• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    涼州熏醋釀造過程產(chǎn)乙偶姻酵母菌篩選及其發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

    2016-09-10 06:54:45趙風琴贠建民趙小瑞李宏珍賈亞莉
    食品工業(yè)科技 2016年11期
    關鍵詞:食醋氮源發(fā)酵液

    趙風琴,贠建民,趙小瑞,李宏珍,賈亞莉

    (甘肅農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院,甘肅蘭州 730070)

    ?

    涼州熏醋釀造過程產(chǎn)乙偶姻酵母菌篩選及其發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

    趙風琴,贠建民*,趙小瑞,李宏珍,賈亞莉

    (甘肅農(nóng)業(yè)大學食品科學與工程學院,甘肅蘭州 730070)

    乙偶姻是涼州熏醋特征風味成分四甲基吡嗪的前體。本實驗從涼州熏醋發(fā)酵料醅中分離獲得了一株產(chǎn)乙偶姻酵母菌T8,通過經(jīng)典鑒定方法結(jié)合ITS基因測序的方法,確定其為葡萄汁有孢漢遜酵母(Hanseniasporauvarum)。為探明T8菌株生長及代謝產(chǎn)乙偶姻的營養(yǎng)需求,本實驗對產(chǎn)乙偶姻酵母菌T8發(fā)酵培養(yǎng)基進行了優(yōu)化,以期為傳統(tǒng)食醋釀造工藝現(xiàn)代化改造過程中人工接種增香酵母種子的制備提供培養(yǎng)基。通過研究不同碳源、氮源、無機鹽對T8菌株產(chǎn)乙偶姻的影響,確定了發(fā)酵培養(yǎng)基的最終組分:葡萄糖60 g/L,蛋白胨10 g/L,酵母膏10 g/L,(NH4)2HPO48 g/L,KH2PO40.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.75 g/L,MnSO40.6 g/L。培養(yǎng)基優(yōu)化后,乙偶姻產(chǎn)量達到15.236 g/L,與初始發(fā)酵培養(yǎng)基相比提高了20.65%。人工接種T8菌株種子液所釀食醋中四甲基吡嗪的含量較對照提高了22.1%,增香效果明顯,證明H.UvarumT8菌株可以作為食醋釀造的增香酵母。

    食醋釀造,乙偶姻,酵母菌,發(fā)酵培養(yǎng)基,優(yōu)化

    涼州熏醋是甘肅名優(yōu)產(chǎn)品,采用傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵技術,經(jīng)糖化、酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵三個階段釀造而成[1]。四甲基吡嗪是涼州熏醋特征風味成分,它與其它揮發(fā)性成分共同作用,形成了涼州熏醋酸不澀口、醇厚綿長、濃郁和諧、口感柔和的品質(zhì)特點[2-3]。

    研究報道表明,乙偶姻是四甲基吡嗪的前體物質(zhì),可由微生物代謝產(chǎn)生,具有奶香味,是一種重要的食品風味物質(zhì),廣泛存在于多種發(fā)酵食品中[4]。目前已報道的產(chǎn)乙偶姻微生物多為細菌,如醋酸菌(Acetobacter)、乳球菌(Galactococcus)、腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)、沙門氏菌(Salmonella)等[5-6],但有關酵母菌產(chǎn)乙偶姻的研究報道相對較少。而酵母菌是涼州熏醋酒精發(fā)酵階段的主要功能菌,除了代謝生產(chǎn)酒精外,對食醋風味的形成也至關重要[7]。因此,篩選高產(chǎn)乙偶姻酵母菌及人工接種增香酵母是提高傳統(tǒng)食醋風味的可能途徑,探明產(chǎn)乙偶姻酵母菌株在菌體生長及代謝過程的營養(yǎng)需求顯得非常重要,可為增香菌株的人工接種種子液的制備提供理論依據(jù)。

    為此,本實驗依據(jù)微生物營養(yǎng)學基本原理,采用單因素及正交設計,擬對所分離酵母菌T8產(chǎn)乙偶姻發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化研究,旨在為涼州熏醋釀造過程酒精發(fā)酵階段人工接種增香酵母菌種子液的制備提供優(yōu)良的培養(yǎng)基,以期實現(xiàn)傳統(tǒng)食醋釀造工藝的現(xiàn)代化改造,改善食醋的風味和品質(zhì)。

    1 材料與方法

    1.1材料及儀器

    涼州熏醋發(fā)酵第3 d酒醅由甘肅益民食品有限公司提供。

    酵母菌分離培養(yǎng)基(YEPD):葡萄糖20 g,酵母膏10 g,蛋白胨20 g,瓊脂20 g,蒸餾水1000 mL,121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min,備用。

    初始發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖80 g,酵母膏20 g,蛋白胨10 g,KH2SO41 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,(NH4)2SO42 g,MnSO40.2 g,蒸餾水1000 mL,121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

