子癇前期患者血漿中Ghrelin 與VEGF、sFlt-1的相關性

王曉琴　　費　何　　陳亞萍　　張麗文

復旦大學附屬上海市第五人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，上?！?00240

子癇前期患者血漿中Ghrelin 與VEGF、sFlt-1的相關性

王曉琴費何▲陳亞萍張麗文

復旦大學附屬上海市第五人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海200240

目的研究子癇前期患者血漿中Ghre1in水平與血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和可溶性Fms樣酪氨酸激酶-1 （sF1t-1）表達的相關性。方法 選取2013年12月～2015年6月于復旦大學附屬上海市第五人民醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的子癇前期患者36例、正常妊娠婦女36例為研究對象，分別設為子癇前期組和對照組。采用酶聯(lián)兔疫吸附試驗檢測兩組婦女血漿Ghre1in、VEGF、sF1t-1濃度，并分析其相關性。結(jié)果 與對照組比較，子癇前期組患者血漿中sF1t-1水平明顯升高（P＜0.05），而VEGF水平明顯降低（P＜0.05）。與對照組比較，子癇前期組患者血漿中Ghre1in水平明顯升高（P＜0.05），Ghre1in與VEGF呈正相關（r=0.837，P＜0.05），與sF1t-1呈負相關（r=-0.797，P＜0.05）。結(jié)論 子癇前期患者血漿中Ghre1in水平與VEGF、sF1t-1具有相關性，提示Ghre1in可能通過影響內(nèi)皮細胞功能參與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展。

子癇前期；Ghrelin；血管內(nèi)皮生長因子；可溶性Fms樣酪氨酸激酶-1

［Abstract］Objective To investigate the association of Ghre1in with vascu1ar endothe1ia1 growth factor（VEGF）and serum so1ub1e Fms-1ike tyrosine kinase-1（sF1t-1）in patients with preec1ampsia.Methods 36 cases of preec1ampsia and 36 cases of normotensive pregnancy who given birth in the Department of Obstetrics of the Fifth Peop1e's Hospita1 of Shanghai，F(xiàn)udan University from December 2013 to June 2015 were se1ected，and they were divided into preec1ampsia group and the contro1 group.Leve1s of Ghre1in，VEGF and sFIt-1 proteins in p1asma of two groups were detected by enzyme 1inked immunosorbent assay，the re1ationships between them were ana1yzed.Results Leve1s of sF1t-1 in preec1ampsia group were significant1y higher（P＜0.05），whereas the 1eve1s of VEGF in preec1ampsia group were significant1y 1ower than those in contro1 group（P＜0.05）.Compared with the contro1 group，1eve1s of Ghre1in in preec1ampsia group was significant1y higher（P＜0.05）.There was obvious1y positive corre1ation between 1eve1s of Ghre1in and VEGF in preec1ampsia group（r=0.837，P＜0.05），and negative corre1ation between 1eve1s of Ghre1in and sFIt-1（r=-0.797，P＜0.05）.Conclusion Ghre1in is c1ose1y corre1ated with 1eve1s of VEGF and sF1t-1 in preec1ampsia serum.Ghre1in may participate in the occurrence and deve1opment of preec1ampsia by inf1uencing the endothe1ia1 ce11 function.

［Key words］Preec1ampsia；Ghre1in；VEGF；sF1t-1

子癇前期是妊娠期特有的疾病，典型臨床表現(xiàn)為妊娠20周后出現(xiàn)高血壓、蛋白尿、水腫等，甚至出現(xiàn)全身多臟器功能衰竭，常常危害母嬰生命健康。子癇前期的發(fā)病原因至今尚無定論，其中內(nèi)皮損傷學說是研究熱點之一［1］。近年大量研究表明，血管內(nèi)皮生長因子（vascu1ar endothe1ia1 growth factor，VEGF）作為重要血管生長因子之一，在胎盤形成過程中參與胎盤血管網(wǎng)形成，與可溶性Fms樣酪氨酸激酶-1（serum so1ub1e Fms-1ike tyrosine kinase-1，sF1t-1）、胎盤生長因子（p1acenta grouth factor，PIGF）共同作用，可能是子癇前期的發(fā)生、發(fā)展的重要因素［2］。

