàn)了清晰的條帶。將純化后的 PCR 產(chǎn)物切膠回收委托甘肅金博研生物科技有限公司進行ITS測序,結(jié)果顯示該條帶大小為689 bp(GenBank accession number KT802750),提交NCBI數(shù)據(jù)庫進行Blast序列比對(表3),與葡萄汁有孢漢遜酵母菌(Hanseniasporauvarum)同源性為99%。

    2.3H.UvarumT8產(chǎn)乙偶姻發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

    2.3.1不同碳源對H.UvarumT8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響碳源不僅要滿足微生物生長繁殖的需求,還要有益于代謝產(chǎn)物的生成,因此選擇合適的碳源對微生物的生長和產(chǎn)物合成至關重要。選擇淀粉、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖四種不同碳源進行實驗,結(jié)果如圖2所示。

    由圖2可看出,H.uvarumT8均可利用淀粉、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻,以葡萄糖作為碳源時,乙偶姻產(chǎn)量最高,可達到12.090 g/L,并且葡萄糖的來源廣泛,價格相對便宜,因此選擇葡萄糖為產(chǎn)乙偶姻H.uvarumT8發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳碳源。

    2.3.2碳源最佳濃度葡萄糖是微生物生長和代謝產(chǎn)乙偶姻可利用的直接碳源,但發(fā)酵體系中葡萄糖濃度過高或過低,都不利于菌體的生長和代謝,因此需要研究葡萄糖濃度對菌體生長和乙偶姻含量的影響,結(jié)果如圖3所示。

    圖2 不同碳源對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.2 The effect of different carbon sources on acetoin fermentation注:不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),下同。

    圖3 不同濃度葡萄糖對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.3 The effect of initial glucose concentration on acetoin fermentation

    由圖3可以看出,隨著發(fā)酵液中葡萄糖濃度的增加,發(fā)酵結(jié)束時發(fā)酵體系中殘?zhí)呛恐饾u增加,生物量和乙偶姻含量均呈現(xiàn)一個先上升后下降的趨勢,發(fā)酵液中葡萄糖初始濃度為60 g/L時,乙偶姻含量達到最大。發(fā)酵液中初始葡萄糖濃度高于80 g/L時,生物量含量也開始下降,說明高濃度的葡萄糖對微生物生長有抑制作用,不利于發(fā)酵液中乙偶姻的積累,因此選擇60 g/L為最佳初始葡萄糖濃度。

    2.3.3不同氮源對H.UvarumT8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響本實驗選擇玉米漿、蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、硝酸銨為單一氮源,研究不同氮源對乙偶姻發(fā)酵的影響,結(jié)果如圖4所示。

    圖4 不同氮源對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.4 The effect of different nitrogen sources on acetoin fermentation

    從圖4可以看出,以酵母膏和蛋白胨為單一氮源時,發(fā)酵液中乙偶姻含量較高,且二者之間無顯著差異,說明蛋白胨和酵母膏對H.uvarumT8產(chǎn)乙偶姻均有顯著影響。與無機氮源相比,有機氮源更有利于菌體生長和乙偶姻的生成。為了探索最佳氮源組成,有必要進一步研究蛋白胨和酵母膏的復合比例對H.uvarumT8產(chǎn)乙偶姻的影響。

    2.3.4復合有機氮源的最佳比例通過調(diào)整發(fā)酵培養(yǎng)基中酵母膏和蛋白胨的添加量,研究不同氮源添加比例對乙偶姻發(fā)酵的影響,實驗結(jié)果如圖5所示。

    圖5 不同氮源添加比例對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.5 The effect of different nitrogen sources concentration on acetoin fermentation