    DH-600A臺式恒溫振蕩器上海躍進醫(yī)療器械廠;SW-CJ-1FD潔凈工作臺蘇州安泰空氣技術有限公司;PHS-3C型pH計上海佑科儀器儀表有限公司;HHS型電熱恒溫水浴鍋上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠;UV756CRT紫外可見分光光度計上海佑科儀器儀表有限公司;FA1004B電子天平上海佑科儀器儀表有限公司;101-1-S-Ⅱ電熱恒溫培養(yǎng)箱北京科偉永興儀器有限公司;YX280B手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器上海三申醫(yī)療器械有限公司;GC 6890N 氣相色譜儀、DB-WAX 色譜柱美國 Agilent scientific公司;頂空固相微萃取裝置、DVB/CAR/PDMS萃取器美國surpelco公司。

    1.2實驗方法

    1.2.1菌種分離純化采用梯度稀釋平板法對所需菌株進行分離[8]。采用分光光度法結(jié)合氣相色譜法[9]測定所分離菌株初始發(fā)酵培養(yǎng)基中乙偶姻的含量,篩選出產(chǎn)乙偶姻最高的菌株。

    1.2.2菌種鑒定形態(tài)學及生理生化鑒定參照《酵母菌特性及鑒定手冊》[10],采用經(jīng)典鑒定方法,通過菌體形態(tài)觀察,子囊孢子、擲孢子、假菌絲的形成,以及相應的生理生化實驗對菌株進行鑒定。

    將提取的基因組DNA委托甘肅金博研生物科技有限公司進行ITS序列擴增測序。測序結(jié)果提交GenBank數(shù)據(jù)庫,將得到的基因序列通過BLAST程序提交,NCBI數(shù)據(jù)庫中進行同源序列檢索[11]。將目標菌株和應用Blast檢索到的與之較高的同源性菌株的ITS序列作最大同源性比較分析。

    1.2.3發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化固定因素裝液量50 mL/250 mL錐形瓶,接種量10%(v/v),30 ℃、150 r/min培養(yǎng)72 h,對培養(yǎng)基進行優(yōu)化。

    挑取一環(huán)新鮮的斜面菌種,接入液體YEPD培養(yǎng)基中,裝液量50 mL/250 mL,30 ℃、150 r/min培養(yǎng)72 h,4 ℃保藏備用。

    在初始發(fā)酵培養(yǎng)基基礎上,分別選取淀粉、蔗糖、麥芽糖、葡萄糖為單一碳源,以80 g/L的添加量配制發(fā)酵培養(yǎng)基,測定發(fā)酵液中生物量和乙偶姻含量,研究不同碳源對T8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響;設置碳源濃度為0、20、40、60、80、100、120 g/L,測定發(fā)酵液中還原糖、生物量、乙偶姻含量,篩選最佳碳源濃度;分別選取玉米漿、蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、硝酸銨為單一氮源,以20 g/L的添加量配制發(fā)酵培養(yǎng)基,測定發(fā)酵液中生物量和乙偶姻含量,研究不同氮源對T8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響;設置酵母膏/蛋白胨含量為10 g/10 g(1∶1)、10 g/20 g(1∶2)、15 g/10 g(1.5∶1)、15 g/20 g(1.5∶2)、20 g/10 g(2∶1),測定發(fā)酵液中生物量和乙偶姻含量,確定復合有機氮源的最佳比例。在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加不同濃度的(NH4)2HPO40、2、4、6、8、10 g/L進行實驗,測定發(fā)酵液中pH、生物量和乙偶姻含量,研究(NH4)2HPO4對T8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響。

    根據(jù)微生物生長代謝以及產(chǎn)乙偶姻的營養(yǎng)要求[12,14],選取KH2PO4、MgSO4·7H2O、MnSO4為無機鹽配置發(fā)酵培養(yǎng)基,采用正交實驗設計研究K+、Mg2+、Mn2+對T8產(chǎn)乙偶姻的影響,因素水平表見表1。

    表1 正交實驗因素水平表(g)

    1.2.4分析方法(1)乙偶姻的測定方法:肌酸甲萘酚法[13-14]

    乙偶姻含量計算公式為

    其中:V-樣本體積,n-稀釋倍數(shù)。

    (2)還原糖含量測定:采用3,5-二硝基水楊酸比色法[15];

    (3)pH測定:采用pH計對發(fā)酵液pH進行測定;

    (4)生物量的測定:恒重法[16];

    (5)四甲基吡嗪的測定方法:氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[17]。

    1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    使用Excel 2010軟件處理數(shù)據(jù),計算標準偏差(±SE)并繪制折線圖、柱形圖。使用SPSS 19.0進行正交分析以及單因素方差分析(p<0.05為差異顯著)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1分離篩選結(jié)果

    將從涼州熏醋發(fā)酵第3 d酒醅中分離獲得的176株酵母菌分別接入初始發(fā)酵培養(yǎng)基中,裝液量為50 mL/250 mL三角瓶,30 ℃培養(yǎng)72 h。發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵液8000 r/min離心10 min,采用分光光度法測定各菌株發(fā)酵液中乙偶姻含量,選取發(fā)酵液中乙偶姻含量較高的前20株菌株采用氣相色譜(GC)進行二次發(fā)酵篩選,檢測發(fā)酵液中乙偶姻的含量,以不接種的樣品為對照,其中T8菌株發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的含量最大,達到11.642 g/L。

