生化部分常規(guī)項(xiàng)目干濕化學(xué)檢測(cè)結(jié)果一致性分析

于淼琛，李士軍，孫國(guó)華，姜鳳全，周　業(yè)

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116011)

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生化部分常規(guī)項(xiàng)目干濕化學(xué)檢測(cè)結(jié)果一致性分析

于淼琛，李士軍，孫國(guó)華，姜鳳全，周業(yè)

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116011)

[摘要]目的干濕化學(xué)分析儀對(duì)9項(xiàng)生化檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析和偏倚評(píng)估，了解兩檢測(cè)系統(tǒng)的一致性，以及能否共用濕化學(xué)分析法參考區(qū)間。方法依照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI) EP9-A2 文件，以日立7600全自動(dòng)生化分析儀為參比方法，美國(guó)強(qiáng)生VITROS 5600全自動(dòng)生化免疫分析儀為實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣、磷測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)、相關(guān)性分析和偏倚評(píng)估，并判斷偏倚是否可以接受。對(duì)臨床不可接受的項(xiàng)目依據(jù)兩方法的線性回歸方程進(jìn)行校正，并對(duì)校正后的結(jié)果再進(jìn)行相關(guān)性分析和臨床可接受性評(píng)價(jià)。最后對(duì)各自的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果兩種方法測(cè)定血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣、磷相關(guān)系數(shù)r2≥0.95，血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣醫(yī)學(xué)決定水平的系統(tǒng)誤差均小于允許偏差EA的1/2，磷醫(yī)學(xué)決定水平的系統(tǒng)誤差大于允許偏差EA的1/2，校正干化學(xué)儀參數(shù)后，磷相關(guān)系數(shù)r2≥0.95，磷醫(yī)學(xué)決定水平的系統(tǒng)誤差小于允許偏差EA的1/2。9項(xiàng)生化項(xiàng)目的參考區(qū)間驗(yàn)證均合格。結(jié)論兩檢測(cè)系統(tǒng)血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣有可比性，磷經(jīng)校正后相關(guān)性良好，有可比性，經(jīng)參考區(qū)間驗(yàn)證，可共用參比方法的參考區(qū)間。

[關(guān)鍵詞]干化學(xué)；濕化學(xué)；相關(guān)性分析

[引用本文]于淼琛，李士軍，孫國(guó)華，等.生化部分常規(guī)項(xiàng)目干濕化學(xué)檢測(cè)結(jié)果一致性分析[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016,38(2)：172-176.

近年來(lái)，由于干化學(xué)分析法在臨床生化檢驗(yàn)中試劑穩(wěn)定、保存時(shí)間長(zhǎng)、干擾因素少、無(wú)沖洗管路、24 h待機(jī)，隨時(shí)可用，并且參數(shù)非常穩(wěn)定[1]，無(wú)需經(jīng)常定標(biāo)，很多醫(yī)院應(yīng)用于急診檢驗(yàn)。濕化學(xué)分析法作為傳統(tǒng)的分析方法，可大批量檢測(cè)，一般用于平診檢測(cè)。由于方法學(xué)、儀器的原理等方面存在較大差異，而且兩種分析方法參考區(qū)間也不一致[2]，導(dǎo)致同一項(xiàng)目在不同系統(tǒng)上的測(cè)定結(jié)果沒有可比性。日立7600全自動(dòng)生化分析儀血糖(GLU)參考范圍為3.89～6.11 mmol/L；尿素氮(BUN)為2.86～7.86 mmol/L；肌酐(CRE)為53～97 μmol/L(男)，35～71 μmol/L(女)；尿酸(UA)為208～428 μmol/L(男)，155～357 μmol/L(女)；血鉀(K)為3.5～5.3 mmol/L；鈉(Na)為137～147 mmol/L；氯(Cl)為99～110 mmol/L；血清鈣(Ca)為2.02～2.6 mmol/L；血清磷(PHOS)為0.87～1.45 mmol/L。而強(qiáng)生VITROS 5600全自動(dòng)生化免疫分析儀血糖參考范圍為4.1～5.9 mmol/L；尿素氮為3.2～7.1 mmol/L；肌酐為58～110 μmol/L(男)，46～92 μmol/L(女)；尿酸為208～506 μmol/L(男)，149～369 μmol/L(女)；血鉀為3.5～5.1 mmol/L；鈉為137～145 mmol/L；氯為98～107 mmol/L；血清鈣為2.1～2.55 mmol/L；血清磷為0.81～1.45 mmol/L。這樣會(huì)造成同一患者在急診平診不同分析系統(tǒng)上檢測(cè)結(jié)果缺乏可比性，給臨床醫(yī)生對(duì)疾病的判斷帶來(lái)嚴(yán)重困擾，因此干、濕化學(xué)分析法檢測(cè)同一生化項(xiàng)目的檢驗(yàn)結(jié)果與參考區(qū)間的一致性非常的重要[3]。本文參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)EP9-A2文件的要求[4]，用干濕生化分析法對(duì)生化常規(guī)9個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析和偏倚評(píng)估，判斷它們?cè)谂R床的可接受性，探討每一個(gè)項(xiàng)目在兩臺(tái)儀器上能否共用同一個(gè)參考區(qū)間。