    由圖5可以看出,發(fā)酵培養(yǎng)基中酵母膏和蛋白胨添加量不同,發(fā)酵結(jié)束時體系中生物量和乙偶姻含量也有所差異,隨著酵母膏與蛋白胨比例的增加,生物量和乙偶姻含量均呈現(xiàn)一個先上升后下降的過程,酵母膏:蛋白胨為1∶1時,發(fā)酵液中生物量和乙偶姻含量均達到最大,分別為7.34 g/L和14.10 g/L。為了使發(fā)酵過程中乙偶姻更好地積累,選擇發(fā)酵培養(yǎng)基中酵母膏、蛋白胨濃度均為10 g/L。

    2.3.5(NH4)2HPO4對H.UvarumT8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響(NH4)2HPO4不僅可以作為氮源被微生物代謝利用,而且(NH4)2HPO4作為一種緩沖溶液,可以對發(fā)酵體系的pH起到調(diào)節(jié)作用[18-19]。本實驗通過配制不同濃度的(NH4)2HPO4發(fā)酵培養(yǎng)基,研究(NH4)2HPO4添加量對H.uvarumT8產(chǎn)乙偶姻發(fā)酵的影響,實驗結(jié)果如圖6所示。

    圖6 不同濃度的(NH4)2HPO4對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.6 The effect of(NH4)2HPO4 concentration on acetoin fermentation

    從圖6可知,隨著(NH4)2HPO4濃度的增大,生物量趨于穩(wěn)定,乙偶姻含量呈先增加后下降的趨勢,(NH4)2HPO4濃度為8 g/L時,發(fā)酵液中乙偶姻的含量達到最大。此外,隨著(NH4)2HPO4濃度的增大,發(fā)酵液pH呈先下降,后逐漸趨于平緩的趨勢,(NH4)2HPO4濃度為8 g/L時,發(fā)酵液的最終pH為6.24,乙偶姻積累量最大,這是由于(NH4)2HPO4作為一種磷酸鹽緩沖液,可有效調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH,培養(yǎng)液中pH為中性偏酸時,有利于酵母菌生長,進而促進發(fā)酵液中乙偶姻的積累。

    2.3.6金屬離子對H.UvarumT8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響在微生物生長及代謝過程中,金屬離子除了構(gòu)成細胞成分外,K+作為一種生理調(diào)節(jié)物質(zhì),參與維持滲透壓以及氧化還原電位的平衡,pH穩(wěn)定等;Mg2+、Mn2+是酶的激活劑,能夠控制許多酶類參與的化學反應的進行[12]。根據(jù)表1所列因素和水平,以發(fā)酵結(jié)束時發(fā)酵液中乙偶姻的含量為指標,采用L9(34)正交表對發(fā)酵培養(yǎng)基中不同金屬鹽濃度進行優(yōu)化,正交設計結(jié)果和方差分析結(jié)果如表4和表5所示。

    表4 正交實驗設計及結(jié)果

    表5 正交實驗設計方差分析結(jié)果

    注:“*”表示差異顯著(p<0.05)。

    從表4正交結(jié)果可知,處理3(A1B3C3)乙偶姻含量最高。前期研究已證實了酵母菌發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的代謝途徑為:酵母菌通過糖酵解生成丙酮酸,丙酮酸在丙酮酸脫氫酶作用下生成乙酰-TPP,乙酰-TPP與乙醛在醛連接酶的作用下生成乙偶姻[20]。由方差分析(表5)可知,MgSO4·7H2O添加量對發(fā)酵液中乙偶姻含量有顯著影響,主要是由于Mg2+是PDP的主要輔助因子,而PDP和PDK共同控制丙酮酸脫氫酶的活性,進而影響發(fā)酵液中乙偶姻的含量[21-22]。通過極差分析,三種金屬鹽對乙偶姻發(fā)酵影響的主次因素為B>A>C,極差分析獲得的最佳實驗組合為A1B3C3,不需要做驗證實驗。因此確定培養(yǎng)基中無機鹽的添加量為KH2PO40.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.75 g/L,MnSO40.6 g/L。

