青黛新三萜物質(zhì)合劑抗高危HPV病毒臨床療效觀察

帥麗華，胡志堅(jiān)，李婷，王敏，黎美仁，周英棠，鄒志梅，陳萍

（1、九江學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 九江33200；2、九江學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，江西 九江33200；3、九江學(xué)院省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)中心，江西 九江33200；4、九江學(xué)院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江西 九江33200）

青黛新三萜物質(zhì)合劑抗高危HPV病毒臨床療效觀察

帥麗華1，胡志堅(jiān)1，李婷2，王敏1，黎美仁2，周英棠3，鄒志梅4，陳萍4

（1、九江學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 九江33200；2、九江學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，江西 九江33200；3、九江學(xué)院省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)中心，江西 九江33200；4、九江學(xué)院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，江西 九江33200）

目的 觀察青黛新三萜物質(zhì)合劑抗高危HPV病毒的治療效果及其在預(yù)防宮頸癌病變發(fā)展中的作用。方法 高頻超聲提取青黛新三萜物質(zhì)，將其與枯礬、冰片聯(lián)合制成合劑，觀察其抗高危HPV病毒效果及對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及宮頸糜爛治療的有效率并與干擾素對(duì)比。結(jié)果 青黛新三萜物質(zhì)合劑組及干擾素組治療3月后HPV-DNA轉(zhuǎn)陰率分別為87.5%、71.4%，對(duì)CIN治療有效率分別為75.0%、44.0%，對(duì)宮頸糜爛治療有效率90.6%、47.1%。青黛新三萜物質(zhì)合劑組高危HPVDNA轉(zhuǎn)陰患者，治療結(jié)束后3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月再?gòu)?fù)查高危HPV-DNA均為陰性。結(jié)論 青黛新三萜物質(zhì)合劑是抗高危HPV病毒安全有效的中藥制劑，它在預(yù)防宮頸癌的發(fā)生、治療宮頸糜爛方面有確切的臨床價(jià)值。

青黛新三萜物質(zhì)；高危HPV病毒；宮頸上皮內(nèi)瘤變；宮頸癌；治療；預(yù)防

宮頸癌是一種嚴(yán)重危害婦女健康和生命的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）和宮頸癌的發(fā)病與人乳頭瘤病毒（HPV）感染密切相關(guān)，持續(xù)的高危型HPV感染是CINⅢ和宮頸癌發(fā)病的必要條件［1］。HPV病毒有一百多種血清型，導(dǎo)致宮頸癌的是HPV16，18，31，33，45，51，52，56，58，59，68等血清型，我們統(tǒng)稱為高危HPV病毒。文獻(xiàn)報(bào)道：隨CIN病變程度的加重，高危HPV感染率增高，且病毒含量越高，患高度病變的可能性越大［2］。因此有效的預(yù)防和治療生殖道高危HPV病毒感染是預(yù)防宮頸癌的有效方法。目前臨床上都是用干擾素治療高危型HPV感染，也有用中藥榆柏散聯(lián)合干擾素栓治療高危型HPV感染慢性子宮頸炎的報(bào)道［3］，其HPV轉(zhuǎn)陰率為70.5%。青黛是中藥復(fù)方中常用的一味藥，具有止血、解熱、抗炎、抑菌和抗病毒作用?！侗静菥V目》記載青黛：“去煩熱，癍瘡，陰瘡，殺惡蟲?！鼻圜焱夥竽軘繚?、消腫痛、解瘡毒、拔毒外出。常被外用于口舌生瘡、外陰潰瘍、濕疹、帶狀皰疹等疾?。?］。本研究從青黛中分離純化出一個(gè)新的三萜化合物，觀察其抗高危HPV病毒效果，希望在中醫(yī)藥領(lǐng)域中尋求一個(gè)有效易行治療宮頸高危HPV病毒感染，阻斷向?qū)m頸癌病變發(fā)展的新途徑。

