六君子湯提取物抑制食管癌Ec9706細胞增殖及其對信號轉導和轉錄活化因子3信號通路的影響

崔姍姍，高小玲，王慧慧，吳耀松，尹素改，陳玉龍

?

·論著·

·中醫(yī)·中西醫(yī)結合研究·

六君子湯提取物抑制食管癌Ec9706細胞增殖及其對信號轉導和轉錄活化因子3信號通路的影響

崔姍姍，高小玲，王慧慧，吳耀松，尹素改，陳玉龍

目的研究六君子湯提取物對食管癌Ec9706細胞增殖的抑制作用及其對信號轉導和轉錄活化因子3(STAT3)信號通路的影響。方法于2013—2015年，采用70%乙醇提取六君子湯，正丁醇、乙酸乙酯及水提法過夜萃取，用MTT法觀察提取物對Ec9706細胞活性的影響，選取最優(yōu)提取部位，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法觀察六君子湯乙酸乙酯部位對Ec9706細胞分泌相關細胞因子〔包括白介素6(IL-6)、轉化生長因子β1(TGF-β1)、血管內皮生長因子(VEGF)〕的影響，采用Western-blotting法測定六君子湯乙酸乙酯部位對食管癌Ec9706細胞STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表達的影響。結果對照組、六君子湯70%乙醇部位、六君子湯正丁醇部位、六君子湯水提部位Ec9706細胞OD值比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=448.90，P<0.01)。藥物處理組對Ec9706細胞生長的抑制效果依次為：六君子湯正丁醇部位>六君子湯70%乙醇部位>六君子湯水提部位。六君子湯乙酸乙酯部位Ec9706細胞OD值比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=19.78，P<0.001)。在250 μg/ml時，六君子湯70%乙醇部位、六君子湯正丁醇部位、六君子湯水提部位對Ec9706細胞的抑制率分別為7.31%、23.24%、-25.07%，而在200 μg/ml時，六君子湯乙酸乙酯部位對Ec9706細胞的抑制率為77.03%，抑制效果明顯優(yōu)于其他部位，故篩選的有效部位為六君子湯乙酸乙酯部位。應用概率法計算六君子湯乙酸乙酯部位抑制率IC35、IC50、IC70，代表低、中、高濃度，相應的濃度為63.08、93.00、133.70 μg/ml。對照組、六君子湯低濃度組、六君子湯中濃度組IL-6、TGF-β1、VEGF水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；其中六君子湯低濃度組、六君子湯中濃度組IL-6、TGF-β1、VEGF水平低于對照組(P<0.05)。對照組、六君子湯低濃度組、六君子湯中濃度組STAT3、p-STAT3表達水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中六君子湯低濃度組、六君子湯中濃度組STAT3、p-STAT3表達水平低于對照組(P<0.05)。結論六君子湯不同試劑提取物中，乙酸乙酯提取物抑制食管癌細胞增殖作用最強，其抑制作用可能與調節(jié)STAT3信號通路有關。

食管腫瘤；六君子湯；提取物；乙酸乙酯；STAT3

崔姍姍，高小玲，王慧慧，等.六君子湯提取物抑制食管癌Ec9706細胞增殖及其對信號轉導和轉錄活化因子3信號通路的影響[J].中國全科醫(yī)學，2016，19(24)：2948-2952.[www.chinagp.net]

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食管癌(esophageal carcinoma)是人類常見的惡性腫瘤之一，居全球癌癥所致死因的第6位[1-2]，5年生存率不足20%[3-4]。中醫(yī)藥學對食管癌具有深刻的認識和悠久的診療歷史，健脾和胃法是食管癌中醫(yī)臨床辨治的基本法則，六君子湯是健脾和胃的代表方劑。六君子湯水煎劑和乙醇提取物可直接抑制食管癌Ec9706細胞的體外增殖，下調腫瘤細胞血管內皮生長因子(VEGF)和白介素6(IL-6)的分泌，從而阻止腫瘤細胞引起的血管生成、內皮細胞的增殖及遷移和小管形成[5-6]，但具體分子作用機制仍需探究。信號轉導和轉錄活化因子3(STAT3)作為一種重要的核轉錄因子介導的信號，與食管癌發(fā)生、發(fā)展和轉移關系密切[7-8]。為了研究六君子湯對食管癌細胞增殖的抑制作用機制，本實驗采用乙醇、正丁醇、乙酸乙酯及水提法提取六君子湯，觀察這4種試劑的提取物對食管癌細胞增殖的抑制作用，并研究其對STAT3信號通路的影響。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗時間與實驗材料2013—2015年，人食管鱗癌細胞株Ec9706，由河南中醫(yī)學院分子生物中心提供，本實驗室傳代培養(yǎng)。

