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    DcR3蛋白在鼻咽癌組織中表達(dá)的臨床意義及其與EB病毒關(guān)系的研究

    2016-08-11 14:20:13杜玉曉王彩紅王軍陳炳強(qiáng)劉翠
    中國實(shí)用醫(yī)藥 2016年20期

    杜玉曉+王彩紅+王軍+陳炳強(qiáng)+劉翠

    【摘要】 目的 研究誘捕受體3(DcR3)蛋白在鼻咽癌中表達(dá)的臨床意義, 并探討在鼻咽癌組織中DcR3與EB病毒(EBV)的關(guān)系。方法 采用免疫組化SABC法檢測(cè)40 例鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組織中DcR3蛋白的表達(dá)情況, 同時(shí)應(yīng)用癌旁正常組織和40例鼻咽正常組織做對(duì)照。并用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)40例鼻咽癌組織中EBV的陽性率, 探討兩者之間的關(guān)系。結(jié)果 鼻咽癌組織中DcR3蛋白的陽性表達(dá)明顯高于癌旁正常組織及正常鼻咽組織(P<0.05), 癌旁正常組織與正常鼻咽組織中DcR3的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);DcR3的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分級(jí)有關(guān)(P<0.05), 與患者年齡和性別無關(guān)(P>0.05);鼻咽癌組織中EBV的陽性率為72.50%, DcR3在EBV陽性的鼻咽癌組織中呈高表達(dá), 在鼻咽癌陰性的組織中呈低表達(dá), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 DcR3蛋白在鼻咽癌組織的高表達(dá), 可作為判斷鼻咽癌分化、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo), 其與EBV共同作用促進(jìn)了鼻咽癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后。

    【關(guān)鍵詞】 鼻咽腫瘤;誘捕受體3;EB病毒

    DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.20.028

    DcR3是腫瘤壞死因子受體(TNFR)超家族的新成員。EBV是一雙鏈DNA病毒, 屬于皰疹病毒科。在鼻咽癌中DcR3的表達(dá)及與EBV的關(guān)系國內(nèi)外鮮見報(bào)道, 本文作者采用免疫組化SABC法對(duì)鼻咽癌中的DcR3蛋白進(jìn)行檢測(cè), 并用RT-PCR的方法檢測(cè)EBV的陽性率, 探討DcR3在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展中的作用, 及其與EBV的關(guān)系, 現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1. 1 材料 40例鼻咽癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織取自2010年1月~2015年12月在平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科住院活檢的鼻咽癌患者, 40例鼻咽正常組織來源于行鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)的非腫瘤患者。術(shù)前均未接受放、化療, 診斷均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。

    1. 2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備 ABI 7300 Real Time PCR system, Benchmark XT 全自動(dòng)免疫組化染色儀。

    1. 3 方法

    1. 3. 1 免疫組織化學(xué)SABC法主要試劑:一抗, 鼠抗人免疫球蛋白(Ig)G 型 DcR3蛋白單克隆抗體(美國eBioscience公司)。即用型廣譜SABC組化試劑盒及顯色試劑盒均購自武漢博士德公司;具體操作按照試劑盒上的操作完整。DcR3陽性表達(dá)為胞漿著棕黃色。無著色或著色<25%為陰性(-), 著色范圍25%~50%為陽性(+), 著色范圍>50%為強(qiáng)陽性(++)。所有切片由病理科醫(yī)生協(xié)助閱片判讀。

    1. 3. 2 RT-PCR方法:總DNA抽提試劑盒購于凱杰公司, 熒光定量PCR試劑盒購于中山達(dá)安公司。具體操作按照試劑盒上操作完成。所有檢測(cè)結(jié)果均由具備衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心PCR上崗證的工作人員協(xié)助判讀。

    1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)法。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2. 1 DcR3在鼻咽癌組織、癌旁正常組織和正常鼻咽黏膜組織中的表達(dá) 鼻咽癌組織中DcR3蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織和正常鼻咽組織(P<0.05)。見表1。DcR3在各鼻咽組織中的表達(dá)見圖1, 圖2, 圖3。

