消化性潰瘍氣虛血瘀證的代謝組學(xué)研究

惲海峰　張哲華　葛惠男

摘要：目的研究消化性潰瘍氣虛血瘀癥的代謝組學(xué)特征，以代謝組學(xué)的角度，全面闡明該證型的物質(zhì)化基礎(chǔ)。方法選擇2014年1月—2015年1月本院脾胃科收治的80例消化性潰瘍患者為研究對象，將其設(shè)定為觀察組，另取同期來本院行健康檢查的正常者為對照組，收集受試者的血液，胃鏡病理標(biāo)本，實施病理表述和代謝組學(xué)研究，對結(jié)果使用多元化數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果和正常對照組相比，氣虛血瘀組患者在血清代謝物圖譜上存在顯著差異。結(jié)論和正常人相比，氣虛血瘀癥在代謝譜上存在顯著差異，這些差異化代謝產(chǎn)物可能為病癥形成的物質(zhì)性基礎(chǔ)，在對患者進(jìn)行臨床診斷與治療的過程中，將中醫(yī)辨證理論與代謝組學(xué)全面結(jié)合，可起到辨別患者疾病嚴(yán)重程度，對于其疾病預(yù)后來講，有著非常重要的現(xiàn)實意義，在很大程度上增加了診斷客觀性，值得進(jìn)一步推廣使用。

關(guān)鍵詞：消化性潰瘍；氣虛血瘀癥；代謝組學(xué)

中圖分類號：R256.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1007-2349（2016）10-0025-04

辨證論治為祖國醫(yī)學(xué)中重要組成部分之一[1]。癥候來自于前人總結(jié)，有著較強(qiáng)的主觀性，辨證施治的準(zhǔn)確程度和治療結(jié)果息息相關(guān)。隨著我國中醫(yī)現(xiàn)代化進(jìn)程的不斷加速，在衛(wèi)生部門也制定出了一些癥候的規(guī)范性標(biāo)準(zhǔn)。這些均為臨床診斷提供了理論依據(jù)，但值得說明的是，對于癥候的診斷依舊缺少公允性標(biāo)準(zhǔn)。這也就證實，使用有效方式，對中醫(yī)癥候本質(zhì)和理論依據(jù)加以研究有著非常重要的現(xiàn)實意義存在。中醫(yī)癥候?qū)W為多因素參與的開放性系統(tǒng)[2]，有著多層次的特征，該研究和代謝組學(xué)研究對象有相似的地方，把代謝組學(xué)理論和方式引入到癥候研究之中，對有關(guān)證型進(jìn)行量化分析，探究中醫(yī)證型之基源，為中醫(yī)癥候?qū)W研究的切入點(diǎn)。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2014年1月—2015年1月本院脾胃科收治的80例消化性潰瘍患者為研究對象，經(jīng)臨床診斷與相關(guān)檢查，患者確診。本實驗通過我院倫理委員會審查，同意執(zhí)行，患者自愿參加實驗調(diào)查，在此同時簽署了知情同意書。經(jīng)中醫(yī)診斷，患者均符合氣虛血瘀證臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：胃脘痛，脹滿，困乏無力，胃中嘈雜，不思飲食，大便困難，偶有黑便。舌紫，存在瘀癥。脈弦澀或脈細(xì)數(shù)。在此其中男48例，女32例。年齡區(qū)間為35.9～68.4歲，平均年齡為（44.7±2.3）歲。患者符合實驗標(biāo)準(zhǔn)，排除對象為[3]：（1）存在消化道大出血或者球后潰瘍者；（2）在治療一周內(nèi)使用過甾體消炎藥或抗生素者；（3）其他器官器質(zhì)性病變者；（4）惡性腫瘤者；（5）經(jīng)內(nèi)窺鏡檢查證實為潰瘍合并穿孔性潰瘍，胃底部潰瘍與巨大潰瘍者；（6）精神疾患者；（7）孕期，哺乳期女性；（8）不同意參加實驗調(diào)查者；（9）繼發(fā)性病變者。另取同期來我院體檢的健康者80例為對照組，2組受試者的年齡，性別文化程度等基線資料不存在統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性（P>0.05.）