1　資料與方法

1.1病例選擇宮頸炎、宮頸癌等臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2008年《婦產(chǎn)科學(xué)》（第7版）診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］。細(xì)胞學(xué)診斷采用目前國(guó)際統(tǒng)一的TBS診斷系統(tǒng)［6］。納入病例：⑴年齡20～59歲有性生活史的女性。⑵臨床檢查符合炎癥、CIN分級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn)并且高危HPV陽(yáng)性者。⑶就診前2月宮頸局部未進(jìn)行物理治療，前2周內(nèi)未進(jìn)行藥物及其他相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并霉菌性陰道炎或嚴(yán)重的盆腔炎患者。⑵合并嚴(yán)重的心、肝、腎、血液系統(tǒng)疾病及精神病患者。⑶妊娠期或哺乳期婦女。

1.2病例資料研究對(duì)象為2014年1月至2015 年3月我院婦科患者97例，均為高危HPV-DNA陽(yáng)性，經(jīng)宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查（LPT）報(bào)告為炎癥、非典型鱗狀上皮意義不明（ASCUS）或低度鱗狀上皮內(nèi)病變 （LSIL），并行病理組織學(xué)檢查診斷為炎癥、CINⅠ、CINⅡ的病例。按就診順序隨機(jī)分為青黛新三萜物合劑組、干擾素組和未治療的高危HPV陽(yáng)性組。青黛新三萜物合劑組32例，其中24例為CIN患者，32例均合并有不同程度宮頸糜爛，年齡（36.4±11.3）歲。干擾素組35例，其中25例為CIN患者，34例均合并不同程度宮頸糜爛，年齡（35.6±10.8）歲。對(duì)照組：未治療的高危HPV陽(yáng)性組30例患者，其中CIN者19例，25例均合并宮頸糜爛，年齡（35.1±10.6）歲。三個(gè)組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3研究方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)步驟宮頸分泌物高危HPV-DNA檢測(cè)（Hybrid CaptureⅡ簡(jiǎn)稱：HC2）陽(yáng)性，同時(shí)進(jìn)行宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）異?；蜓装Y的患者，行陰道鏡檢查，對(duì)醋白試驗(yàn)陽(yáng)性 （5%冰醋酸作用下持續(xù)3～5min呈瓷白色混濁不透明）及可疑部位進(jìn)行宮頸活檢，經(jīng)病理報(bào)告為不典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASCUS）或CINⅠ、CINⅡ者入選，并給予相應(yīng)治療，完成療程后3個(gè)月采取同樣方法復(fù)查。

1.3.2檢查項(xiàng)目 ⑴宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查L(zhǎng)PT，TBS分級(jí)系統(tǒng)進(jìn)行診斷報(bào)告。⑵高危HPV-DNA檢測(cè)：采用原位雜交捕獲HPV-DNA檢測(cè)技術(shù)，HC2（美國(guó)QIAGEN Gaither-sburg公司產(chǎn)品，獲得美國(guó)FDA認(rèn)證，歐洲CE認(rèn)證，中國(guó)藥監(jiān)局認(rèn)證產(chǎn)品），該實(shí)驗(yàn)?zāi)芡瑫r(shí)檢測(cè) 13種高危型 HPV（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68）病毒。（3）病理組織學(xué)檢查：在電子陰道鏡輔助下對(duì)宮頸局部醋白試驗(yàn)陽(yáng)性部位及可疑處取組織活檢，制成3μm厚切片，蘇木素伊紅染色（HE染色）后由病理學(xué)專家診斷。

1.3.3青黛新三萜物質(zhì)合劑的配制與儀器青黛粉、枯礬、冰片三味藥材購(gòu)自九江開(kāi)心人大藥房，將青黛粉以95%乙醇超聲提取3次，每次15min，合并三次提取液濃縮至浸膏，得到青黛新三萜物質(zhì)。將枯礬、冰片研成極細(xì)末，由青黛新三萜物質(zhì)、枯礬、冰片按5：2：1的比例配制后加75%酒精浸泡1h，再55℃烘烤1h，室溫自然冷卻，然后冷凍干燥制成青黛新三萜物質(zhì)合劑。儀器：摩爾實(shí)驗(yàn)室超純水設(shè)備（重慶摩爾生物技術(shù)有限公司），立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠），西門子冰箱，高頻數(shù)控超聲波提取儀KQ-500TDV（昆山市超聲儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （萊伯泰科EV341），真空冷凍干燥機(jī)（北京松源華興科技發(fā)展有限公司）。