1.1.2實驗藥品六君子湯的藥物組成：人參3.0 g、生白術4.5 g、茯苓3.0 g、生甘草3.0 g、陳皮3.0 g、清半夏4.5 g。上述藥物均購于北京同仁堂鄭州藥店有限責任公司，經河南中醫(yī)藥大學苗艷艷副研究員鑒定皆為正品。

1.1.3主要試劑95%乙醇分析純(天津市科密歐化學試劑有限公司)，乙酸乙酯分析純、正丁醇分析純(天津富宇精細化工有限公司)，胰蛋白酶消化液(Solarbio公司，批號：20130424)，胎牛血清(Gibco公司，批號：1133067)，RPMI Medium1640(Solarbio公司，批號：20130416)，四甲基偶氮唑鹽(MTT，Solarbio公司，批號：M8180)，二甲基亞砜(DMSO，Amresco，批號：302A0315)，IL-6、轉化生長因子β1(TGF-β1)、VEGF酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測試劑盒(Boster公司，批號：13110971028、2271072108、25310561028)，凝膠配制試劑盒(Boster公司，批號：09K03A38)，磷酸酶抑制劑(Thermo公司，批號：OD182286)，苯甲基磺酰氟(PMSF)(Boster公司，批號：09F05A78)，RIPA裂解液(Boster公司，批號：09F12B05)，兔抗人STAT3(proteintech公司，批號：10253-2-AP)，磷酸化STAT3(p-STAT3)(Tyr-705)(abcam，批號：ab76315)，兔抗人β-tublin(santacruz公司，批號：L1713)，山羊抗兔IgG(proteintech公司，批號：SA00001-2)，ECL Plus超敏發(fā)光液A和B(Solarbio公司，批號：20141118)。

1.1.4主要儀器CO2培養(yǎng)箱(德國Eppendorf公司)，超凈工作臺(蘇州安泰空氣技術有限公司)，熒光倒置相差顯微鏡(德國Laica公司)，ELx-800型酶標儀(BIO-TEK公司)，RE-3000B旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，垂直電泳槽、濕轉儀(上海天能儀器公司)，全能型凝膠成像分析儀(Bio-Rad公司)，低溫高速冷凍離心機(HITACHICR 226)。

1.2實驗方法

1.2.1藥物提取

1.2.1.1乙醇回流提取稱取六君子湯100副藥量(2 100 g)，粉碎機制成粗粉后混勻各藥。以M(藥物重量)∶V(70%乙醇體積)=1∶8混勻，置于加熱套內，連接回流冷凝裝置和真空泵。設置加熱溫度為50 ℃，待70%乙醇浸液沸騰后開始計時，1.5 h后，關閉電源，過濾藥液，室溫放置。將濾得藥渣重復上述操作，進行第2次醇提，時間為1 h，過濾后與第1次醇提液混合，靜置過夜，取上清液，藥渣棄之。

1.2.1.2萃取回收乙醇提液置無醇味后濃縮藥液，濃縮至體積大約與生藥總重量相當，即每毫升含1 g生藥。量取1/20體積濃縮液作為70%乙醇部位，余下濃縮液(19/20體積)與乙酸乙酯體積比為2∶1進行萃取，第1次萃取前需靜置過夜。萃取6次，每隔2 h將分液漏斗上下顛倒7～8次。合并6次萃取液，負壓抽濾，收集濾液，置于旋轉蒸發(fā)儀中，減壓回收乙酸乙酯后，轉移至蒸發(fā)皿，置58 ℃恒溫水浴鍋上繼續(xù)濃縮、低溫真空干燥，刮藥、稱重。收集最后一次乙酸乙酯萃取時下層水相液體，揮發(fā)殘留乙酸乙酯，進行水飽和正丁醇萃取，操作同前(2∶1萃取)。收集最后一次正丁醇萃取時下層水相，即水部位。最終獲得各部位提取物。

