• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    頭花蓼對H.pylori感染大鼠模式識別分子DC-SIGN、TLR4表達的影響*

    2016-06-30 05:27:14任艷君趙書琴江明禮孫朝琴
    關(guān)鍵詞:基因表達免疫螺桿菌

    任艷君, 莫 非*, 何 蕓, 趙書琴, 江明禮, 孫朝琴

    (貴州醫(yī)科大學(xué) 臨床檢驗教研室, 貴州 貴陽 550004)

    頭花蓼對H.pylori感染大鼠模式識別分子DC-SIGN、TLR4表達的影響*

    任艷君**, 莫非***, 何蕓, 趙書琴, 江明禮, 孫朝琴

    (貴州醫(yī)科大學(xué) 臨床檢驗教研室, 貴州 貴陽550004)

    [摘要]目的: 觀察頭花蓼對幽門螺桿菌(H. pylori)感染SD大鼠對免疫應(yīng)答模式識別受體DC-SIGN、TLR4蛋白和mRNA表達的影響,探討頭花蓼抗H.pylori可能的機制和調(diào)節(jié)作用。方法: SD大鼠分為空白組、模型組、藥物組及藥物空白組,模型組及藥物組用1×1011cfu/L H.pylori菌液進行灌胃,空白組和藥物空白組用腦心浸液肉湯灌胃,8周后,取大鼠胃黏膜顯微鏡觀察組織學(xué)改變,鑒定造模是否成功;造模成功后,藥物組和藥物空白組大鼠取頭花蓼灌胃處理,空白組和模型組給予生理鹽水灌胃;采用免疫組織化學(xué)法和實時熒光定量PCR法(real-time PCR)測定大鼠胃黏膜中DC-SIGN、TLR4蛋白和mRNA表達,觀察各組大鼠胃黏不同部位的表達情況。結(jié)果: 大鼠感染H.pylori后,胃黏膜腺體排列不規(guī)則,黏膜下層可見血管充血及大量淋巴細胞浸潤,表明造模成功;免疫組織化學(xué)和real-time PCR結(jié)果顯示 H.pylori上調(diào)了TLR4 、DC-SIGN的表達(P<0.05),經(jīng)頭花蓼處理后,表達明顯下調(diào)(P<0.05);TLR4、DC-SIGN主要在胃黏膜上皮細胞胞漿中表達,H.pylori感染大鼠后TLR4 、DC-SIGN表達強陽性。結(jié)論: H.pylori感染可上調(diào)大鼠胃黏膜上皮細胞DC-SIGN、TLR4的表達,頭花蓼處理后,其表達水平降低。

    [關(guān)鍵詞]螺桿菌,幽門; 基因表達; 免疫; Toll樣受體; C型凝集素受體; 頭花蓼

    幽門螺桿菌是一種螺旋形、多鞭毛、微需氧的革蘭陰性細菌,可以引發(fā)H.pylori相關(guān)性胃炎、消化性潰瘍及胃癌等[1-4]。以C型凝集素受體(CLR)及Toll樣受體(TLR)為代表的固有免疫分子,它們能識別相應(yīng)抗原進而通過不同的方式進行抗原呈遞,CLR 中的DC-SIGN(dendritic cell-specific inter-cellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin, CD209)屬Ⅱ型跨膜蛋白,具有模式識別受體功能,在針對病原微生物的免疫反應(yīng)中,可通過協(xié)同Toll樣受體參與免疫反應(yīng);TLR4作為TLR家族主要成員,是機體激活固有免疫和適應(yīng)性免疫對抗病原微生物的重要因素[5-6]。本研究通過檢測H.pylori感染SD大鼠及經(jīng)頭花蓼處理后大鼠胃黏膜中TLR4、DC-SIGN蛋白和mRNA表達變化,探討H.pylori引起的固有免疫平衡調(diào)節(jié)機制。

    1材料與方法

    1.1試劑及儀器

    苗藥頭花蓼浸膏,批號14196 ,由浙江眾益藥業(yè)有限公司提供。SPF級SD大鼠,6~8周齡,150~180 g,購買于第三軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心,批號SCXK(軍)2012-0011。H.pylori國際標(biāo)準(zhǔn)測序株SS2000,由中國疾病控制中心傳染病所張建中教授惠贈。哥倫比亞血瓊脂(購于OXOID公司)、萬古霉素、兩性霉素、 多粘菌素B、TMP(購于上海生工生物)、兔抗DC-SIGN抗體(Bioss公司)、TLR4單克隆抗體(abcam公司)、二抗試劑盒(中杉)、PBS緩沖、檸檬酸緩沖液(C6H8O7·H2)、DAB顯色劑、二甲苯、中性樹膠、無水乙醇、蘇木素、DAB顯色液、Omega RNA提取試劑盒、ROCHE LightCycler480 熒光定量PCR儀。