    2.4接種T8菌株的食醋釀造驗證實驗

    按照涼州熏醋釀造工藝流程進行食醋模擬發(fā)酵實驗,在酒精發(fā)酵階段人工接種5%(v/m)釀酒酵母菌和T8種子液,醋酸發(fā)酵結(jié)束后采用GC-MS法測定發(fā)酵產(chǎn)物中四甲基吡嗪的含量,以酒精發(fā)酵階段不接種T8菌株為對照,實驗結(jié)果如表6所示。從表6可以看出,接入T8菌株后,料醅中四甲基吡嗪的含量與對照相比提高了22.1%,說明T8菌株在食醋釀造過程中有明顯的增香作用。

    表6 接種T8菌株食醋中四甲基吡嗪的含量

    3 結(jié)論

    本實驗對篩選獲得的產(chǎn)乙偶姻酵母菌T8進行了生理生化鑒定和分子生物學鑒定,確定其為葡萄汁有孢漢遜酵母(H.uvarum),可為食醋及相關發(fā)酵食品風味改善提供菌種來源。優(yōu)化的H.uvarumT8菌株發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻種子培養(yǎng)液為:葡萄糖60 g/L,蛋白胨和酵母膏復合氮源各為10 g/L,(NH4)2HPO4濃度為8 g/L,培養(yǎng)基的無機鹽組分是KH2SO40.5 g/L、MgSO4·7H2O 0.75 g/L、MnSO40.6 g/L。培養(yǎng)基組分優(yōu)化后,生物量為7.68 g/L,乙偶姻含量到達15.236 g/L,與初始發(fā)酵培養(yǎng)基乙偶姻產(chǎn)量12.090 g/L相比提高了20.65%。人工接種T8菌株種子液的食醋釀造實驗結(jié)果表明,所釀食醋中特征風味物質(zhì)——四甲基吡嗪的含量較對照提高了22.1%,增香效果明顯,證明H.UvarumT8菌株可以作為食醋釀造的增香酵母。

    [1]劉平安. 涼州熏醋釀造工藝研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學學報,2001,36(4):425-428.

    [2]高文睿,贠建民. 涼州熏醋中高產(chǎn)乙偶姻菌株的分離篩選及發(fā)酵特性初探[J]. 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全,2015(16):26-29.

    [3]陳慶安,翟丹云. 涼州熏醋的生產(chǎn)技術[J]. 中國調(diào)味品,2001,9(9):25-26.

    [4]韓慶輝,贠建民,宋勇強,等. 涼州熏醋熏醅前后揮發(fā)性成分的變化[J]. 食品工業(yè)科技,2012,33(22):146-151.

    [5]徐慧,劉建軍. 枯草芽孢桿菌HB.32產(chǎn)3-羥基丁酮分批發(fā)酵動力學[J]. 食品科學,2013,34(13):209-212.

    [6]Danilo DF,Paolo T,Francesco M,et al. Carbon material

    balances and bioenergetics of 2,3-butanediol bio-oxidation by Acetobacter hansenii[J]. Enzyme and Microbial Technology,2001,33(5):708-719.

    [7]宋剛. 微生物代謝與香氣成分[J]. 中國釀造,2006(2):64-68.

    [8]Jiajia Wu,Yingkun Ma,Fenfen Zhang,et al. Biodiversity of yeasts,lactic acid bacteria and acetic acid bacteria in the fermentation of Shanxi aged vinegar,a traditional Chinese vinegar[J]. Food Microbiology,2012,30(1):289-297.

    [9]趙洪源,贠建民,邵曉慶,等. 涼州熏醋釀造中高產(chǎn)乙偶姻醋酸菌菌株篩選及其發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 食品科學,2015,36(15):98-104.

    [10]A.巴尼特,R.W.佩恩,D.佩恩著. 胡瑞卿譯. 酵母菌的特征與鑒定手冊[M]. 1991. 青島:青島海洋大學出版社.