    表3 T8菌株基因比對結(jié)果

    2.2菌株鑒定

    2.2.1菌株形態(tài)學及生理生化鑒定根據(jù)表2實驗結(jié)果,查閱《酵母菌特性及鑒定手冊》,對已分離的T8酵母菌株進行初步鑒定,屬于漢遜酵母屬(Hanseniaspora)。

    表2 T8菌體形態(tài)及生理生化鑒定結(jié)果

    注:“+”代表陽性,“-”代表陰性。

    2.2.2菌株分子生物學鑒定對篩出菌株進行ITS基因序列分析,提取其DNA,進行PCR擴增,擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測,電泳結(jié)果如圖1所示。

    圖1 T8菌株的電泳圖Fig.1 Electrophoregram of strain T8注:“1”代表T8菌株ITS基因,“2”代表Marker。

    T8菌株DNA經(jīng)PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳,在約750 bp 的位置出現(xiàn)了清晰的條帶。將純化后的 PCR 產(chǎn)物切膠回收委托甘肅金博研生物科技有限公司進行ITS測序,結(jié)果顯示該條帶大小為689 bp(GenBank accession number KT802750),提交NCBI數(shù)據(jù)庫進行Blast序列比對(表3),與葡萄汁有孢漢遜酵母菌(Hanseniasporauvarum)同源性為99%。

    2.3H.UvarumT8產(chǎn)乙偶姻發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

    2.3.1不同碳源對H.UvarumT8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響碳源不僅要滿足微生物生長繁殖的需求,還要有益于代謝產(chǎn)物的生成,因此選擇合適的碳源對微生物的生長和產(chǎn)物合成至關重要。選擇淀粉、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖四種不同碳源進行實驗,結(jié)果如圖2所示。

    由圖2可看出,H.uvarumT8均可利用淀粉、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖發(fā)酵生產(chǎn)乙偶姻,以葡萄糖作為碳源時,乙偶姻產(chǎn)量最高,可達到12.090 g/L,并且葡萄糖的來源廣泛,價格相對便宜,因此選擇葡萄糖為產(chǎn)乙偶姻H.uvarumT8發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳碳源。

    2.3.2碳源最佳濃度葡萄糖是微生物生長和代謝產(chǎn)乙偶姻可利用的直接碳源,但發(fā)酵體系中葡萄糖濃度過高或過低,都不利于菌體的生長和代謝,因此需要研究葡萄糖濃度對菌體生長和乙偶姻含量的影響,結(jié)果如圖3所示。

    圖2 不同碳源對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.2 The effect of different carbon sources on acetoin fermentation注:不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),下同。

    圖3 不同濃度葡萄糖對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.3 The effect of initial glucose concentration on acetoin fermentation

    由圖3可以看出,隨著發(fā)酵液中葡萄糖濃度的增加,發(fā)酵結(jié)束時發(fā)酵體系中殘?zhí)呛恐饾u增加,生物量和乙偶姻含量均呈現(xiàn)一個先上升后下降的趨勢,發(fā)酵液中葡萄糖初始濃度為60 g/L時,乙偶姻含量達到最大。發(fā)酵液中初始葡萄糖濃度高于80 g/L時,生物量含量也開始下降,說明高濃度的葡萄糖對微生物生長有抑制作用,不利于發(fā)酵液中乙偶姻的積累,因此選擇60 g/L為最佳初始葡萄糖濃度。

    2.3.3不同氮源對H.UvarumT8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響本實驗選擇玉米漿、蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、硝酸銨為單一氮源,研究不同氮源對乙偶姻發(fā)酵的影響,結(jié)果如圖4所示。

    圖4 不同氮源對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.4 The effect of different nitrogen sources on acetoin fermentation

    從圖4可以看出,以酵母膏和蛋白胨為單一氮源時,發(fā)酵液中乙偶姻含量較高,且二者之間無顯著差異,說明蛋白胨和酵母膏對H.uvarumT8產(chǎn)乙偶姻均有顯著影響。與無機氮源相比,有機氮源更有利于菌體生長和乙偶姻的生成。為了探索最佳氮源組成,有必要進一步研究蛋白胨和酵母膏的復合比例對H.uvarumT8產(chǎn)乙偶姻的影響。

    2.3.4復合有機氮源的最佳比例通過調(diào)整發(fā)酵培養(yǎng)基中酵母膏和蛋白胨的添加量,研究不同氮源添加比例對乙偶姻發(fā)酵的影響,實驗結(jié)果如圖5所示。

    圖5 不同氮源添加比例對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.5 The effect of different nitrogen sources concentration on acetoin fermentation

    由圖5可以看出,發(fā)酵培養(yǎng)基中酵母膏和蛋白胨添加量不同,發(fā)酵結(jié)束時體系中生物量和乙偶姻含量也有所差異,隨著酵母膏與蛋白胨比例的增加,生物量和乙偶姻含量均呈現(xiàn)一個先上升后下降的過程,酵母膏:蛋白胨為1∶1時,發(fā)酵液中生物量和乙偶姻含量均達到最大,分別為7.34 g/L和14.10 g/L。為了使發(fā)酵過程中乙偶姻更好地積累,選擇發(fā)酵培養(yǎng)基中酵母膏、蛋白胨濃度均為10 g/L。