1.4治療方法

1.4.1藥物和使用方法、注意事項(xiàng)⑴青黛新三萜物質(zhì)合劑：于月經(jīng)干凈3d開(kāi)始，每晚睡前先清潔會(huì)陰部，戴無(wú)菌手套用帶線無(wú)菌棉球醮青黛新三萜物質(zhì)合劑0.3～0.4g涂敷于宮頸口及其周圍，有宮頸糜爛者，無(wú)菌棉球放置一晚第二起床時(shí)再用線拉出，每晚一次，每個(gè)月經(jīng)間期中的20d為一療程。⑵重組人干擾素α2b陰道泡騰膠囊（辛復(fù)寧）：有效成分為重組人干擾素α2b，每粒80萬(wàn)IU，月經(jīng)干凈3d開(kāi)始于睡前1粒置入陰道后穹隆處，每日一次，每次一粒，10次為一療程，每月連續(xù)治療二個(gè)療程，上海華新生物高技術(shù)有限公司生產(chǎn)。二組治療患者治療期間禁止坐浴和性生活，月經(jīng)期停止上藥。治療組每晚清潔貼身內(nèi)褲，并用2%優(yōu)氯凈浸泡1晚，消毒清洗處理。對(duì)患者配偶尿道口分泌物進(jìn)行高危HPV-DNA檢查，若有陽(yáng)性者，徹底清潔外生殖器及會(huì)陰部，并碘伏消毒處理，由泌尿科醫(yī)生治療處理。

1.4.2觀察指標(biāo)及療效判定用藥治療的二組患者，每月于下次月經(jīng)干凈3d來(lái)院復(fù)查1次，HC2復(fù)查高危HPV-DNA，以3月為限。觀察患者白帶情況，宮頸局部糜爛的好轉(zhuǎn)情況，有無(wú)過(guò)敏情況，血、尿常規(guī)，肝、腎功能。定期電話隨診觀察其白帶情況及臨床反應(yīng)。根據(jù)病理組織學(xué)診斷判定CIN的療效；參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)》［7］判定宮頸糜爛療效。對(duì)照組于3月后復(fù)查高危HPV-DNA陽(yáng)性情況。

1.4.3觀察復(fù)發(fā)情況青黛新三萜物質(zhì)合劑組于治療結(jié)束后3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月，取宮頸上皮細(xì)胞HC2再?gòu)?fù)查高危HPV-DNA，觀察高危HPV是否復(fù)發(fā)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1臨床療效⑴青黛新三萜物質(zhì)合劑組及干擾素組HPV-DNA轉(zhuǎn)陰率分別為 87.5%（28/32）、71.4%（25/35）（χ2=2.612，P=0.106）。見(jiàn)表1。⑵以治療后CINⅡ轉(zhuǎn)為CINⅠ或ASCUS，或者CINⅠ轉(zhuǎn)為ASCUS或炎癥或無(wú)上皮內(nèi)病變等，由高級(jí)向低轉(zhuǎn)化為對(duì)CIN治療有效，青黛新三萜物質(zhì)合劑組及干擾素組對(duì)CIN治療有效率分別為75.0%（18/24）、44.0%（11/25）（χ2=4.873，P＜0.05）。⑶青黛新三萜物質(zhì)合劑組及干擾素組對(duì)宮頸糜爛治療有效率90.6% （29/32）、47.1%（16/34）（χ2=14.422，P＜0.001）。見(jiàn)圖1。

表1　治療組及對(duì)照組HPV-DNA轉(zhuǎn)陰率比較

2.2青黛新三萜物質(zhì)合劑組28例高危HPV-DNA轉(zhuǎn)陰患者，于治療結(jié)束后3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月，取宮頸上皮細(xì)胞 HC2再?gòu)?fù)查高危HPV-DNA，結(jié)果均為陰性。

圖1　二類藥治療不同疾病的有效率

2.3不良反應(yīng)二組治療組患者均未發(fā)現(xiàn)肝、腎功能異常者，血、尿常規(guī)亦均在正常范圍內(nèi)。也未發(fā)現(xiàn)青黛新三萜物質(zhì)合劑有過(guò)敏反應(yīng)及其他任何不良反應(yīng)。