    2. 2 DcR3在鼻咽癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

    DcR3的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分級(jí)有關(guān)(P<0.05), 與患者年齡和性別無關(guān)(P>0.05)。見表2。

    2. 3 DcR3表達(dá)與EBV的關(guān)系 鼻咽癌組織中EBV的陽性率為72.50%, DcR3在EBV陽性鼻咽癌組織呈高表達(dá), 在鼻咽癌陰性組織呈低表達(dá), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

    3 討論

    DcR3是一種新發(fā)現(xiàn)的TNFR超家族成員, 屬于分泌性的非膜聯(lián)接的蛋白分子, 廣泛存在于腫瘤組織中, 能抑制細(xì)胞凋亡, 并參與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。文獻(xiàn)報(bào)道[1], DcR3蛋白及基因在人類的許多惡性腫瘤如肝癌、胃腸道腫瘤、胰腺癌、乳腺癌等呈高度表達(dá)狀態(tài), 提示DcR3具有高度的腫瘤特異性。Weissinger 等[2]研究發(fā)現(xiàn)在腎細(xì)胞癌中DcR3與integrinα4、MMP7、uPA均陽性表達(dá), 與腎細(xì)胞癌的臨床病理參數(shù)密切相關(guān), 導(dǎo)致了腎細(xì)胞癌的局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后, 證實(shí)DcR3是通過PI3K/AKT途徑導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本次研究顯示DcR3在鼻咽癌組織中呈高表達(dá), 在其臨近組織中無表達(dá)或偶爾低表達(dá)。DcR3與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及病理分化程度等臨床病理參數(shù)密切相關(guān), 與年齡和性別無關(guān)。

    在一些病毒相關(guān)性腫瘤中, DcR3過度表達(dá)尤為顯著。自1996年Old等首先在鼻咽癌患者血清中檢測(cè)到EBV以來, 逐漸證實(shí)EBV在鼻咽癌的發(fā)病因素中的重要作用, 其拷貝數(shù)與其TNM分期密切相關(guān)。本次研究顯示在鼻咽癌組織中EBV的陽性率為72.50%, 在EBV陽性組織中DcR3的表達(dá)明顯高于EBV陰性組織, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 說明DcR3與EBV共同作用促進(jìn)了鼻咽癌局部浸潤(rùn)。這與Ho等[3]關(guān)于鼻咽癌中DcR3及EBV的研究結(jié)果相一致。其可能機(jī)制為EBV轉(zhuǎn)錄激活RTA, 通過結(jié)合到其啟動(dòng)子上調(diào)DcR3的表達(dá)。也可能是EBV膜蛋白1 (LMP1) 通過NF-кB及PI3K途徑上調(diào)DcR3導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生[2]。

    綜上所述, DcR3在鼻咽癌組織中高表達(dá), 其與EBV共同促進(jìn)了鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。DcR3在許多惡性腫瘤組織及血清中呈陽性表達(dá), 而其單克隆抗體的制備也在研究中, 本研究為鼻咽癌預(yù)防、生物治療提供了理論依據(jù)。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Zhou J, Song S, Li D, et al. Decoy receptor 3 (DcR3) overexpression predicts the prognosis and pN2 in pancreatic head carcinoma. World J Surg Oncol, 2014, 12(1):1-7.

    [2] Weissinger D, Tagscherer KE, Macher-Gppinger S, et al. The soluble Decoy Receptor 3 is regulated by a PI3K-dependent mechanism and promotes migration and invasion in renal cell carcinoma. Molecular Cancer, 2013, 12(1):3365-3370.

    [3] Ho CH, Chen CL, Li WY, et al. Decoy receptor 3, upregulated by Epstein-Barr virus latent membrane protein 1, enhances naso?pharyngeal carcinoma cell migration and invasion. Carcinogenesis, 2009, 30(8):1443-1451.

    [收稿日期:2016-04-20]

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