1資料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源

收集2015年3月到5月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診及住院患者共360例新鮮無(wú)溶血、無(wú)乳糜血清。濃度盡量覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平，不使用控制品或標(biāo)準(zhǔn)品[5]。對(duì)這些標(biāo)本進(jìn)行血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣、磷的檢測(cè)。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器

日立7600全自動(dòng)生化分析儀；美國(guó)強(qiáng)生VITROS 5600全自動(dòng)生化免疫分析儀(簡(jiǎn)稱VITROS 5600)。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑

日立7600全自動(dòng)生化分析儀血糖、肌酐使用日本和光試劑；尿素氮、尿酸使用日本世諾試劑；鉀、鈉、氯使用日立配套試劑；鈣使用英國(guó)朗道試劑；磷使用和光試劑。血糖、肌酐、尿酸、鈣、磷使用羅氏c.f.a.s校準(zhǔn)品；尿素氮使用日本世諾配套校準(zhǔn)品，鉀、鈉、氯使用日立校準(zhǔn)品；血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鈣、磷使用英國(guó)朗道LEVEL2， LEVEL3，鉀、鈉、氯使用日立質(zhì)控品。美國(guó)強(qiáng)生VITROS 5600全自動(dòng)生化免疫分析儀使用原裝配套血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣、磷干片試劑、強(qiáng)生配套校準(zhǔn)品、強(qiáng)生配套質(zhì)控品。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

每臺(tái)儀器實(shí)驗(yàn)前按儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程保養(yǎng)，每日兩次兩水平質(zhì)控均合格前提下嚴(yán)格按照廠商試劑盒的說明書進(jìn)行每個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)。樣本分5批，每批樣本分別用干濕化學(xué)分析法按1,2,3,4,5,6,7,8,8,7,6,5,4,3,2,1的順序測(cè)定，在2 h內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)。在進(jìn)行方法學(xué)間的比對(duì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，因日立7600全自動(dòng)生化分析儀量值溯源性好，在多年的衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)中成績(jī)優(yōu)秀，并且已通過15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，因此作為本實(shí)驗(yàn)的參比方法(X)，強(qiáng)生VITROS 5600作為本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法(Y)。