1.2.2細胞培養(yǎng)Ec9706細胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，置于37 ℃飽和濕度、體積分數(shù)為5% CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，2～3 d換液1次，3～4 d傳代1次，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。

1.3MTT檢測六君子湯提取物對人食管鱗癌Ec9706細胞增殖的影響取處于對數(shù)生長期的Ec9706細胞，按104/孔的細胞密度接種于96孔板中，將96孔板置于CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，棄去培養(yǎng)液。70%乙醇部位、正丁醇部位、水提部位分別設置相同的濃度梯度(125、250、500、1 000 μg/ml)；乙酸乙酯部位設置6個濃度梯度(6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 μg/ml)；設置含相同體積分數(shù)DMSO的RPMI 1640培養(yǎng)基作為對照組。細胞加提取物培養(yǎng)48 h后，棄去培養(yǎng)液，每孔加入0.5 g/L MTT液100 μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，吸去上液，每孔加入DMSO 150 μl，在搖床上輕輕震蕩15 min，待孔內紫色結晶完全溶解后用酶標儀在570/630 nm處測各孔吸光度(OD值)，計算各用藥組的平均抑制率，細胞抑制率=(對照組OD值-實驗組OD值)/對照組OD值×100%。實驗重復4次，取平均值。

1.4ELISA試劑盒檢測六君子湯乙酸乙酯提取物對Ec9706細胞分泌相關細胞因子的影響取處于對數(shù)生長期的Ec9706細胞，按104/孔的細胞密度接種于96孔板中，將96孔板置于CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，棄去培養(yǎng)液，加入IC35濃度63.08 μg/ml、IC50濃度93.00 μg/ml乙酸乙酯提取物，培養(yǎng)48 h后，收集各瓶細胞上清液，以1 500 r/min離心5 min，離心半徑18 cm，重復離心1次，將上清液轉移至對應離心管中，共5管(低、高濃度各2管，對照1管)，標記，-20 ℃保存。采用ELISA試劑盒檢測Ec9706細胞IL-6、TGF-β1、VEGF水平，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5Western-blotting法測定細胞中STAT3和p-STAT3蛋白的表達細胞加乙酸乙酯提取物培養(yǎng)48 h后，終止培養(yǎng)，收集各皿上清液，標記各管，以1 500 r/min離心5 min，離心半徑18 cm，棄上清液；皿內加入2 ml 4 ℃ 1×PBS，用細胞刮刀緩慢勻速的刮下貼壁細胞，提取細胞總蛋白，測定蛋白濃度；配制10%分離膠，上樣蛋白量20 μg/孔，濃縮膠和分離膠所用電壓和時間分別設定為80 V/30 min和120 V/60 min；轉膜、雜交、將NC膜放置于保鮮膜上，將ECL化學發(fā)光顯色液A和B按1∶1配置后均勻加到膜上。用全能型凝膠成像分析系統(tǒng)拍照并分析目標條帶的光密度值。實驗重復3次，取平均值。

2　結果

2.1六君子湯提取物影響人食管鱗癌Ec9706細胞生長有效部位的篩選對照組、六君子湯70%乙醇部位、六君子湯正丁醇部位、六君子湯水提部位Ec9706細胞OD值比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=448.90，P<0.01)；其中六君子湯水提部位各濃度對Ec9706細胞生長有促進作用；六君子湯70%乙醇部位、六君子湯正丁醇部位均存在最高濃度(1 000 μg/ml)抑制細胞生長而中低濃度促進或抑制細胞生長的特點。整體藥物處理組對Ec9706細胞生長的抑制效果依次為：六君子湯正丁醇部位>六君子湯70%乙醇部位>六君子湯水提部位(見表1)。六君子湯乙酸乙酯部位Ec9706細胞OD值比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=19.78，P<0.001，見表2)。在250 μg/ml時，六君子湯70%乙醇部位、六君子湯正丁醇部位、六君子湯水部位對Ec9706細胞的抑制率較弱，分別為7.31%、23.24%、-25.07%，而在200 μg/ml時，六君子湯乙酸乙酯部位對Ec9706細胞的抑制率為77.03%，抑制效果明顯優(yōu)于六君子湯70%乙醇部位、六君子湯正丁醇部位、六君子湯水部位，故重點研究六君子湯乙酸乙酯部位。