    [11]Hall TA. Bio Edit:A user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT[J].Nucleic Acids Symposium Series,1999(41):95-98.

    [12]周德慶. 微生物學[M]. 2002,北京:高等教育出版社.

    [13]任瀟,紀曉俊,孫世聞,等. 肌酸比色法快速測定發(fā)酵液中3-羥基丁酮的含量[J]. 食品科技,2009,34(8):260-263.

    [14]徐慧,賈士儒,劉建軍. 響應面法優(yōu)化枯草芽孢桿菌3-羥基丁酮發(fā)酵培養(yǎng)基[J]. 中國釀造,2011(8):133-137.

    [15]朱海霞,石瑛,張慶娜,等. 3,5-二硝基水楊酸(DNS)比色法測定馬鈴薯還原糖含量的研究[J]. 中國馬鈴薯,2005,19(5):266-269.

    [16]唐棠,黃乾明,楊群峰. 紅酵母Y-5產(chǎn)類胡蘿卜素培養(yǎng)基無機鹽組分的優(yōu)化[J]. 食品科學,2011,32(3):130-133.

    [17]魏永義,焦駝文,崔光,等. 食醋特征香氣成分分析研究[J]. 中國調(diào)味品,2010,35(6):99-101.

    [18]Fei Hao,Qun Wu,Yan Xu. Precursor Supply Strategy for Tetramethylpyrazine Production by Bacillus Subtilis on Solid-State Fermentation of Wheat Bran[J]. Appl Biochem Biotechnol,2013(169):1346-1352.

    [19]Bing Feng Zhu,Yan Xu. A feeding strategy for tetramethylpyrazine production by Bacillus subtilis based on the stimulating effect of ammonium phosphate[J]. Bioprocess Biosyst Eng,2010,33(8):953-959.

    [20]李樹波,高翔,劉立明,等. 微生物生產(chǎn)3-羥基丁酮研究進展[J]. 生物加工過程,2011,9(6):63-68.

    [21]崔玉娟,劉曉晴. 丙酮酸脫氫酶復合體的研究進展及應用[J]. 西北師范大學學報,2007,43(6):79-83.

    [22]漆正堂,丁樹哲,賀杰. 丙酮酸脫氫酶活性調(diào)控在線粒體代謝與生長平衡中的作用[J]. 生命的化學,2008,28(3):307-310.

    Isolation of yeast with high acetoin-producing ability from Liangzhou fumigated vinegar and optimization for its fermentation medium

    ZHAO Feng-qin,YUN Jian-min*,ZHAO Xiao-rui,LI Hong-zhen,JIA Ya-li

    (College of Food science and engineering of Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China)

    Acetoin,a precursor of tetramethylpyrazine,is identified as a flavor component of Liangzhou fumigated vinegar. In the test,an acetoin-producing strain T8 was isolated from the fermented cultures of Liangzhou fumigated vinegar,which was identified asHanseniasporauvarumby classical identification methods and ITS gene sequence similarities. In order to further know the nutritional requirements of T8 growth and metabolism,the fermentation medium for producing acetoin with T8 was optimized,so that it could provide the better seed medium for flavoring yeast in modern vinegar brewing process.The key fermentation factors of affecting acetoin yield byH.uvarumwere studied,including the carbon resource,the nitrogen resource,inorganic salts concentration. The results showed that the best fermentation medium component was:glucose 60 g/L,peptone 10 g/L,yeast extract 10 g/L,(NH4)2HPO48 g/L,KH2PO40.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.75 g/L,MnSO40.6 g/L. Under the optimized conditions,the acetoin yield reached 15.236 g/L,which was increased by 20.65% in comparison with the initial fermentation medium,and the content of tetramethylpyrazine in vinegar cultures was increased by 22.1% in comparison with control in the artificial inoculation vinegar brewing test,it showed that T8 could help to improve the vinegar flavor.