1.5數(shù)據(jù)處理

不使用具有明確人為誤差的檢測(cè)結(jié)果；按EP9-A2文件的要求對(duì)方法間離群值進(jìn)行檢查；用相關(guān)系數(shù)(r)對(duì)相關(guān)性作粗略評(píng)估，若r≥0.975或r2≥0.95，則認(rèn)為X范圍合適，兩方法的相關(guān)性好，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠。計(jì)算線性回歸方程：實(shí)驗(yàn)方法Y=aX+b。計(jì)算方法間的系統(tǒng)誤差：依據(jù)臨床的要求，把每個(gè)項(xiàng)目高中低相應(yīng)的醫(yī)學(xué)決定水平濃度Xc代入已知的線性回歸方程，進(jìn)而計(jì)算出實(shí)驗(yàn)方法(Y)與參比方法(X)之間的SE和相對(duì)偏差(SE%)，SE=[Yc-Xc]，SE%=SE/Xc×100%。根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī) CLIA′88[6]對(duì)室間評(píng)估的允許偏差(EA)，若兩儀器間比較評(píng)估的相對(duì)偏差(SE%)不大于1/2EA(即SE%≤1/2 CLIA′88)，則視為臨床上的可接受，即視為比對(duì)的兩臺(tái)儀器間對(duì)同一生化項(xiàng)目的測(cè)定結(jié)果具有可比性，臨床上是可以接受的。

1.6實(shí)驗(yàn)儀器的參數(shù)調(diào)整

測(cè)定結(jié)果不可接受的項(xiàng)目，根據(jù)回歸方程的斜率和截距修改實(shí)驗(yàn)儀器上不可接受項(xiàng)目的參數(shù)。對(duì)該項(xiàng)目按1.4、1.5方法再次比對(duì)。

1.7參考區(qū)間驗(yàn)證

制定詳細(xì)、明確的標(biāo)準(zhǔn)，將非健康者排除在參考樣品組之外。注意年齡段分布，不要集中于青年人，盡可能選擇與使用該項(xiàng)目的臨床病人分布組成相近。參考區(qū)間有性別區(qū)分的，還應(yīng)按性別分組。抽取健康個(gè)體20例進(jìn)行參考區(qū)間驗(yàn)證。

2結(jié)果

2.1兩儀器室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果

兩儀器室內(nèi)質(zhì)控變異系數(shù)見表1。兩臺(tái)生化分析儀器的性能良好，檢測(cè)結(jié)果可信。

表1　兩儀器室內(nèi)質(zhì)控變異系數(shù)

室內(nèi)質(zhì)控的CV值應(yīng)小于或等于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，兩臺(tái)儀器各個(gè)項(xiàng)目最近一次室間質(zhì)評(píng)均合格

2.2方法間離群點(diǎn)的判斷

參照EP9-A2文件進(jìn)行方法間離群點(diǎn)檢驗(yàn)，此次所驗(yàn)證的9項(xiàng)生化指標(biāo)中肌酐發(fā)現(xiàn)兩個(gè)離群點(diǎn)。

2.3兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性分析

以日立7600測(cè)定值的平均值為X，以VITROS 5600測(cè)定值平均值為Y，回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表2。9個(gè)項(xiàng)目r2≥0.95，認(rèn)為X范圍合適，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠，可用于評(píng)估兩種方法之間的偏移。

表2　兩種檢測(cè)系統(tǒng)9種項(xiàng)目回歸方程和相關(guān)系數(shù)

2.4兩種系統(tǒng)偏移評(píng)估和可接受性評(píng)價(jià)

兩種檢測(cè)系統(tǒng)間血糖、尿素氮、肌酐、尿素、鉀、鈉、氯、鈣的測(cè)定結(jié)果具有可比性。磷在多水平的預(yù)期中不具有可比性，臨床不可以接受。結(jié)果見表3。

2.5PHOS的臨床接受性能評(píng)價(jià)

根據(jù)2.3得出PHOS回歸方程為Y=1.0678X+0.1465，校正儀器后重新檢測(cè)兩種系統(tǒng)，得出PHOS回歸方程為Y=0.9707X+0.0009，r2=0.995。校正儀器后重新檢測(cè)兩種系統(tǒng)，PHOS的再次臨床可接受性評(píng)估見表4。