    2.3.5(NH4)2HPO4對H.UvarumT8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響(NH4)2HPO4不僅可以作為氮源被微生物代謝利用,而且(NH4)2HPO4作為一種緩沖溶液,可以對發(fā)酵體系的pH起到調(diào)節(jié)作用[18-19]。本實驗通過配制不同濃度的(NH4)2HPO4發(fā)酵培養(yǎng)基,研究(NH4)2HPO4添加量對H.uvarumT8產(chǎn)乙偶姻發(fā)酵的影響,實驗結(jié)果如圖6所示。

    圖6 不同濃度的(NH4)2HPO4對乙偶姻發(fā)酵的影響Fig.6 The effect of(NH4)2HPO4 concentration on acetoin fermentation

    從圖6可知,隨著(NH4)2HPO4濃度的增大,生物量趨于穩(wěn)定,乙偶姻含量呈先增加后下降的趨勢,(NH4)2HPO4濃度為8 g/L時,發(fā)酵液中乙偶姻的含量達到最大。此外,隨著(NH4)2HPO4濃度的增大,發(fā)酵液pH呈先下降,后逐漸趨于平緩的趨勢,(NH4)2HPO4濃度為8 g/L時,發(fā)酵液的最終pH為6.24,乙偶姻積累量最大,這是由于(NH4)2HPO4作為一種磷酸鹽緩沖液,可有效調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH,培養(yǎng)液中pH為中性偏酸時,有利于酵母菌生長,進而促進發(fā)酵液中乙偶姻的積累。

    2.3.6金屬離子對H.UvarumT8發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的影響在微生物生長及代謝過程中,金屬離子除了構(gòu)成細胞成分外,K+作為一種生理調(diào)節(jié)物質(zhì),參與維持滲透壓以及氧化還原電位的平衡,pH穩(wěn)定等;Mg2+、Mn2+是酶的激活劑,能夠控制許多酶類參與的化學反應的進行[12]。根據(jù)表1所列因素和水平,以發(fā)酵結(jié)束時發(fā)酵液中乙偶姻的含量為指標,采用L9(34)正交表對發(fā)酵培養(yǎng)基中不同金屬鹽濃度進行優(yōu)化,正交設計結(jié)果和方差分析結(jié)果如表4和表5所示。

    表4 正交實驗設計及結(jié)果

    表5 正交實驗設計方差分析結(jié)果

    注:“*”表示差異顯著(p<0.05)。

    從表4正交結(jié)果可知,處理3(A1B3C3)乙偶姻含量最高。前期研究已證實了酵母菌發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻的代謝途徑為:酵母菌通過糖酵解生成丙酮酸,丙酮酸在丙酮酸脫氫酶作用下生成乙酰-TPP,乙酰-TPP與乙醛在醛連接酶的作用下生成乙偶姻[20]。由方差分析(表5)可知,MgSO4·7H2O添加量對發(fā)酵液中乙偶姻含量有顯著影響,主要是由于Mg2+是PDP的主要輔助因子,而PDP和PDK共同控制丙酮酸脫氫酶的活性,進而影響發(fā)酵液中乙偶姻的含量[21-22]。通過極差分析,三種金屬鹽對乙偶姻發(fā)酵影響的主次因素為B>A>C,極差分析獲得的最佳實驗組合為A1B3C3,不需要做驗證實驗。因此確定培養(yǎng)基中無機鹽的添加量為KH2PO40.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.75 g/L,MnSO40.6 g/L。

    2.4接種T8菌株的食醋釀造驗證實驗

    按照涼州熏醋釀造工藝流程進行食醋模擬發(fā)酵實驗,在酒精發(fā)酵階段人工接種5%(v/m)釀酒酵母菌和T8種子液,醋酸發(fā)酵結(jié)束后采用GC-MS法測定發(fā)酵產(chǎn)物中四甲基吡嗪的含量,以酒精發(fā)酵階段不接種T8菌株為對照,實驗結(jié)果如表6所示。從表6可以看出,接入T8菌株后,料醅中四甲基吡嗪的含量與對照相比提高了22.1%,說明T8菌株在食醋釀造過程中有明顯的增香作用。

    表6 接種T8菌株食醋中四甲基吡嗪的含量

    3 結(jié)論

    本實驗對篩選獲得的產(chǎn)乙偶姻酵母菌T8進行了生理生化鑒定和分子生物學鑒定,確定其為葡萄汁有孢漢遜酵母(H.uvarum),可為食醋及相關發(fā)酵食品風味改善提供菌種來源。優(yōu)化的H.uvarumT8菌株發(fā)酵產(chǎn)乙偶姻種子培養(yǎng)液為:葡萄糖60 g/L,蛋白胨和酵母膏復合氮源各為10 g/L,(NH4)2HPO4濃度為8 g/L,培養(yǎng)基的無機鹽組分是KH2SO40.5 g/L、MgSO4·7H2O 0.75 g/L、MnSO40.6 g/L。培養(yǎng)基組分優(yōu)化后,生物量為7.68 g/L,乙偶姻含量到達15.236 g/L,與初始發(fā)酵培養(yǎng)基乙偶姻產(chǎn)量12.090 g/L相比提高了20.65%。人工接種T8菌株種子液的食醋釀造實驗結(jié)果表明,所釀食醋中特征風味物質(zhì)——四甲基吡嗪的含量較對照提高了22.1%,增香效果明顯,證明H.UvarumT8菌株可以作為食醋釀造的增香酵母。

    [1]劉平安. 涼州熏醋釀造工藝研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學學報,2001,36(4):425-428.