3　討論

近年來(lái)，生殖道HPV感染日益增加，其臨床感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的相關(guān)性已成為倍受醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)之一。國(guó)內(nèi)有報(bào)道高危HPV、液基薄層細(xì)胞學(xué)配合陰道鏡檢查對(duì)宮頸癌前病變篩查的必要性及診斷價(jià)值［8］及類似報(bào)道［9，10］。由于女性生殖道生理解剖結(jié)構(gòu)特殊，因此是HPV易感部位，同時(shí)也是其他婦科病原菌的寄生之處［11］。也有報(bào)道淋病奈瑟菌、沙眼衣原體或解脲支原體陽(yáng)性是高危型HPV感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［12］，說(shuō)明高危型HPV感染是建立在宮頸炎癥基礎(chǔ)之上的，而不是孤立存在的。青黛有清熱解毒、抗病毒、涼血散結(jié)消腫功效，有用青黛與重樓、冰片一起外敷用于抗流行性腮腺炎病毒的報(bào)道［13］，亦有用青黛散治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的報(bào)道［14］，青黛含靛藍(lán)、靛玉紅等成分，靛玉紅已證實(shí)可抑制多種細(xì)胞的DNA合成，對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖分化起調(diào)控作用［15］。而且我們還發(fā)現(xiàn)近幾年來(lái)在臨床上有口服復(fù)方青黛膠囊治療重癥牛皮癬的情況，可見(jiàn)青黛的功用在臨床上越來(lái)越受到重視。本研究為了觀察青黛新三萜物質(zhì)抗高危HPV病毒的治療效果并加速宮頸糜爛等瘡面的愈合，以阻斷向?qū)m頸癌發(fā)展的途徑，由醫(yī)療與實(shí)驗(yàn)中心多部門聯(lián)合，超聲提取青黛新三萜物質(zhì)，并將青黛新三萜物質(zhì)與枯礬、冰片聯(lián)合制成合劑，用于感染高危HPV病毒、宮頸低級(jí)別病變患者的治療，經(jīng)過(guò)3個(gè)月的臨床觀察，青黛新三萜物質(zhì)合劑治療組高危HPV轉(zhuǎn)陰率達(dá)到87.5%，其療效雖然與目前治療HPV感染常用藥物干擾素（總有效率71.4%）比較無(wú)明顯差異，但都可用于高危型HPV病毒的治療，且青黛新三萜物質(zhì)合劑可加速宮頸糜爛等瘡面的愈合，其療效甚至更好。28例高危HPV-DNA轉(zhuǎn)陰患者，于治療結(jié)束后3個(gè)月、6個(gè)月及12個(gè)月再?gòu)?fù)查高危HPV-DNA，結(jié)果均為陰性，療效確切，同時(shí)，青黛新三萜物質(zhì)合劑治療CIN的總有效率也達(dá)到75%，效果與干擾素比較有明顯差異（P＜0.05）。治療CIN的有效與高危HPV-DNA陰轉(zhuǎn)聯(lián)合阻斷了向?qū)m頸癌病變發(fā)展的途徑，說(shuō)明青黛新三萜物質(zhì)合劑的使用對(duì)預(yù)防宮頸癌的發(fā)生有確切的臨床價(jià)值。藥方中三種中藥成分的作用相輔相成，青黛新三萜物質(zhì)在抗病毒、散結(jié)消腫和抗細(xì)胞間變方面起主要作用，而枯礬起燥濕、止血、解毒、殺蟲的作用，冰片具有涼血斂瘡、散熱宣毒、消腫止痛、防腐生肌，促進(jìn)傷口愈合的效用。

10例干擾素治療失敗者，改用本研究組方法青黛新三萜物質(zhì)合劑治療三月，9例高危HPVDNA轉(zhuǎn)陰，效果顯著。

上述研究也表明：青黛新三萜物質(zhì)合劑作為中藥制劑，對(duì)于宮頸糜爛治療3月的總有效率達(dá)90.6%，與干擾素比較有顯著的差異（P＜0.001）?？梢?jiàn)干擾素在治療宮頸糜爛的療效顯然不如青黛新三萜物質(zhì)合劑。

