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    脾虛濕阻型單純性肥胖動(dòng)物模型建立及客觀性評(píng)價(jià) *

    2020-01-01 06:20:06陳浩劉志勇侯吉華李龍雪朱文婷舒坤張琦
    關(guān)鍵詞:阻型單純性造模

    ★ 陳浩 劉志勇 侯吉華 李龍雪 朱文婷 舒坤 張琦***

    (1.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 南昌 330006;2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌330004)

    隨著生活方式的改變,肥胖成為了世界上日益嚴(yán)重的問(wèn)題。WHO工作報(bào)告中指出2015年全球成人已有23億達(dá)到超重,7億人口達(dá)到了肥胖標(biāo)準(zhǔn)[1]。單純性肥胖癥是現(xiàn)代社會(huì)中最常見(jiàn)的營(yíng)養(yǎng)障礙性疾病,是指無(wú)明確的內(nèi)分泌、遺傳原因,因熱量攝入超過(guò)消耗而引起脂肪組織在體內(nèi)堆積過(guò)多,導(dǎo)致體重超常的病癥,并除外繼發(fā)性肥胖,約占肥胖95%。單純性肥胖從中醫(yī)癥型而言,分為脾虛濕阻型、陰虛內(nèi)熱型、肝瘀氣滯型等多種癥型,其中尤以脾虛濕阻型單純性肥胖為臨床常見(jiàn),肥胖者素體脾虛之人,脾失健運(yùn),水濕不布,反而聚濕生痰,痰濕留于機(jī)體產(chǎn)生肥胖[2-4]。中醫(yī)臨床治療脾虛濕阻型單純性肥胖手段多樣如中藥、針刺、穴位埋線(xiàn)等,并已取得一定效果[5-9]。因此建立脾虛濕阻型單純性肥胖動(dòng)物模型,盡快開(kāi)展其病變機(jī)制的研究并臨床助力已刻不容緩。

    關(guān)于脾虛動(dòng)物模型已有深入研究[10-13],但脾虛濕阻型單純性肥胖的動(dòng)物模型的建立學(xué)界尚未有涉足。因此本實(shí)驗(yàn)針對(duì)脾虛濕阻型單純性肥胖大鼠模型的建立展開(kāi)研究,為下一步自擬的固本化濕降脂方作用于脾虛濕阻型單純性肥胖動(dòng)物模型的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展及脾虛濕阻型單純性肥胖病變機(jī)制的研究提供基礎(chǔ)。

    1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD雄性大鼠70只(180-220g),均購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(湘)2016-0002,動(dòng)物飼養(yǎng)于江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技中心SPF級(jí)屏障系統(tǒng)內(nèi),動(dòng)物合格證:SYXK(贛)2017-0004,環(huán)境溫度為20℃~23℃、相對(duì)濕度45%~55%,自由飲水進(jìn)食。

    1.2 實(shí)驗(yàn)材料 數(shù)字式醫(yī)用遠(yuǎn)紅外熱成像儀(維恩偉業(yè),生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)為YZB/渝0066-2009),全自動(dòng)生化儀(貝克曼AU480),電子天平(AUY120島津分析天平)。甘油三酯測(cè)定試劑盒(長(zhǎng)春匯力,批號(hào)2019007),總膽固醇測(cè)定試劑盒(長(zhǎng)春匯力,批號(hào)2019004),高密度脂蛋白測(cè)定試劑盒(長(zhǎng)春匯力,批號(hào)2019006),低密度脂蛋白測(cè)定試劑盒(長(zhǎng)春匯力,批號(hào)2019008),谷丙轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定試劑盒(上??迫A生物工程股份有限公司,批號(hào)20190522),谷草轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定試劑盒(上??迫A生物工程股份有限公司,批號(hào)20190430),肌酐測(cè)定試劑盒(上??迫A生物工程股份有限公司,批號(hào)20190515)。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 動(dòng)物分組 將70只SD雄性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)檢疫一周,隨機(jī)分成2組,其中10只為正常組,60只為前期實(shí)驗(yàn)造模組,每籠飼養(yǎng)五只大鼠。