表3　兩種檢測(cè)系統(tǒng)9種項(xiàng)目的臨床可接受性評(píng)估

表4　兩種檢測(cè)系統(tǒng)PHOS的臨床可接受性評(píng)估

2.6參考區(qū)間驗(yàn)證

20例參考個(gè)體中不超過1例(或5%的結(jié)果)的觀察值在驗(yàn)證參考區(qū)間之外，參考區(qū)間的實(shí)驗(yàn)室報(bào)告的95%參考區(qū)間可以接受。血糖、尿素氮、鉀、鈉、氯、鈣、磷參考區(qū)間驗(yàn)證見表5。肌酐、尿酸參考區(qū)間驗(yàn)證見表6。

表5　糖、尿素氮、鉀、鈉、氯、鈣、磷參考區(qū)間驗(yàn)證

參考基準(zhǔn)GLU為3.89～6.11mmol/L；BUN為2.86～7.86 mmol/L； K為3.5～5.3 mmol/L；Na為137～147 mmol/L；Cl為99～110 mmol/L；Ca為2.02～2.6 mmol/L；PHOS為0.87～1.45 mmol/L。驗(yàn)證顯示GLU、BUN、K、Na、Ca均100%在參考范圍內(nèi)，Cl和PHOS為95%在參考范圍內(nèi)，結(jié)果判定均為合格

表6　肌酐、尿酸參考區(qū)間驗(yàn)證

參考基準(zhǔn)CRE為53～97 μmol/L(男)，35～71 μmol/L(女)；UA為208～428 μmol/L(男)，155～357 μmol/L(女)。驗(yàn)證顯示CRE和UA均100%在參考范圍內(nèi)，結(jié)果判定均為合格

3討論

全自動(dòng)生化分析儀為目前最有發(fā)展前景的生化分析儀，在國(guó)際上，部分發(fā)達(dá)國(guó)家都已普遍使用。隨著中國(guó)醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的進(jìn)步，當(dāng)前，同一醫(yī)院的同一檢測(cè)項(xiàng)目有多個(gè)不同的檢測(cè)系統(tǒng)，而每個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)有各自不同的檢測(cè)原理、方法，不同的校準(zhǔn)溯源、不一樣的試劑及質(zhì)控品，導(dǎo)致同一醫(yī)院、同一項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的參考范圍不同，檢測(cè)出的結(jié)果沒有可比性，給臨床疾病的診斷帶來(lái)一定的困難。因此，使不同檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)同一項(xiàng)目的檢測(cè)具有可比性非常重要[7-9]。

本研究中兩臺(tái)檢測(cè)儀器的檢測(cè)原理雖然不同，濕化學(xué)法是透射光度法，干化學(xué)法是反射光度法，但是兩儀器對(duì)同一生化項(xiàng)目的化學(xué)反應(yīng)原理都相同，例如電解質(zhì)都是離子選擇電極法，葡萄糖都是己糖激酶法，所以具有可比性。從表2可以看出，兩儀器比對(duì)的9個(gè)項(xiàng)目的相關(guān)系數(shù)r2≥0.95，說明兩方法相關(guān)性良好，表3中，糖、尿素氮、尿酸、肌酐、鉀、鈉、氯、鈣在臨床均可接受，具有可比性。但磷在醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差不可接受。完整的比對(duì)實(shí)驗(yàn)除了單純的系統(tǒng)比對(duì)，還要包括對(duì)不可接受項(xiàng)目參數(shù)的整改，一方面可以通過都測(cè)定新鮮血清來(lái)校正對(duì)應(yīng)儀器，另一方面可通過回歸方程中的斜率和截距作為校正因子來(lái)校正對(duì)應(yīng)儀器[10]，不同實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的情況來(lái)決定使用何種方法[11]。本實(shí)驗(yàn)采用初次比對(duì)中磷的回歸方程中的斜率和截距作為校正因子來(lái)校正VITROS 5600，最后達(dá)到了結(jié)果的一致性。調(diào)整參數(shù)后，重新對(duì)磷對(duì)比，在醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差均可接受[12-13]。本研究最后進(jìn)行的參考區(qū)間驗(yàn)證均合格，表明實(shí)驗(yàn)儀器共用的參考區(qū)間可以接受。但值得注意的是在測(cè)定肌酐時(shí)，出現(xiàn)了兩個(gè)離群點(diǎn)。通過對(duì)臨床回訪，發(fā)現(xiàn)這兩位患者均來(lái)自腎內(nèi)科，均服用了多貝斯進(jìn)行藥物治療，多貝斯對(duì)濕化學(xué)方法的負(fù)項(xiàng)干擾大，對(duì)干化學(xué)干擾小，因此對(duì)于腎內(nèi)科患者使用多貝斯時(shí)，建議對(duì)于肌酐的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以干化學(xué)方法為準(zhǔn)[14]。本次比對(duì)試驗(yàn)均采用生化血清標(biāo)本，但實(shí)際上檢驗(yàn)科急診室干化學(xué)采用的是血漿標(biāo)本，而關(guān)于標(biāo)本類型不同對(duì)干濕化學(xué)可比性的影響并未評(píng)估，有待進(jìn)一步研究。