    [2]高文睿,贠建民. 涼州熏醋中高產(chǎn)乙偶姻菌株的分離篩選及發(fā)酵特性初探[J]. 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全,2015(16):26-29.

    [3]陳慶安,翟丹云. 涼州熏醋的生產(chǎn)技術[J]. 中國調(diào)味品,2001,9(9):25-26.

    [4]韓慶輝,贠建民,宋勇強,等. 涼州熏醋熏醅前后揮發(fā)性成分的變化[J]. 食品工業(yè)科技,2012,33(22):146-151.

    [5]徐慧,劉建軍. 枯草芽孢桿菌HB.32產(chǎn)3-羥基丁酮分批發(fā)酵動力學[J]. 食品科學,2013,34(13):209-212.

    [6]Danilo DF,Paolo T,Francesco M,et al. Carbon material

    balances and bioenergetics of 2,3-butanediol bio-oxidation by Acetobacter hansenii[J]. Enzyme and Microbial Technology,2001,33(5):708-719.

    [7]宋剛. 微生物代謝與香氣成分[J]. 中國釀造,2006(2):64-68.

    [8]Jiajia Wu,Yingkun Ma,Fenfen Zhang,et al. Biodiversity of yeasts,lactic acid bacteria and acetic acid bacteria in the fermentation of Shanxi aged vinegar,a traditional Chinese vinegar[J]. Food Microbiology,2012,30(1):289-297.

    [9]趙洪源,贠建民,邵曉慶,等. 涼州熏醋釀造中高產(chǎn)乙偶姻醋酸菌菌株篩選及其發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 食品科學,2015,36(15):98-104.

    [10]A.巴尼特,R.W.佩恩,D.佩恩著. 胡瑞卿譯. 酵母菌的特征與鑒定手冊[M]. 1991. 青島:青島海洋大學出版社.

    [11]Hall TA. Bio Edit:A user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT[J].Nucleic Acids Symposium Series,1999(41):95-98.

    [12]周德慶. 微生物學[M]. 2002,北京:高等教育出版社.

    [13]任瀟,紀曉俊,孫世聞,等. 肌酸比色法快速測定發(fā)酵液中3-羥基丁酮的含量[J]. 食品科技,2009,34(8):260-263.

    [14]徐慧,賈士儒,劉建軍. 響應面法優(yōu)化枯草芽孢桿菌3-羥基丁酮發(fā)酵培養(yǎng)基[J]. 中國釀造,2011(8):133-137.

    [15]朱海霞,石瑛,張慶娜,等. 3,5-二硝基水楊酸(DNS)比色法測定馬鈴薯還原糖含量的研究[J]. 中國馬鈴薯,2005,19(5):266-269.

    [16]唐棠,黃乾明,楊群峰. 紅酵母Y-5產(chǎn)類胡蘿卜素培養(yǎng)基無機鹽組分的優(yōu)化[J]. 食品科學,2011,32(3):130-133.

    [17]魏永義,焦駝文,崔光,等. 食醋特征香氣成分分析研究[J]. 中國調(diào)味品,2010,35(6):99-101.

    [18]Fei Hao,Qun Wu,Yan Xu. Precursor Supply Strategy for Tetramethylpyrazine Production by Bacillus Subtilis on Solid-State Fermentation of Wheat Bran[J]. Appl Biochem Biotechnol,2013(169):1346-1352.

    [19]Bing Feng Zhu,Yan Xu. A feeding strategy for tetramethylpyrazine production by Bacillus subtilis based on the stimulating effect of ammonium phosphate[J]. Bioprocess Biosyst Eng,2010,33(8):953-959.

    [20]李樹波,高翔,劉立明,等. 微生物生產(chǎn)3-羥基丁酮研究進展[J]. 生物加工過程,2011,9(6):63-68.

    [21]崔玉娟,劉曉晴. 丙酮酸脫氫酶復合體的研究進展及應用[J]. 西北師范大學學報,2007,43(6):79-83.

    [22]漆正堂,丁樹哲,賀杰. 丙酮酸脫氫酶活性調(diào)控在線粒體代謝與生長平衡中的作用[J]. 生命的化學,2008,28(3):307-310.