Table 1Dose-effect relationship of the inhibition of Liujunzi decoction extract on the proliferation of Ec9706 cells

組別濃度(μg/ml)OD值抑制率(%)對照組-1.532±0.011-六君子湯70%乙醇部位10001.369±0.06310.645001.531±0.1110.072501.644±0.0757.311251.742±0.067-13.73六君子湯正丁醇部位10000.483±0.064a68.495001.204±0.059a21.392501.176±0.162a23.241251.584±0.170-3.37六君子湯水提部位10001.552±0.037-1.285001.822±0.057a-18.912501.916±0.173a-25.071251.917±0.259a-25.13

注：-為無此數(shù)值；與對照組比較，aP<0.05；抑制率為負值時代表藥物促進了Ec9706細胞生長

2.2六君子湯乙酸乙酯部位對人食管癌Ec9706細胞分泌細胞因子的影響應用概率法計算六君子湯乙酸乙酯部位抑制率IC35、IC50、IC70，代表低、中、高濃度，記為六君子湯：IC35%=63.08 μg/ml，IC50%=93.00 μg/ml，IC70%=133.70 μg/ml。對照組、六君子湯低濃度組、六君子湯中濃度組IL-6、TGF-β1、VEGF水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；其中六君子湯低濃度組、六君子湯中濃度組IL-6、TGF-β1、VEGF水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表3)。2.3六君子湯乙酸乙酯部位對人食管癌Ec9706細胞STAT3和p-STAT3表達的影響對照組、六君子湯低濃度組、六君子湯中濃度組STAT3、p-STAT3表達水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中六君子湯低濃度組、六君子湯中濃度組STAT3、p-STAT3表達水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表4、圖1)。

Table 2Dose-effect relationship of the inhibition of the ethyl acetate part of Liujunzi decoction on the proliferation of Ec9706 cells

組別濃度(μg/ml)OD值抑制率(%)對照組-1.273±0.150-六君子湯乙酸乙酯部位200.000.292±0.012a77.03100.000.142±0.020a88.8750.000.801±0.268a37.0425.001.071±0.23215.8212.501.199±0.1355.816.251.230±0.0223.51

注：-為無此數(shù)值；與對照組比較，aP<0.05

Table 3Comparison of the levels of Liujunzi decoction on Ec9706 cell secreting cytokines in control group,low concentration and medium concentration groups

組別IL-6TGF-β1VEGF對照組125.05±2.17655.41±253.83820.01±126.51六君子湯低濃度組100.77±21.16a38.46± 5.99a574.94±43.56a六君子湯中濃度組73.99±7.30a37.07± 4.57a598.28±80.55aF值15.4823.678.99P值<0.01<0.01<0.01

注：與對照組比較，aP<0.01；IL-6=白介素6，TGF-β1=轉化生長因子β1，VEGF=血管內皮生長因子

Table 4Comparison of the expression levels of p-STAT3 and STAT3 in Ec9706 cells of the control group,low concentration and medium concentration groups of Liujunzi decoction

組別STAT3p-STAT3對照組1.22±0.271.19±0.18六君子湯低濃度組0.82±0.15a0.19±0.12a六君子湯中濃度組0.68±0.09a0.22±0.05aF值3.242.25P值0.04<0.01

注：與對照組比較，aP<0.05；STAT3=信號轉導和轉錄活化因子3，p-STAT3=磷酸化STAT3

注：STAT3=信號轉導和轉錄活化因子3，p-STAT3=磷酸化STAT3

圖1對照組、六君子湯低濃度組和六君子湯中濃度組對Ec9706細胞STAT3和p-STAT3表達水平

Figure 1Expression levels of p-STAT3 and STAT3 in Ec9706 cells of the control group,the low concentration and medium concentration groups of Liujunzi decoction