Ghre1in是由28個氨基酸殘基組成的多肽，是生長激素釋放激素受體的內(nèi)源性配體?？娠@著抑制內(nèi)皮素誘導的血管內(nèi)皮損傷及血管收縮效應，與高血壓、冠心病等心血管疾病有關［3］。在胎盤組織、微血管內(nèi)皮細胞中均發(fā)現(xiàn)有Ghre1in的表達［4］，張玲等［5］發(fā)現(xiàn)Ghre-1in與妊娠期高血壓疾病存在相關性。結(jié)合Ghre1in的生理作用及子癇前期的內(nèi)皮細胞損傷學病因機制，猜想Ghre1in可能通過影響內(nèi)皮細胞功能參與子癇前期的發(fā)病。故本研究分別檢測了正常妊娠婦女與子癇前期患者血漿Ghre1in、VEGF、sF1t-1的濃度，并分析其Ghre1in水平與VEGF、sF1t-1的相關性。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年12月～2015年6月復旦大學附屬上海市第五人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）產(chǎn)科住院分娩的子癇前期患者36例，作為子癇前期組，子癇前期的診斷標準參照第8版《婦產(chǎn)科學》：孕20周出現(xiàn)收縮壓≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和/或舒張壓≥90 mmHg，伴尿蛋白≥0.3 g/24 h或隨機尿蛋白（+）。另隨機選取我院同期體檢的血壓正常的產(chǎn)婦36例作為對照組。所有研究對象均為單胎產(chǎn)婦。排除標準：有原發(fā)性高血壓、心臟病、糖尿病、慢性腎病、內(nèi)分泌疾病、肝炎等病史者；有其他妊娠合并癥及并發(fā)癥者；4周內(nèi)有急、慢性感染等疾病者。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準，參與研究者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2標本采集

清晨7：00～7：30抽取兩組孕婦空腹肘靜脈血5 mL，注入枸櫞酸鈉抗凝玻璃試管中，室溫靜置30 min，用常溫離心機3000 r/min離心10 min，用無菌吸管將上層血漿轉(zhuǎn)移至高壓滅菌的1.5 mL EP管中，置于-80℃冰箱中保存，以備用于同批測定血漿中Ghre1in、VEGF、sF1t-1水平。

1.3實驗方法

采用酶聯(lián)兔疫吸附試驗（ELISA）檢測患者血漿Ghre1in、VEGF、sF1t-1濃度。ELISA試劑盒由上?？捣€(wěn)生物科技有限公司提供，具體操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用X2檢驗；采用直線相關系數(shù)分析各變量間的相關性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1兩組孕婦一般情況比較

兩組間的年齡、孕齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05），具有可比性。見表1。

表1　兩組孕婦一般資料比較（±s）

表1　兩組孕婦一般資料比較（±s）

組別　　例數(shù)　年齡（歲）　　孕齡（周）子癇前期組對照組36 36 29.55±5.62 28.81±3.71 37.12±2.25 38.31±1.84

2.2兩組孕婦血漿Ghrelin、VEGF、sFlt-1濃度比較

子癇前期組血漿中Ghre1in水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；子癇前期組血漿中VEGF水平明顯低于對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；子癇前期組血漿中sF1t-1水平明顯高于對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表2。

表2　兩組血漿Ghrelin、VEGF、sFlt-1濃度比較

2.3Ghrelin與VEGF、sFlt-1的相關性分析

子癇前期患者血漿中Ghre1in水平與VEGF呈正相關（r=0.837，P＜0.05），子癇前期患者血漿中Ghre1in水平與sF1t-1呈負相關（r=-0.797，P＜0.05）。見圖1～2。

圖1　子癇前期組患者血漿Ghrelin與VEGF的相關性分析

圖2　子癇前期組患者血漿Ghrelin與sFlt-1的相關性分析

3　討論

子癇前期是一種妊娠期特有的多系統(tǒng)疾病，發(fā)病機制主要有以下學說：子宮螺旋小動脈重鑄不足、炎癥兔疫過度激活、血管內(nèi)皮細胞受損、遺傳因素、營養(yǎng)缺乏、胰島素抵抗等，但至今病因未明，目前公認子癇前期是母體、胎兒、胎盤等多因素作用的結(jié)果。全身小動脈痙攣是子癇前期的基本病理、生理變化，大量研究提出了子癇前期發(fā)病可能為懷孕早期，即胎盤形成期間，某種因素導致子宮螺旋小動脈重鑄不足，胎盤缺血、缺氧，導致胎盤釋放多種胎盤因子進入母體血循環(huán)，促進血管內(nèi)皮損傷［6］。其中血管內(nèi)皮細胞受損貫穿了子癇前期發(fā)生、發(fā)展的整個過程，可以解釋子癇前期的多種臨床改變。