    Isolation of yeast with high acetoin-producing ability from Liangzhou fumigated vinegar and optimization for its fermentation medium

    ZHAO Feng-qin,YUN Jian-min*,ZHAO Xiao-rui,LI Hong-zhen,JIA Ya-li

    (College of Food science and engineering of Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China)

    Acetoin,a precursor of tetramethylpyrazine,is identified as a flavor component of Liangzhou fumigated vinegar. In the test,an acetoin-producing strain T8 was isolated from the fermented cultures of Liangzhou fumigated vinegar,which was identified asHanseniasporauvarumby classical identification methods and ITS gene sequence similarities. In order to further know the nutritional requirements of T8 growth and metabolism,the fermentation medium for producing acetoin with T8 was optimized,so that it could provide the better seed medium for flavoring yeast in modern vinegar brewing process.The key fermentation factors of affecting acetoin yield byH.uvarumwere studied,including the carbon resource,the nitrogen resource,inorganic salts concentration. The results showed that the best fermentation medium component was:glucose 60 g/L,peptone 10 g/L,yeast extract 10 g/L,(NH4)2HPO48 g/L,KH2PO40.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.75 g/L,MnSO40.6 g/L. Under the optimized conditions,the acetoin yield reached 15.236 g/L,which was increased by 20.65% in comparison with the initial fermentation medium,and the content of tetramethylpyrazine in vinegar cultures was increased by 22.1% in comparison with control in the artificial inoculation vinegar brewing test,it showed that T8 could help to improve the vinegar flavor.