    vinegar brewing;acetoin;yeast;fermentation medium;optimization

    2015-12-16

    趙風琴(1989-),女,碩士研究生,研究方向:食品微生物,E-mail:zhaofq0825@126.com。

    贠建民(1968-),男,博士,教授,研究方向:食品微生物發(fā)酵與發(fā)酵工程,E-mail:yunjianmin@gsau.edu.cn。

    國家自然科學基金資助項目(31360405)。

    TS264.2

    A

    1002-0306(2016)11-0147-06

    10.13386/j.issn1002-0306.2016.11.022

    猜你喜歡
    食醋氮源發(fā)酵液
    關于《食品安全國家標準食醋》(GB 2719—2018)的探討
    連翹內(nèi)生真菌的分離鑒定及其發(fā)酵液抑菌活性和HPLC測定
    桑黃纖孔菌發(fā)酵液化學成分的研究
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:03
    食醋與人類生活
    催陳食醋工藝技術研究前沿
    無機氮源對紅曲霉調(diào)控初探
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:11
    防暈車
    婦女生活(2016年1期)2016-01-14 11:54:21
    中藥渣生產(chǎn)蛋白飼料的氮源優(yōu)化研究
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:03
    響應面分析法和氮源改進優(yōu)化L-賴氨酸發(fā)酵工藝
    HPLC與LC-MS/MS測定蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素的方法比較
    食品科學(2013年14期)2013-03-11 18:25:13
    国产熟女欧美一区二区| 在线免费十八禁| www日本黄色视频网| 国内精品美女久久久久久| 淫妇啪啪啪对白视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 日本免费a在线| 亚洲不卡免费看| 欧美成人免费av一区二区三区| 少妇丰满av| 国产 一区 欧美 日韩| 99热这里只有精品一区| 精品人妻熟女av久视频| а√天堂www在线а√下载| 床上黄色一级片| 热99在线观看视频| 久久精品91蜜桃| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 一进一出好大好爽视频| 91狼人影院| 久99久视频精品免费| 成人漫画全彩无遮挡| 男人舔奶头视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 乱系列少妇在线播放| 天堂√8在线中文| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品久久久久久久电影| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 如何舔出高潮| 欧美在线一区亚洲| 国产成人91sexporn| av中文乱码字幕在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 中文字幕av在线有码专区| 天堂网av新在线| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲久久久久久中文字幕| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 午夜激情欧美在线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩制服骚丝袜av| 一a级毛片在线观看| 国产精品无大码| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 中文亚洲av片在线观看爽| 天天一区二区日本电影三级| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品久久久噜噜| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 在现免费观看毛片| АⅤ资源中文在线天堂| 日本色播在线视频| 亚洲精品在线观看二区| 午夜福利高清视频| 日韩一区二区视频免费看| 免费看av在线观看网站| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 麻豆国产97在线/欧美| 精品午夜福利在线看| 亚洲av免费在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 成人国产麻豆网| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲真实伦在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 真人做人爱边吃奶动态| 久久99热6这里只有精品| 日本免费a在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 白带黄色成豆腐渣| 国产激情偷乱视频一区二区| 高清毛片免费看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲欧美清纯卡通| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产视频一区二区在线看| 亚洲不卡免费看| 晚上一个人看的免费电影| 午夜激情欧美在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 在线免费观看不下载黄p国产| 在线看三级毛片| 精品日产1卡2卡| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲性夜色夜夜综合| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产黄片美女视频| 久久鲁丝午夜福利片| a级一级毛片免费在线观看| 丝袜喷水一区| 亚洲av成人精品一区久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 一本精品99久久精品77| 乱码一卡2卡4卡精品| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 日本 av在线| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美日本视频| 久久草成人影院| 