VEGF是一種特異的血管內(nèi)皮細胞有絲分裂原，VEGF的表達異常參與了機體多種疾病的發(fā)病過程［7］，如腫瘤、心血管疾病、眼科疾病等。sF1t-1是胎盤來源的血管生長因子，由VEGF受體-1胞外域剪接而成，能影響血管壁的完整性和通透性，導致血管生成障礙［8］。在妊娠期間，VEGF及其受體在母體、胎兒、胎盤中均有表達，在血管形成、胎盤形成、胎盤植入，及維持內(nèi)皮細胞功能方面起到了關鍵的作用［9-10］。大量研究發(fā)現(xiàn)子癇前期患者外周血中，sF1t-1水平顯著增高而VEGF水平下降，且均發(fā)生于子癇前期癥狀出現(xiàn)前5周［11］。目前sF1t-1/PIGF已作為早期預測子癇前期的潛在生物標志物［12］。本研究檢測發(fā)現(xiàn)子癇前期組患者靜脈血清中sF1t-1水平較正常孕婦顯著升高，VEGF水平較正常孕婦顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義，這與以往的研究［11］結(jié)論一致。VEGF作為重要血管生長因子之一，在妊娠期能夠促進胎盤血管網(wǎng)形成及滋養(yǎng)細胞生長［13］，sF1t-1通過阻斷VEGF的生物學活性，導致胎盤血管形成障礙［14］，兩者相互作用，影響子癇前期的發(fā)生、發(fā)展。

Ghre1in除了具有強大的促生長激素釋放的作用，還具有多種生物學功能，如能量平衡、調(diào)節(jié)代謝、細胞增殖和凋亡等［15］，Ghre1in及其功能性受體在下丘腦、垂體、卵巢（睪丸）、胎盤等機體多臟器上廣泛發(fā)布，可能通過內(nèi)分泌和/或旁分泌的方式參與下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)控。在未孕及蛻膜化的子宮內(nèi)膜上有Ghre1in和GHS-R基因表達，Ghre1in可明顯促進小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞的蛻膜化［16］。Tanaka等［17］研究發(fā)現(xiàn)，Ghre1in強烈表達于產(chǎn)前3個月的胎盤特別是絨毛膜滋養(yǎng)層細胞上，可能也參與人的子宮內(nèi)膜的蛻膜化，提示Ghre1in可能參與胚胎植入和胎盤的發(fā)育。Makino等［18］研究發(fā)現(xiàn)在妊娠婦女中，Ghre1in水平與血壓呈負相關；而正常非妊娠婦女Ghre1in與其血壓之間卻無相關性，這提示Ghre1in可能參與妊娠過程中機體血壓的調(diào)節(jié)。本研究發(fā)現(xiàn)子癇前期患者血漿中Ghre1in水平明顯高于正常孕婦，與張玲等［5］的研究結(jié)論一致，可能是機體的一種代償性表現(xiàn)，這種代償是對高血壓的代償，進而導致了VEGF的顯著下降，或者是VEGF的顯著下降導致了Ghre1in代償性升高，還有待進一步探索，但研究結(jié)果提示Ghre1in可能參了子癇前期的發(fā)生、發(fā)展。

Ghre1in及受體在人的微血管內(nèi)皮細胞中存在表達，且通過一系列的機制保護血管內(nèi)皮細胞［19］。Ghre1in可促進組織中VEGF mRNA的表達，反義抑制Ghre1in可下調(diào)VEGF mRNA的表達［20］。本研究結(jié)果顯示，子癇前期患者血漿Ghre1in水平與VEGF呈正相關，與sF1t-1呈負相關，三者之間的相關性符合其生物學特性。這與在子癇前期組Ghre1in明顯升高，VEGF明顯降低并不矛盾，子癇前期組中Ghre1in明顯升高可能是機體的一種代償性表現(xiàn)。因此可以推測，Ghre1in、VEGF可能在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展過程中起保護因子的角色，而sF1t-1可能是“毒性因子”的角色。

筆者將在后續(xù)的研究中從細胞層面及子癇前期動物模型干預，從而進一步探討Ghre1in與VEGF、sF1t-1在子癇前期這一疾病中的相互作用關系，深入研究Ghre1in在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展中的作用機制。

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Correlation of serum Ghrelin with VEGF and sFlt-1 in patients with preeclampsia

WANG Xiaoqin FEI He▲CHEN Yapin ZHANG Liwen
Department of Obstetrics and Gyneco1ogy，the Fifth Peop1e's Hospita1 of Shanghai，F(xiàn)udan University，Shanghai 200240，China

R714.24

A

1673-7210（2016）04（c）-0117-04

上海市閔行區(qū)自然科學研究課題資助項目（2014MHZ014）。

王曉琴（1990.10-），女，復旦大學上海醫(yī)學院2014級婦產(chǎn)科專業(yè)在讀碩士研究生；研究方向：產(chǎn)科子癇前期。

費何（1982.8-），女，碩士；研究方向：子癇前期及稽留流產(chǎn)的發(fā)病機制。

2016-01-16本文編輯：任 念）