    vinegar brewing;acetoin;yeast;fermentation medium;optimization

    2015-12-16

    趙風琴(1989-),女,碩士研究生,研究方向:食品微生物,E-mail:zhaofq0825@126.com。

    贠建民(1968-),男,博士,教授,研究方向:食品微生物發(fā)酵與發(fā)酵工程,E-mail:yunjianmin@gsau.edu.cn。

    國家自然科學基金資助項目(31360405)。

    TS264.2

    A

    1002-0306(2016)11-0147-06

    10.13386/j.issn1002-0306.2016.11.022

    猜你喜歡
    食醋氮源發(fā)酵液
    關于《食品安全國家標準食醋》(GB 2719—2018)的探討
    連翹內(nèi)生真菌的分離鑒定及其發(fā)酵液抑菌活性和HPLC測定
    桑黃纖孔菌發(fā)酵液化學成分的研究
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:03
    食醋與人類生活
    催陳食醋工藝技術研究前沿
    無機氮源對紅曲霉調(diào)控初探
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:11
    防暈車
    婦女生活(2016年1期)2016-01-14 11:54:21
    中藥渣生產(chǎn)蛋白飼料的氮源優(yōu)化研究
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:03
    響應面分析法和氮源改進優(yōu)化L-賴氨酸發(fā)酵工藝
    HPLC與LC-MS/MS測定蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素的方法比較
    食品科學(2013年14期)2013-03-11 18:25:13
    亚洲午夜理论影院| www国产在线视频色| 午夜a级毛片| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 悠悠久久av| 色在线成人网| 国产精品,欧美在线| 国产av精品麻豆| 大型av网站在线播放| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 操出白浆在线播放| 亚洲av日韩精品久久久久久密| av有码第一页| 久久精品成人免费网站| 久久久国产成人精品二区| 黄色丝袜av网址大全| 一级毛片精品| 脱女人内裤的视频| 九色亚洲精品在线播放| 欧美日本亚洲视频在线播放| 免费在线观看完整版高清| 女性生殖器流出的白浆| 久久精品成人免费网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| www.熟女人妻精品国产| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 免费高清视频大片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 久久久久久久午夜电影| 免费看十八禁软件| 69精品国产乱码久久久| 久久热在线av| 九色亚洲精品在线播放| 国产又爽黄色视频| 国产精品av久久久久免费| 高清黄色对白视频在线免费看| a级毛片在线看网站| 国产精品久久视频播放| 亚洲黑人精品在线| 18禁美女被吸乳视频| 丝袜美腿诱惑在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 极品教师在线免费播放| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲国产精品sss在线观看| 国产视频一区二区在线看| 亚洲av片天天在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| aaaaa片日本免费| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 成人三级做爰电影| 亚洲男人的天堂狠狠| www.精华液| 国产高清videossex| 女警被强在线播放| 久久这里只有精品19| 免费在线观看黄色视频的| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲少妇的诱惑av| a在线观看视频网站| 美女高潮到喷水免费观看| av视频免费观看在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 日韩三级视频一区二区三区| 国产高清有码在线观看视频 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 乱人伦中国视频| 免费无遮挡裸体视频| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品,欧美在线| 久久中文字幕一级| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日韩av在线大香蕉| 久99久视频精品免费| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 丰满的人妻完整版| 午夜免费观看网址| 十八禁网站免费在线| 啦啦啦免费观看视频1| av视频免费观看在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 中亚洲国语对白在线视频| 免费不卡黄色视频| 人人澡人人妻人| 亚洲色图av天堂| 亚洲伊人色综图| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 久久久久九九精品影院| 日本三级黄在线观看| 韩国av一区二区三区四区| 久久婷婷成人综合色麻豆| av欧美777| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久久国产精品人妻蜜桃| 久久香蕉精品热| 国产不卡一卡二| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 老汉色∧v一级毛片| 午夜a级毛片| 亚洲av熟女| 婷婷丁香在线五月| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品九九99| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲专区中文字幕在线| 一夜夜www| 成人三级做爰电影| 不卡一级毛片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 日韩欧美在线二视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99国产精品免费福利视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 搡老熟女国产l中国老女人| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产三级黄色录像| 啪啪无遮挡十八禁网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品 国内视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 日本 av在线| 1024香蕉在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 黄片小视频在线播放| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲成人久久性| 90打野战视频偷拍视频| 午夜久久久在线观看| 国产视频一区二区在线看| 天堂√8在线中文| 热99re8久久精品国产| 在线观看舔阴道视频| 一级a爱片免费观看的视频| 久久亚洲真实| 日日摸夜夜添夜夜添小说| av天堂在线播放| 精品免费久久久久久久清纯| 精品一区二区三区av网在线观看| 色在线成人网| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 日本五十路高清| 两个人视频免费观看高清| 国产av一区在线观看免费| 色哟哟哟哟哟哟| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 老司机午夜福利在线观看视频| 国语自产精品视频在线第100页| 日韩欧美三级三区| 国产单亲对白刺激| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 69av精品久久久久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 涩涩av久久男人的天堂| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲精品国产精品久久久不卡| 性欧美人与动物交配| 黄色成人免费大全| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品第一国产精品| 美女午夜性视频免费| 亚洲人成电影观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产欧美日韩一区二区三| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产乱人伦免费视频| 日韩三级视频一区二区三区| 国产av一区在线观看免费| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 人妻久久中文字幕网| 在线观看www视频免费| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品久久电影中文字幕| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 高清毛片免费观看视频网站| 久久精品国产综合久久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 亚洲国产精品sss在线观看| 久久久久九九精品影院| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 乱人伦中国视频| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲色图综合在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 一边摸一边抽搐一进一小说| 看黄色毛片网站| av欧美777| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲人成77777在线视频| www.精华液| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 悠悠久久av| av视频在线观看入口| 欧美最黄视频在线播放免费| 午夜免费观看网址| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品国产亚洲在线| 男女下面插进去视频免费观看| 淫妇啪啪啪对白视频| av中文乱码字幕在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产1区2区3区精品| 久热这里只有精品99| 免费在线观看黄色视频的| 天天一区二区日本电影三级 | 香蕉久久夜色| 国产黄a三级三级三级人| 91麻豆av在线| 乱人伦中国视频| 高清毛片免费观看视频网站| 成年版毛片免费区| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久国产精品人妻蜜桃| 久热这里只有精品99| 国产成人av教育| 日韩精品中文字幕看吧| 久久中文字幕人妻熟女| 免费在线观看日本一区| 黄片小视频在线播放| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲成人久久性| 国产精品 国内视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 99热只有精品国产| 在线播放国产精品三级| 一级a爱片免费观看的视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产亚洲精品av在线| 国产私拍福利视频在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品久久久av美女十八| 免费在线观看亚洲国产| 日韩免费av在线播放| 亚洲国产精品成人综合色| 国产成人免费无遮挡视频| 精品国产美女av久久久久小说| 女人被狂操c到高潮| 身体一侧抽搐| 国产成人影院久久av| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品免费视频内射| 两个人免费观看高清视频| 精品欧美国产一区二区三| 免费无遮挡裸体视频| 黄色视频,在线免费观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产免费av片在线观看野外av| 国产成人欧美在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 