3　討論

中藥復方是中醫(yī)臨床普遍應用的治療方式。目前，對中藥復方的研究已不局限于水煎劑，在傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論和現(xiàn)代科學理論與技術的結合下，研究復方有效部位群，不僅保留了原中藥性味功能，而且通過研究復方制劑藥理、質量可控的化學成分體系、規(guī)范制劑工藝等，保證了用藥穩(wěn)定性和安全性[9]。中藥復方的有效部位是指具有相近化學性質的一類化合物(藥效成分群)[10]。“有效浸出物─有效部位(群)─有效成分”這種研究思路為現(xiàn)階段大多數(shù)科學工作者所采取。

本實驗中，將六君子湯用70%乙醇加熱回流提取后進行乙酸乙酯和正丁醇萃取，首次將各部位作用于Ec9706細胞，用MTT法對六君子湯提取物不同濃度培養(yǎng)的Ec9706細胞進行細胞毒性檢測，初步篩選出乙酸乙酯部位作為本實驗的有效部位。結果顯示不同濃度的乙酸乙酯部位提取物均不同程度地抑制Ec9706細胞增殖，且濃度梯度低于70%乙醇部位、正丁醇部位和水提部位。乙酸乙酯可提取出極性較小的游離生物堿、有機酸、黃酮及香豆素等；正丁醇可提出皂苷等極性較大物質；乙醇可提出苷類、生物堿或有機酸鹽類；水可提取出糖類、氨基酸、蛋白質、無機鹽類等水溶性成分。六君子湯乙酸乙酯部位可完全溶解于DMSO，但在工作液配制過程中，RPMI 1640溶液中卻出現(xiàn)了不溶物，因而實際發(fā)揮作用的成分可能含量更少。

研究表明，腫瘤細胞在發(fā)生發(fā)展、浸潤轉移過程中可通過自分泌-旁分泌形式產生一系列細胞因子，如VEGF、白介素(IL)-10、IL-6、前列腺素E2(PGE2)、TGF-β等，參與腫瘤細胞介導的免疫抑制對抗機體的免疫反應[11]。本實驗選取六君子湯乙酸乙酯部位對Ec9706細胞抑制率分別為35%和50%時相應的濃度，作為中、低濃度組，應用ELISA技術檢測上清液中IL-6、TGF-β1和VEGF水平。結果顯示，六君子湯乙酸乙酯部位可降低IL-6、TGF-β1和VEGF的表達，從而抑制Ec9706細胞增殖。

STAT3在組織中分布較廣，參與細胞增殖、分化、凋亡、轉化、細胞免疫等重要的生理病理過程[10]。STAT3和p-STAT3與腫瘤的進展密切相關。在食管癌組織中，STAT3陽性率明顯高于癌旁組織，與組織分化程度呈負相關[12]。STAT3蛋白過度表達及磷酸化可推動食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展及惡性演進[13-15]。IL-6家族的共同受體-gp130參與了STAT3的活化，JENKINS等[15]研究發(fā)現(xiàn)，STAT3的缺失突變，基本能完全逆轉gp130突變小鼠導致的脾腫大、肝急性相反應、淋巴細胞異?；罨白园l(fā)的胃竇癌。TGF-β1能夠促進HepG2細胞發(fā)生EMT，并激活JAK-STAT3通路，而VEGF是STAT3的靶基因[16-18]。本研究結果顯示，六君子湯乙酸乙酯部位STAT3、pSTAT3表達水平低于對照組，說明六君子湯乙酸乙酯部位可以降低STAT3活性。

本實驗結果顯示，六君子湯乙酸乙酯部位作用下的Ec9706細胞表達STAT3和p-STAT3水平均明顯降低，說明STAT3的活化被阻斷，能有效抑制細胞增殖和促進凋亡，使其不能發(fā)揮惡性作用。IL-6、TGF-β1、VEGF含量均降低，說明六君子湯乙酸乙酯部位既能降低STAT3上游分子IL-6、TGF-β1分泌，又能降低STAT3表達和活性，從而降低其下游分子VEGF表達。由此通過干擾STAT3信號通路中相關分子起到抑制腫瘤細胞增殖的作用。

作者貢獻：崔姍姍進行實驗設計與實施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對文章負責；高小玲、王慧慧、吳耀松、尹素改進行實驗實施、評估、資料收集；陳玉龍進行質量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：賈萌萌)

Inhibition of Extract of Liujunzi Decoction on Ec9706 Cells Growth of Esophageal Carcinoma and Its Effects on Signaling Pathway of Signal Transducers and Activations of Transcripition 3

CUIShan-shan，GAOXiao-ling，WANGHui-hui，WUYao-song，YINSu-gai，CHENYu-long.