綜上所述，我們選擇青黛新三萜物質(zhì)合劑治療高危型HPV感染和輕度CIN取得良好的效果，同時(shí)取得了青黛新三萜物質(zhì)合劑對(duì)宮頸糜爛的明顯療效，治療期間未見(jiàn)肝、腎功能、血細(xì)胞等異常，是較為安全的中藥制劑。尤其對(duì)干擾素治療失敗者，它是很好的替代藥物。

近年來(lái)，宮頸癌發(fā)生率有所下降，與通過(guò)高危HPV檢測(cè)來(lái)篩查宮頸癌及癌前病變的廣泛應(yīng)用是分不開(kāi)的［16］。對(duì)于CINⅠ合并有高危HPV病毒持續(xù)陽(yáng)性患者，臨床在抗HPV治療同時(shí)常選用利普刀手術(shù)治療；CINⅡ合并有高危HPV病毒持續(xù)陽(yáng)性患者，臨床可選用利普刀手術(shù)或?qū)m頸錐切術(shù)進(jìn)行治療；對(duì)于CINⅡ級(jí)累及腺體或CINⅢ級(jí)及以上病變的治療，臨床常采用宮頸錐切術(shù)，宮頸次全切除術(shù)等外科手術(shù)進(jìn)行干預(yù)治療，青黛新三萜物質(zhì)合劑作為抗高危HPV病毒的較有效藥物，進(jìn)行術(shù)后或放化療的聯(lián)合應(yīng)用，不失為一種好的治療措施。

本研究由于所檢測(cè)試驗(yàn)復(fù)雜，加上病人依從性和自愿的原則所限，樣本例數(shù)有限，還需要更大樣本量的支持。

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The observation of clinical therapeutic effect of the indigo naturalis new triterpene substances against high-risk HPV virus

SHUAI Lihua1，HU Zhijian1，LI Tin2，WANG Min1，LI Meiren2，ZHOU Yingtang3，ZOU Zhimei4，CHEN Ping4.1.Department of Clinical Laboratory，Jiujiang University Hospital，Jiujiang Jiangxi 332000，China；2.Department of Clinical Pathology，Jiujiang University Hospital，Jiujiang Jiangxi 332000，China；3.Key Laboratory of Provincial Experiment Center，Institute of Medicine and Life Science of Jiujiang University，Jiujiang Jiangxi 332000，China；4.Department of gynaecology and obstetrics，Jiujiang University Hospital，Jiujiang Jiangxi 332000，China.

Objective To observe the effect of the indigo naturalis new triterpene substances against high-risk HPV virus and the function in preventing the occurrence and development of cervical cancer.Methods We extracted the indigo naturalis new triterpene substances by high frequency ultrasound and made mixture with dried alum and bomeol.Then we observed its role against high-risk HPV virus and the effective rates of treatment to cervical intraepithelial neoplasias（CIN）and cervical erosion，with comparison of treatment by interferon.Result The seroconversion rate of high-risk HPV DNA，when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 87.5%，and the rate was 71.4%when treated by interferon 3 months later；The effective rate of CIN，when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 75.0%，and the rate was 44.0% when treated by interferon 3 months later；The therapeutical effective rate of cervical erosion，when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 90.6%，and the rate was 47.1%when treated by interferon 3 months later.The patients who were positive for high-risk HPV DNA，were treated by indigo naturalis new triterpene substances，then turned to negative.3 months，6 months and 12 months later，the results of the high-risk HPV DNA were still negative.Conclusion Indigo naturalis new triterpene substances which are traditional Chinese medicine，can effectively treat against high-risk HPV virus.It has a precise clinical value to prevent cervical cancer，and to treat cervical erosion.

Indigo naturalis new triterpene substances；High-risk HPV virus；Cervical intraepithelial neoplasias（CIN）；Cervical cancer；Treatment；Preventation

R737.33，R730.231+.2

A

1674-1129（2016）04-0442-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.010

九江市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目九財(cái)教〔2013〕64號(hào)：130

帥麗華，女，1972年4月出生，學(xué)士，副主任技師/講師，主要從事病原微生物檢測(cè)和抗感染治療。Tel：0792-2180124，E-mail：liwa33@163.com。

周英棠，男，1981年10月出生，博士，研究方向?yàn)榉肿由飳W(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)Tel：18607922163，E-mail：18607922163@163. com。

（2016-05-11；

2016-07-28）