    2.2 大鼠造模及模型指標(biāo)篩選[14-18]造模采用79%湖北萬(wàn)千佳興基礎(chǔ)飼料(蛋白含量30%)基礎(chǔ)上添加10%高膽固醇的動(dòng)物油脂、10%膽固醇、1%膽鹽形成造模飼料。高脂飼料喂養(yǎng)模型組大鼠一周后,在高脂喂養(yǎng)的同時(shí),以冰糖水給大鼠灌胃,按每日2次每次2mL/只灌胃,持續(xù)時(shí)間為16d;同時(shí)每日一次游泳達(dá)到耐力極限后將大鼠放回籠內(nèi),游泳持續(xù)時(shí)間為21d。繼續(xù)用高脂飼料喂養(yǎng)大鼠至七周后,造模完成。

    依據(jù)臨床診斷及文獻(xiàn)[5-9,19]按如下指標(biāo)篩選造模指標(biāo),造模篩選指標(biāo)及癥狀評(píng)分:①行為:倦怠(無(wú)0分,有1分),扎堆(無(wú)0分,有1分),嗜臥(無(wú)0分,有1分),動(dòng)作緩慢(輕度緩慢1分,重度2分),動(dòng)作緩慢判斷指標(biāo)包括懸空拉尾抵抗力弱(2分);②精神狀態(tài):正常0分,萎靡(1分),常瞇眼(1分),反應(yīng)遲鈍(2分);③毛發(fā)、耳尾及肛門(mén)部:毛發(fā)耳尾肛門(mén)均正常0分,毛發(fā)稀疏(1分),枯黃無(wú)光澤(2分),耳尾血色淡(1分);④排便:正常0分,大便稀溏、便軟不成形(1分)或?yàn)a下如水樣(2分);⑤造模五周后,正常0分,大鼠進(jìn)食量少(1分),體重增長(zhǎng)緩慢或下降(2分);⑥體溫下降,數(shù)字式醫(yī)用遠(yuǎn)紅外熱成像儀觀察到動(dòng)物遠(yuǎn)紅外輻射的溫度變化(一般1分,明顯2分)。⑦舌體胖大質(zhì)淡苔白滑(質(zhì)正常淡紅無(wú)苔0分,淡紅有薄苔1分)。從前期實(shí)驗(yàn)造模組60只大鼠中挑選體重≥500g且癥狀評(píng)分≥10分的大鼠50只,將此50只大鼠編為后續(xù)實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M。

    3 結(jié)果

    3.1 體重檢測(cè)結(jié)果

    造模后,模型組與正常組大鼠體重比較,兩者存在顯著差異,說(shuō)明模型組大鼠開(kāi)始轉(zhuǎn)變?yōu)閱渭冃苑逝执笫蟆?/p>

    3.2 遠(yuǎn)紅外熱成像檢測(cè)結(jié)果 探測(cè)器的像元數(shù):320×240,測(cè)溫范圍:0℃~50℃,測(cè)溫精確度:±1℃,觀察到動(dòng)物遠(yuǎn)紅外輻射的溫度變化,隨時(shí)儲(chǔ)存圖像,測(cè)量區(qū)域溫,并進(jìn)行圖像分析。試驗(yàn)時(shí)室溫保持24℃~27℃,相對(duì)濕度40%~60%之間,室內(nèi)熱源均勻,背景墻溫度均勻一致。室內(nèi)無(wú)明顯空氣流動(dòng)及強(qiáng)紅外輻射源存在等,以確保所測(cè)數(shù)據(jù)精確。