He′nanUniversityofChineseMedicine，Zhengzhou450046，China

CHENYu-long，He′nanUniversityofChineseMedicine，Zhengzhou450046，China；E-mail：cyl72621@126.com

ObjectiveTo observe the inhibition of extract of Liujunzi decoction on esophageal carcinoma cells Ec9706 growth and the effects on signaling pathway of signal transducers and activations of transcripition 3(STAT3).MethodsFrom 2013 to 2015，Liujunzi decoction was extracted by 70% ethanol，overnight extraction was made by normal butanol，ethyl acetate and water extraction.MTT method was applied to observe the influence of the extracts on the activity of Ec9706 cells.The optimal extracting parts，and enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)was used to observe the effects of ethyl acetate extract in Liujunzi decoction on the related cytokines〔including interleukin-6(IL-6)，transforming growth factor-β1(TGF-β1)，vascular endothelial growth factor(VEGF)〕 secreted by Ec9706 cells.Western-blotting method was adopted to test the effects of ethyl acetate extract in Liujunzi decoction on protein expression of esophageal carcinoma cells Ec9706 STAT3 and phosphorylation STAT3(p-STAT3).ResultsThere was significant difference in OD value of Ec9706 cells among the control group，70% ethanol parts，normal butanol parts，and water-extraction parts of Liujunzi decoction(F=448.90，P<0.01).The inhibition effects of Ec9706 cell growth in all medication groups were shown as follows：normal butanol parts of Liujunzi decoction>70% ethanol parts of Liujunzi decoction>water-extraction part of Liujunzi decoction.There was significant difference in OD value of Ec9706 cells in ethyl acetate parts of Liujunzi decoction(F=19.78，P<0.001).When the concentration was 250 μg/ml，the inhibition ratio of 70% ethanol parts，normal butanol parts，and water-extraction parts of Liujunzi decoction on Ec9706 were 7.31%，23.24%，and-25.07% respectively，while the concentration was 200 μg/ml，the inhibition rate of the ethyl acetate extract of Liujunzi decoction on Ec9706 cells was 77.03%，showing a inhibitory effect that was significantly better than the other parts，so the filtered effective part was ethyl acetate fraction of Liujunzi decoction.The inhibition rates IC35，IC50，IC70of ethyl acetate part of Liujunzi decoction calculated by probabilistic method represented low，medium and high concentrations respectively，and the corresponding concentration were 63.08，93.00 and 133.70 μg/ml.There was significant difference in the levels of IL-6，TGF-β1，and VEGF among the control group，low concentration and medium concentration of Liujunzi decoction groups(P<0.01)；the levels of IL-6，TGF-β1，and VEGF in low concentration and medium concentration of Liujunzi decoction groups were lower than those in control group(P<0.05).The expression levels of STAT3 and p-STAT3 in control group and low concentration and medium concentration of Liujunzi decoction groups were significantly different(P<0.05)；the expression levels of STAT3 and p-STAT3 in the low concentrations and medium concentration of Liujunzi decoction groups were lower than those in the control group(P<0.05).ConclusionAmong the extracts of different reagents in Liujunzi decoction，the ethyl acetate extraction has the best inhibitory effect on the proliferation of esophageal carcinoma cells，and the inhibition effect is probably related to the adjusting of STAT3 signaling pathway.

Esophageal neoplasms；Liujunzi decoction；Extracts；Ethyl acetate；STAT3

國家自然科學基金資助項目(81173177)；河南省教育廳自然科學基金資助項目(15B360003)

450046 河南省鄭州市，河南中醫(yī)藥大學

陳玉龍，450046 河南省鄭州市，河南中醫(yī)學藥大學；E-mail：cyl72621@126.com

R 735.1

ADOI：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.24.016

2016-01-03；

2016-06-12)