成人无遮挡网站| 精品久久久久久久末码| or卡值多少钱| 午夜亚洲福利在线播放| 一个人观看的视频www高清免费观看| 一区二区三区免费毛片| 免费搜索国产男女视频| 一区二区三区免费毛片| 精品无人区乱码1区二区| 国产av一区在线观看免费| 麻豆一二三区av精品| 在线观看免费视频日本深夜| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 韩国av在线不卡| 欧美丝袜亚洲另类| 性欧美人与动物交配| 一级av片app| 在线看三级毛片| 一本一本综合久久| а√天堂www在线а√下载| 欧美日韩乱码在线| 高清日韩中文字幕在线| 91av网一区二区| av天堂在线播放| 国产视频一区二区在线看| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久久a久久爽久久v久久| 91在线观看av| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲欧美清纯卡通| 高清毛片免费观看视频网站| 毛片一级片免费看久久久久| 精品免费久久久久久久清纯| 岛国在线免费视频观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久综合国产亚洲精品| 我要搜黄色片| 91久久精品国产一区二区三区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 免费搜索国产男女视频| 97热精品久久久久久| 91久久精品国产一区二区成人| 免费观看的影片在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 伦理电影大哥的女人| 少妇熟女aⅴ在线视频| 99久久精品一区二区三区| 免费观看精品视频网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲,欧美,日韩| 日本熟妇午夜| 日本成人三级电影网站| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久综合国产亚洲精品| 99在线视频只有这里精品首页| 极品教师在线视频| 日韩成人伦理影院| 两个人的视频大全免费| 精品一区二区免费观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久综合国产亚洲精品| 日韩欧美精品免费久久| 久久久国产成人免费| 久久精品国产亚洲网站| 又爽又黄无遮挡网站| 真人做人爱边吃奶动态| 久久热精品热| 国产精品,欧美在线| 高清毛片免费观看视频网站| 国产av一区在线观看免费| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产探花极品一区二区| 国产在线精品亚洲第一网站| 色尼玛亚洲综合影院| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日本黄色片子视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 女人被狂操c到高潮| 中文字幕免费在线视频6| 一级毛片aaaaaa免费看小| 看免费成人av毛片| 我的老师免费观看完整版| 亚洲成人精品中文字幕电影| 精品一区二区免费观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 精品免费久久久久久久清纯| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精品永久免费网站| 免费人成在线观看视频色| 真人做人爱边吃奶动态| 中文字幕久久专区| 欧美人与善性xxx| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 美女免费视频网站| 免费看美女性在线毛片视频| 干丝袜人妻中文字幕| 特级一级黄色大片| av中文乱码字幕在线| av天堂在线播放| 男人舔女人下体高潮全视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产男人的电影天堂91| 高清日韩中文字幕在线| 色哟哟·www| 国产伦精品一区二区三区视频9| 色哟哟·www| 搡老妇女老女人老熟妇| 俺也久久电影网| 久久人人爽人人片av| 天堂网av新在线| 一个人看的www免费观看视频| 国产精品一区二区性色av| 日本五十路高清| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 偷拍熟女少妇极品色| 久久国内精品自在自线图片| 成人二区视频| 成人欧美大片| 欧美三级亚洲精品| 国产成人91sexporn| 成年女人永久免费观看视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 中文字幕熟女人妻在线| videossex国产| 中出人妻视频一区二区| 免费人成在线观看视频色| 国产精品一区二区性色av| АⅤ资源中文在线天堂| 老司机影院成人| 黄色欧美视频在线观看| 国产老妇女一区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 免费电影在线观看免费观看| 两个人视频免费观看高清| 国产真实乱freesex| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 在线播放无遮挡| 日本免费一区二区三区高清不卡| 香蕉av资源在线| 久久6这里有精品| 99热全是精品| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 精品久久久久久成人av| 久久久a久久爽久久v久久| 成年版毛片免费区| 国产真实伦视频高清在线观看| 中国国产av一级| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲性久久影院| 亚洲国产精品合色在线| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 成年女人毛片免费观看观看9| av在线老鸭窝| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产乱人视频| 五月玫瑰六月丁香| 毛片一级片免费看久久久久| 久久草成人影院| 国产精品人妻久久久久久| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 男女视频在线观看网站免费| 国产精品永久免费网站| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 中文字幕av成人在线电影| 日本 av在线| 岛国在线免费视频观看| 一本久久中文字幕| 亚洲av不卡在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 搞女人的毛片| 一区二区三区高清视频在线| 久久精品国产自在天天线| 成人特级av手机在线观看| 久久久久国内视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲av二区三区四区| 欧美bdsm另类| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品久久视频播放| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲av免费高清在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲成人av在线免费| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲va在线va天堂va国产| 日本在线视频免费播放| 国产午夜福利久久久久久| www.