1.2方法

1.2.1實驗器材本實驗使用德國西門子公司生產(chǎn)的渦旋儀和冷凍離心機(jī)進(jìn)行相關(guān)檢查。

1.2.2實驗材料本實驗材料為甲酸，乙腈與甲醇，均由北京諾康生物有限公司提供。濃度符合實驗標(biāo)準(zhǔn)。色譜柱為ZORBAX C18柱，由安捷倫公司提供。

1.2.3樣本收集在明確患者疾病分型之后，采取清晨空腹血液，共計6ml，后在采血管內(nèi)靜置30 min后，目的在于凝固血液，實現(xiàn)血清分離，后使用5000轉(zhuǎn)/min離心5分鐘。后取用上清液，在每個管內(nèi)放置0.5 mL，于-80攝氏度環(huán)境下保存。

1.2.4收集樣本檢測前的相關(guān)處理工作選擇患者的受試患者的血清樣本，每組設(shè)定為7個，于常溫環(huán)境下融化。選擇吸取0.2～2 mL血清放置在子彈頭中，加入容量為0.8 mL甲醇，渦旋設(shè)定為30 s，環(huán)境為4℃。10 000 g離心時間為10 min。選擇上清液0.5 mL。放在液相進(jìn)樣瓶內(nèi)實施檢測。

1.2.5質(zhì)譜條件本實驗使用TOF MS-IDA-MS/MS視為質(zhì)譜條件，使用正離子方式加以檢測，氣簾氣設(shè)定為40psi，噴霧電壓設(shè)定為5500eV。輔助氣為60psi，離子源溫度為550℃，去簇電壓為70eV.TOF MS的掃描范圍為50～1500 m/z。于IDA條件下實施下述設(shè)置：碰撞電壓差為10eV.碰撞電壓為35eV.實施開啟動態(tài)背景扣除。

1.2.6色譜條件在0 min時，乙腈（其中含有0.1%甲酸）占有5%，純凈水占有95%；在10 min時，全部為乙腈（其中含有0.1%甲酸）。

1.3觀察指標(biāo)（1）胃鏡病理學(xué)結(jié)果；（2）血液的代謝組學(xué)結(jié)果。

1.4統(tǒng)計學(xué)原理本實驗使用高效液相色譜-質(zhì)譜法對血清代謝物譜實施檢查，實施PCA和最小化二乘法實施全面分析，識別模式，得到的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元化分析處理。

2結(jié)果

2.1氣虛血瘀型潰瘍者與正常對照組血清代謝學(xué)分析情況見圖1。

從圖譜的結(jié)果中筆者能夠看出，1.氣虛血瘀組存在移除現(xiàn)象，正常組無溢出；2.氣虛血瘀組和正常對照組不存在分離交集情況；由此能夠看出，病例組與對照組的代謝譜存在異常，證實和正常人相比，患者代謝水平有差異。

2.2氣虛血瘀組與正常組的比較分析情況見圖2。

從圖譜結(jié)果中筆者能夠看出：（1）氣虛血瘀型患者與對照組數(shù)據(jù)不存在溢出點(diǎn)；（2）氣虛血瘀型患者和對照組數(shù)據(jù)不存在分離交集現(xiàn)象；（3）和氣虛血瘀組相比，正常組分離情況更為顯著。上述結(jié)果證實，氣虛血瘀組與健康對照組的代謝水平上存在差異性。

3討論

3.1代謝組學(xué)的簡單介紹在蛋白質(zhì)組學(xué)，基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)被研究出成果后，代謝組學(xué)作為一種新學(xué)科，被相關(guān)學(xué)者所知曉，外國學(xué)者Nicho lson將代謝組學(xué)做出如下定義[4]：將動物相關(guān)組織與液體視為研究對象，對機(jī)體生理病理性刺激或者由基因修飾而產(chǎn)生的代謝物質(zhì)量比較動態(tài)變化情況。其研究對象為分子量小于1000kDa的小分子化合物。該學(xué)科主要對相關(guān)代謝路徑的底物和產(chǎn)物中的小分子物質(zhì)進(jìn)行研究，血清，腦脊液，唾液等均可以被視作研究樣本。當(dāng)前在代謝組學(xué)研究領(lǐng)域中，應(yīng)用最為廣泛的當(dāng)屬M(fèi)RI技術(shù)，質(zhì)譜技術(shù)，氣相色譜技術(shù)等等。代謝組學(xué)的產(chǎn)生，令西醫(yī)研究更具有前瞻性，對于中醫(yī)整體化觀念，證候的現(xiàn)代化研究等，也不再是夢想。