    3.3 血脂四項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果

    表2 為模型組與正常組血脂各項(xiàng)差異比較

    造模后,模型組與正常組TG、TCH、HDL和LDL比較均有顯著差異,說(shuō)明模型組大鼠血脂異常。

    圖1,3 后期實(shí)驗(yàn)肥胖模型大鼠;圖2,4 正常大鼠,顏色不同顯示兩組大鼠腹部脂肪的堆積程度不同。

    3.4 肝腎功能檢測(cè)結(jié)果

    表3 為模型組與正常組肝腎功能差異比較

    造模后,模型組與正常組Cr、ALT、AST比較均無(wú)顯著差異,說(shuō)明造模過(guò)程中,未對(duì)模型組大鼠肝腎造成損害。

    3.5 胃腸動(dòng)力活性檢測(cè)結(jié)果

    表4 為模型組與正常組腸肽激素及胃動(dòng)素差異比較

    造模后,模型組與正常組VIP及MTL比較,有顯著差異,說(shuō)明造模后的模型組大鼠胃腸蠕動(dòng)能力較正常組大鼠有所下降,客觀說(shuō)明模型組大鼠脾的運(yùn)化功能較正常組大鼠有所減弱。

    3.6 舌像分析結(jié)果 造模結(jié)束后,采用佳能EOS 5D MARK IV單反相機(jī)對(duì)兩組大鼠的舌體進(jìn)行拍照。從圖5-6中觀察可知,舌苔明顯存在差異。

    圖5 為模型組大鼠 圖6 為正常組大鼠

    由遠(yuǎn)紅外熱成像圖顯示所示,圖1,3為實(shí)驗(yàn)肥胖模型大鼠,圖2,4為正常大鼠。按照成像的對(duì)比圖,可見(jiàn),正常組大鼠腹部脂肪分布均勻,顏色呈現(xiàn)綠色至粉色,紅外溫度顯示較高。實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M大鼠腹部脂肪較多,顏色呈現(xiàn)藍(lán)色至深藍(lán)色,紅外溫度顯示較低,說(shuō)明腹部有脂肪堆積。由表1-2可知模型組體重及TG、TCH、HDL和LDL濃度都與正常組相比有顯著差異,TG、TCH等數(shù)值明顯增高,后期實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M體脂明顯增多,顯示出高脂飲食后,后期實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M正體現(xiàn)出單純性肥胖大鼠的病理特征。

    實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M肝腎功能與正常組沒(méi)有顯著差異,說(shuō)明造模過(guò)程中大鼠肝腎不存在臟器的損傷,可以交叉排除實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M大鼠是脾腎兩虛、肝郁氣滯等其他中醫(yī)證型的可能。同時(shí)實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M腸肽激素、胃動(dòng)素與正常組的明顯差異說(shuō)明模型組胃排空能力及舒張胃腸平滑肌下降,符合中醫(yī)脾虛濕阻中脾氣虛致脾氣升發(fā)無(wú)力、脾失健運(yùn)的客觀描述。從兩組大鼠舌像可知,圖5后期實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M大鼠舌像圖可見(jiàn)其舌體胖大,舌質(zhì)淡,苔白滑。圖6正常組大鼠舌像圖可見(jiàn)其舌苔薄白,舌質(zhì)淡紅的中醫(yī)表征。

    4 討論

    從60只大鼠中挑選體重≥500g,且癥狀評(píng)分≥10分的50只大鼠為后續(xù)實(shí)驗(yàn)造模組,結(jié)合大鼠體重、遠(yuǎn)紅外觀測(cè)、血脂四項(xiàng)與正常組比較可知為單純性肥胖大鼠。通過(guò)肝腎功能的檢測(cè)排除脾腎兩虛、肝郁氣滯等其他中醫(yī)證型的可能。同時(shí)腸肽激素及胃動(dòng)素及舌像分析多項(xiàng)驗(yàn)證可認(rèn)為實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M符合脾虛濕阻型單純性肥胖型大鼠模型。且60只大鼠中造模成功50只,造模成功率為83.3%,可認(rèn)為脾虛濕阻型單純性肥胖大鼠模型造模成功。

    脾虛濕阻型單純性肥胖大鼠模型的建立可為脾虛濕阻型單純性肥胖動(dòng)物模型的藥效學(xué)研究,及脾虛濕阻型單純性肥胖病變機(jī)制探討建立基礎(chǔ)。

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