色视频.com| 亚洲国产精品成人综合色| 日韩欧美国产在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产老妇女一区| av国产免费在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久久久久久久中文| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品av视频在线免费观看| 久久综合国产亚洲精品| 色视频www国产| 亚洲性久久影院| 色在线成人网| 男女之事视频高清在线观看| 免费看日本二区| 亚洲最大成人中文| 久久国产乱子免费精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 精品无人区乱码1区二区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 一区福利在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 乱码一卡2卡4卡精品| 日韩av不卡免费在线播放| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 丰满迷人的少妇在线观看| 国内精品宾馆在线| 丝袜在线中文字幕| 91精品一卡2卡3卡4卡| 69精品国产乱码久久久| 一边亲一边摸免费视频| 一级二级三级毛片免费看| 黄色视频在线播放观看不卡| 伊人久久国产一区二区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产视频首页在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 黄色欧美视频在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 26uuu在线亚洲综合色| 卡戴珊不雅视频在线播放| 香蕉精品网在线| 又爽又黄a免费视频| 人妻一区二区av| 永久网站在线| 午夜av观看不卡| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲国产精品一区三区| av女优亚洲男人天堂| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久久久久久久久成人| 久久99一区二区三区| 久久久久久伊人网av| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| av女优亚洲男人天堂| 成人美女网站在线观看视频| 黑丝袜美女国产一区| 99热网站在线观看| 嫩草影院新地址| 久久99热6这里只有精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 人妻一区二区av| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美性感艳星| 国产视频内射| 久久久欧美国产精品| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 大片电影免费在线观看免费| 最近中文字幕高清免费大全6| 一级av片app| 九草在线视频观看| 美女主播在线视频| 一级a做视频免费观看| 久久韩国三级中文字幕| 久热久热在线精品观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美日韩视频精品一区| 国产综合精华液| 一级av片app| 久久久久国产网址| 26uuu在线亚洲综合色| 久久99热这里只频精品6学生| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久欧美国产精品| 欧美日韩精品成人综合77777| videossex国产| 青春草视频在线免费观看| freevideosex欧美| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲精品国产av蜜桃| 18+在线观看网站| 伊人亚洲综合成人网| 黑人高潮一二区| 国产亚洲精品久久久com| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲中文av在线| 一区在线观看完整版| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久精品久久久久久久性| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 日韩免费高清中文字幕av| 人妻 亚洲 视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产高清有码在线观看视频| 91成人精品电影| 久久免费观看电影| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 十八禁高潮呻吟视频 | 久久 成人 亚洲| 国产一区有黄有色的免费视频| 男女免费视频国产| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产免费福利视频在线观看| 亚洲av福利一区| 久久国内精品自在自线图片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲av中文av极速乱| 校园人妻丝袜中文字幕| 99久久人妻综合| 国产免费一级a男人的天堂| 在线观看国产h片| 国产爽快片一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 一级毛片电影观看| 丝袜在线中文字幕| 日本黄大片高清| av天堂久久9| 免费黄网站久久成人精品| 91久久精品电影网| 国产av国产精品国产| 成人美女网站在线观看视频| 一区二区三区精品91| 久久青草综合色| 亚洲av成人精品一区久久| 日本午夜av视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 