干濕生化分析儀在統(tǒng)一參考區(qū)間后，解決了患者在平診急診檢測(cè)同一項(xiàng)目時(shí)檢測(cè)結(jié)果無(wú)可比性的障礙，給臨床提供方便，在疾病的診斷和治療方面意義重大。

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基金課題：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81473504)

Consistency analysis on results of some routine biochemical items by dry and wet chemical methods

YU Miao-chen, LI Shi-jun, SUN Guo-hua, JIANG Feng-quan, ZHOU Ye

(ClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116011,China)

[Abstract]Objective According to the analysis comparison and the bias estimation of nine biochemical item results by Wet and dry chemistry analyzer，we want to understand the consistency of the two detection systems and if they can share the same reference interval. Methods According to CLSI EP9-A2 document, Hitachi 7600 automatic biochemical analyzer (as the reference method) and Johnson & Johnson Vitros 5600 automatic biochemical analyzer (as the laboratory method) were used respectively to determine blood glucose, blood urea nitrogen, creatinine, uric acid, potassium, sodium, chloride, calcium, phosphorus and evaluate the bias within methodological linear limitation. The bias of the biochemical item exceeding medical decision standard were adjusted based on the linear equation of the results determined by the two methods and then used for correlation analysis and acceptable evaluation. Finally, the respective reference intervals were verified. Results The correlation coefficient of Blood glucose, blood urea nitrogen, creatinine, uric acid, potassium, sodium, chloride, calcium by wet and dry chemistry analyzer were fine (r2≥0.95) and the systematic error at the medical decision were clinically accepted (SE<1/2 CLIA′88). By correcting dry chemistry analyzer parameters, the correlation coefficient of phosphorus was fine (r2≥0.95) and the systematic error at the medical decision was clinically accepted (SE<1/2 CLIA′88). The verification of nine Biochemical items were all qualified. Conclusion The results of blood glucose, blood urea nitrogen, creatinine, uric acid, potassium, sodium, chloride, calcium and corrected phosphorus are all comparable; they can share the reference interval of the reference method.

[Key words]dry chemical method; wet chemical method; correlation analysis

作者簡(jiǎn)介：于淼琛(1982-)，女，遼寧大連人，主管技師。E-mail：ymc7788999@163.com 通信作者：姜鳳全，副主任技師。E-mail：jiangfengquan@126.com 解 龍(1987-)，男，安徽阜陽(yáng)人，碩士研究生。E-mail：doctorxielong@163.com

doi:論著10.11724/jdmu.2016.02.18 論著10.11724/jdmu.2016.02.19

[中圖分類號(hào)]R446.11

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

文章編號(hào)：1671-7295(2016)02-0172-05

(收稿日期：2015-09-14；修回日期：2016-03-16)

通信作者：鞏 鵬，教授。E-mail：gongpengdalian@163.com