午夜福利在线观看吧| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 午夜成年电影在线免费观看| 久久狼人影院| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲免费av在线视频| 身体一侧抽搐| 午夜精品在线福利| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 欧美色视频一区免费| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 在线观看舔阴道视频| 啦啦啦 在线观看视频| 午夜久久久久精精品| 亚洲国产看品久久| 成年女人毛片免费观看观看9| 成人国产一区最新在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 老熟妇仑乱视频hdxx| 一区二区三区精品91| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品av久久久久免费| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线免费观看的www视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 在线观看一区二区三区| 亚洲欧美精品综合久久99| 日韩精品青青久久久久久| 香蕉国产在线看| 国产亚洲av高清不卡| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 90打野战视频偷拍视频| 色综合婷婷激情| 啦啦啦 在线观看视频| 久久久久久久久免费视频了| 黄片小视频在线播放| 日本三级黄在线观看| 美女大奶头视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 日韩免费av在线播放| tocl精华| 欧美日韩黄片免| 亚洲人成电影观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 免费搜索国产男女视频| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲七黄色美女视频| av电影中文网址| 久久久久久久午夜电影| 精品高清国产在线一区| 成人免费观看视频高清| 在线国产一区二区在线| 亚洲九九香蕉| 美国免费a级毛片| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久这里只有精品19| 久久九九热精品免费| 午夜福利在线观看吧| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久精品影院6| 欧美黄色淫秽网站| 一级a爱视频在线免费观看| 黄色视频,在线免费观看| 9色porny在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 精品一区二区三区四区五区乱码| 欧美日韩黄片免| 一级片免费观看大全| 精品国产国语对白av| 日本 av在线| 欧美成狂野欧美在线观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 精品一区二区三区四区五区乱码| 老汉色∧v一级毛片| 日韩欧美免费精品| 国产精品 欧美亚洲| 咕卡用的链子| 国产一区二区在线av高清观看| 中出人妻视频一区二区| 国产亚洲av高清不卡| 51午夜福利影视在线观看| 中文字幕高清在线视频| 国产主播在线观看一区二区| 高清毛片免费观看视频网站| 色播在线永久视频| 国产精品久久久久久精品电影 | 在线av久久热| 一区二区三区激情视频| 亚洲九九香蕉| 欧美国产日韩亚洲一区| 好男人电影高清在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产精品野战在线观看| 国产又爽黄色视频| 免费在线观看黄色视频的| 757午夜福利合集在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久久久久人人人人人| 国产精品 国内视频| 亚洲av片天天在线观看| 免费av毛片视频| 狂野欧美激情性xxxx| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 高清毛片免费观看视频网站| 欧美日韩黄片免| 国产熟女午夜一区二区三区| 午夜福利高清视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 日韩精品青青久久久久久| 性少妇av在线| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 成年女人毛片免费观看观看9| 美女午夜性视频免费| 亚洲男人的天堂狠狠| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 国产精品免费一区二区三区在线| 精品国内亚洲2022精品成人| av有码第一页| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久性视频一级片| 亚洲成人久久性| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲 国产 在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 午夜影院日韩av| 婷婷丁香在线五月| 午夜免费观看网址| 亚洲 欧美一区二区三区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品久久久精品久久久| 人成视频在线观看免费观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 男人操女人黄网站| 日韩精品青青久久久久久| 老司机在亚洲福利影院| 99热只有精品国产| 88av欧美| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 18禁美女被吸乳视频| 国产激情欧美一区二区| 宅男免费午夜| www.精华液| 亚洲成人精品中文字幕电影| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| or卡值多少钱| xxx96com| 亚洲无线在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美在线一区亚洲| 中文亚洲av片在线观看爽| 后天国语完整版免费观看| 午夜福利高清视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产真人三级小视频在线观看| 国产激情久久老熟女| 国产私拍福利视频在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲国产精品久久男人天堂| 涩涩av久久男人的天堂| 国内精品久久久久久久电影| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 在线免费观看的www视频| 黄色毛片三级朝国网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 男人操女人黄网站| 91成人精品电影| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 在线播放国产精品三级| www.999成人在线观看| 看片在线看免费视频| 日本免费a在线| 亚洲av五月六月丁香网| 91国产中文字幕| 精品电影一区二区在线| 欧美黄色淫秽网站| 1024香蕉在线观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲国产精品成人综合色| 女同久久另类99精品国产91| 国产成人av教育| 美女免费视频网站| xxx96com| 99国产综合亚洲精品| 国产精品一区二区精品视频观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 色在线成人网| 91大片在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 黑人操中国人逼视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 免费少妇av软件| 伦理电影免费视频| 90打野战视频偷拍视频| 九色亚洲精品在线播放| 久99久视频精品免费| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美久久黑人一区二区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲国产欧美网| 色播亚洲综合网| 色哟哟哟哟哟哟| 性欧美人与动物交配| 18禁国产床啪视频网站| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲五月天丁香| 免费在线观看影片大全网站| 成年女人毛片免费观看观看9| 黄片小视频在线播放| 在线观看舔阴道视频| 久久精品成人免费网站| 久久久久亚洲av毛片大全| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产亚洲精品一区二区www| 人成视频在线观看免费观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久久久国产一级毛片高清牌| 99在线人妻在线中文字幕| 不卡av一区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 午夜影院日韩av| 最近最新中文字幕大全电影3 | 免费看十八禁软件| 午夜免费成人在线视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产视频一区二区在线看| aaaaa片日本免费| 亚洲激情在线av| 久久精品国产综合久久久| 1024视频免费在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久影院123| 丝袜美腿诱惑在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品亚洲av一区麻豆| 88av欧美| 欧美日韩瑟瑟在线播放| av福利片在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 精品高清国产在线一区| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 正在播放国产对白刺激| 丝袜美腿诱惑在线| 不卡一级毛片| 欧美另类亚洲清纯唯美| 视频区欧美日本亚洲| 欧美日韩精品网址| 女警被强在线播放| 精品国产美女av久久久久小说| 韩国av一区二区三区四区| 久久久久九九精品影院| 国产成人系列免费观看| 日日夜夜操网爽| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲 国产 在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产av精品麻豆| 在线观看www视频免费| 中出人妻视频一区二区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 精品福利观看| 99久久精品国产亚洲精品| 精品乱码久久久久久99久播| 国产成+人综合+亚洲专区| 禁无遮挡网站| 午夜福利欧美成人| 丝袜美足系列| 91国产中文字幕| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品野战在线观看| 久久精品成人免费网站| 无遮挡黄片免费观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 老鸭窝网址在线观看| 国产av在哪里看| 人人澡人人妻人| 69av精品久久久久久| 波多野结衣高清无吗| 久久久久精品国产欧美久久久| 免费看美女性在线毛片视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成人18禁在线播放| 日韩欧美免费精品| 国产精品综合久久久久久久免费 | 日本欧美视频一区| 麻豆一二三区av精品| 久久久久九九精品影院| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 成年版毛片免费区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲男人天堂网一区| 激情在线观看视频在线高清| 三级毛片av免费| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 女警被强在线播放| 在线免费观看的www视频| 国产精品国产高清国产av| 亚洲欧美激情综合另类| 一二三四社区在线视频社区8| 九色亚洲精品在线播放| 性欧美人与动物交配| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲欧美激情在线| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 色哟哟哟哟哟哟| 多毛熟女@视频| 国产伦人伦偷精品视频| www.自偷自拍.com| 我的亚洲天堂| 久久久久久久久久久久大奶|