欧美+日韩+精品| 国产精品人妻久久久影院| 美女视频免费永久观看网站| 久久人妻熟女aⅴ| 久久综合国产亚洲精品| 国产色爽女视频免费观看| 免费观看a级毛片全部| 久久国内精品自在自线图片| 午夜福利,免费看| 精品一区二区免费观看| 亚洲国产色片| 五月开心婷婷网| 国产男女内射视频| 久久久久久人妻| av网站免费在线观看视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 日本免费在线观看一区| 色哟哟·www| 亚洲不卡免费看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 大片免费播放器 马上看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产男人的电影天堂91| 国产精品国产av在线观看| 久久热精品热| 99久久综合免费| 尾随美女入室| 99久久中文字幕三级久久日本| 韩国高清视频一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲国产最新在线播放| 欧美最新免费一区二区三区| 久久97久久精品| 久久鲁丝午夜福利片| 色视频在线一区二区三区| 久久av网站| 久久综合国产亚洲精品| 在线播放无遮挡| 成人影院久久| 91精品一卡2卡3卡4卡| 高清av免费在线| 97在线人人人人妻| 久久精品国产自在天天线| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产高清不卡午夜福利| 18禁在线播放成人免费| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 国产亚洲最大av| av在线app专区| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 精品少妇黑人巨大在线播放| 一级片'在线观看视频| 中文字幕免费在线视频6| 一级,二级,三级黄色视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| kizo精华| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 国产成人精品婷婷| 久久久国产欧美日韩av| 欧美日韩在线观看h| 下体分泌物呈黄色| 黑丝袜美女国产一区| 视频中文字幕在线观看| 久久这里有精品视频免费| 国产成人91sexporn| 特大巨黑吊av在线直播| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲成色77777| 在线观看美女被高潮喷水网站| 男人添女人高潮全过程视频| 成人国产av品久久久| 国产片特级美女逼逼视频| 色94色欧美一区二区| 综合色丁香网| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品一区二区免费观看| 国产爽快片一区二区三区| 国产一区二区在线观看日韩| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久精品久久精品一区二区三区| 午夜免费观看性视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 另类精品久久| 久久99精品国语久久久| 日韩亚洲欧美综合| 久久国产精品大桥未久av | 亚洲人成网站在线观看播放| 各种免费的搞黄视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 69精品国产乱码久久久| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久久网色| 三级国产精品欧美在线观看| 六月丁香七月| 岛国毛片在线播放| 综合色丁香网| 亚洲性久久影院| 成人漫画全彩无遮挡| 18+在线观看网站| 国产精品人妻久久久影院| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲国产色片| 国产av码专区亚洲av| 午夜老司机福利剧场| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品欧美亚洲77777| 日本91视频免费播放| 久久精品国产自在天天线| 久久精品国产亚洲网站| 男的添女的下面高潮视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久国产精品大桥未久av | 国产又色又爽无遮挡免| 九色成人免费人妻av| 黄色欧美视频在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 国产色爽女视频免费观看| 色吧在线观看| 十八禁高潮呻吟视频 | 欧美3d第一页| 日韩人妻高清精品专区| 简卡轻食公司| 边亲边吃奶的免费视频| 国产精品一区www在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 国产美女午夜福利| 只有这里有精品99| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲成人一二三区av| 亚洲真实伦在线观看| 国产乱来视频区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一级黄片播放器| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲国产色片| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲精品第二区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品一二三区在线看| 欧美精品一区二区免费开放| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 色视频www国产| av免费观看日本| 国产爽快片一区二区三区| 精品一区二区免费观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品久久久噜噜| 少妇的逼好多水| 精品一品国产午夜福利视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| 欧美区成人在线视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 99久久精品国产国产毛片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 婷婷色综合www| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产极品天堂在线| 亚洲av综合色区一区|