3.2中醫(yī)辨證法和代謝組學(xué)的關(guān)系代謝組學(xué)在一定程度上反應(yīng)出機(jī)體相關(guān)功能與分子集合的關(guān)聯(lián)性。幾乎所有對機(jī)體健康造成影響的因素均會在代謝組中有所體現(xiàn)，基因、環(huán)境、營養(yǎng)、藥物與時間最后會以代謝組對表達(dá)施加影響的方式加以展現(xiàn)。由此能夠看出，代謝組學(xué)屬于后基因組時代的新式研究方式，這種方式比較符合對中醫(yī)藥多層次，多靶點(diǎn)宏觀化研究。從對證候的分析中能夠看出，結(jié)合代謝組學(xué)平臺意義顯著，其研究方式也更加接近，中醫(yī)學(xué)研究中“司外揣內(nèi)”思維方法。其并不局限于受到外界影響因素后，一些物質(zhì)或者通路變化詳情，而是更加重視整體性變化，簡單的將，代謝組學(xué)能夠利用對于機(jī)體黑箱內(nèi)產(chǎn)生的代謝物加以觀察，結(jié)合對某個病癥組共性加以分析，進(jìn)而更好的理解發(fā)病過程中機(jī)體內(nèi)代謝情況與波動詳情。相關(guān)文獻(xiàn)指出，不同種類的消化性潰瘍中醫(yī)證型和健康對照組之間存在較為顯著差異，證該疾病性因素會對機(jī)體代謝系統(tǒng)造成顯著影響，進(jìn)而改變代謝模式。和濕熱證，氣滯證相比，氣虛血瘀證與上述兩種的代謝物譜并不一致。證實在中醫(yī)學(xué)理論中的“證”存在物質(zhì)性基礎(chǔ)，上述內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化為辨證產(chǎn)生的直接性原因，但也有可能是經(jīng)過某個代謝通路所造成的結(jié)果，在特殊階段內(nèi)，患者身體代謝產(chǎn)物類別和水平會呈現(xiàn)出一定變化，這或許能夠成為中醫(yī)證候量化標(biāo)準(zhǔn)。

3.3辨證應(yīng)分清虛實從中醫(yī)的角度來講，氣虛血瘀為虛實夾雜癥狀，該癥狀的產(chǎn)生和后天失養(yǎng)，先天不足等存在關(guān)聯(lián)性，在此因素下，機(jī)體遠(yuǎn)期不足，因氣虛無法推動基本運(yùn)行，血運(yùn)緩慢，進(jìn)而令瘀血內(nèi)阻，出現(xiàn)相關(guān)臨床癥狀。該證為長期病變演變而成，古代醫(yī)者葉天士曾經(jīng)這樣形容氣虛血瘀：“初病在氣，久病入血”。消化性潰瘍有著反復(fù)性發(fā)作，久治不愈的特征，隨著疾病的演變，必然呈現(xiàn)為氣虛血瘀癥，單純化脾虛癥甚為少見，氣虛血瘀癥為脾虛癥惡化結(jié)果。從病因上來講，兩者存在一定關(guān)聯(lián)性，因此氣虛血瘀癥也就可以成為虛癥之代表。

從代謝水平上來講，實證和虛證存在顯著差異，古代醫(yī)書《素問》有云：“邪氣盛則實，精氣奪則虛。[5]”《景岳全書》對虛證做出了下述闡述：“虛實者，有余不足也”[6]。值得說明的是，虛證與實證也是鑒別邪正盛衰的重要基礎(chǔ)，正邪之間的斗爭為發(fā)病過程中的矛盾點(diǎn)，由此能夠看出，分清實證和虛證有著非常重要的現(xiàn)實意義。

4小結(jié)

綜上所述，和對照組相比，氣虛血瘀癥在代謝譜上存在顯著差異，這些差異化代謝產(chǎn)物可能為病癥形成的物質(zhì)性基礎(chǔ)，在對患者進(jìn)行臨床診斷與治療的過程中，將中醫(yī)辨證理論與代謝組學(xué)全面結(jié)合，可起到辨別患者疾病嚴(yán)重程度，對于其疾病預(yù)后來講，有著非常重要的現(xiàn)實意義，在很大程度上增加了診斷客觀性，值得進(jìn)一步推廣使用。

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