    1.2方法

    1.2.1H.pylori培養(yǎng)按照文獻[7],從-80 ℃冰箱中取出H.pyloriSS2000,待室溫溶解后,傾倒于哥倫比亞血瓊脂平皿內(nèi)涂抹均勻,三氣培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72 h(37 ℃、5% O2、10% CO2、85% N2,相對濕度>95%),觀察細菌生長情況,穩(wěn)定傳代3次后進行H.pylori鑒定(尿素酶、觸酶、氧化酶陽性)。

    1.2.2動物模型復(fù)制及頭花蓼處理將52只SD大鼠隨機分為造模組和對照組,造模組分為模型組(16只)和藥物組(10只),對照組分為空白組(16只)和藥物空白組(10只)。各種大鼠禁食不禁水12 h,用5 g/L的NaHCO3和消炎痛混合液按體質(zhì)量給雄鼠1.0 mL/只,雌鼠0.5 mL/只進行灌胃預(yù)處理1次;預(yù)處理后繼續(xù)禁食不禁水,6 h后模型組及藥物組給予1×1011cfu/LH.pylori標(biāo)準(zhǔn)菌株SS2000菌液1.5 mL灌胃,灌胃后需禁食禁水4 h,隔天1次,共5次;空白組及藥物空白組以等量的無菌腦心浸液肉湯灌胃。末次灌胃8周后,模型組、空白組隨機抽取6只大鼠,鑒定其造模是否成功,大鼠胃黏膜有H.pylori定植且胃黏膜出現(xiàn)慢性炎癥病理學(xué)改變判斷為造模成功[8-9]。造模成功后,藥物組及藥物空白組大鼠參考文獻[7]每天給予頭花蓼灌胃處理(1.58 g生藥/d),空白組和模型組給予等量無菌生理鹽水灌胃,1次/d,連續(xù)給藥2周。末次灌胃結(jié)束后,正常飼養(yǎng)4周,處死大鼠,取胃黏膜組織進行石包埋或-80 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.3DC-SIGN、TLR4蛋白表達采用免疫組織化學(xué) (S-P )法檢測,石蠟切片常規(guī)脫蠟,檸檬酸鹽緩沖液微波修復(fù),3% H2O2溶液孵育37 ℃孵育10 min,PBS液沖洗,分別滴加DC-SIGN(Bioss公司)、TLR4(abcam公司)一抗 ,4 ℃孵育過夜;次日取出至室溫,PBS 液沖洗,滴加二抗,室溫孵育30 min,PBS液沖洗,應(yīng)用DAB溶液(現(xiàn)配)顯色,PBS沖洗,蘇木素輕度復(fù)染20 s,自來水沖洗,脫水,透明,中性樹脂封片。DC-SIGN、TLR4蛋白的陽性表達為細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒,選取5個高倍鏡視野,Image pro- Plus 6.0軟件測量各組陽性產(chǎn)物的平均光密度值作為DC-SIGN、TLR4蛋白的陽性表達量。

    1.2.4DC-SIGN、TLR4 mRNA表達采用Real-Time PCR檢測,Omega試劑盒提取樣品的總RNA,將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,以β-actin作為內(nèi)參基因,采用Real-Time PCR檢測DC-SIGN、TLR4 mRNA表達水平。采用primer 5 設(shè)計DC-SIGN、TLR4 擴增引物(見表1)。反應(yīng)條件為: 95 ℃ 3 min,95 ℃ 7 s、 57 ℃ 10 s、75 ℃ 15 s, 40個循環(huán)。每組做3個生物重復(fù),采用2-ΔΔCT法對目標(biāo)基因的表達差異進行分析。

    表1 PCR擴增引物序列

    1.3統(tǒng)計學(xué)方法

    2結(jié)果

    2.1H.pylori及動物模型

    H.pylori經(jīng)培養(yǎng)后,在哥倫比亞血平板上呈半透明,針尖狀細小菌落。觸酶、尿素酶、氧化酶鑒定呈陽性反應(yīng),革蘭染色呈弧形、螺旋狀、S形的革蘭陰性桿菌(圖1A)。H.pylori感染SD大鼠8周后,取大鼠胃黏膜進行細菌微需氧培養(yǎng)結(jié)果顯示H.pylori定植密度約為105cfu/g;空白對照組大鼠胃黏膜完整,腺體排列規(guī)則,無異常黏膜肌層(圖1B),模型組H.pylori感染后的胃黏膜腺體排列不規(guī)則,胃黏膜下層可見血管內(nèi)充血及大量淋巴細胞浸潤(圖1C)。

    2.2DC-SIGN、TLR4蛋白表達

    在胃黏膜上皮細胞胞漿可見DC-SIGN、TLR4蛋白表達,免疫組織化學(xué)染色見棕黃或棕褐色顆粒。在空白組中,上皮細胞構(gòu)成規(guī)則的腺體,基本未見DC-SIGN、TLR4蛋白表達。模型組中,DC-SIGN及TLR4表達強陽性,胃腺松散,排列不規(guī)則,藥物組經(jīng)頭花蓼處理后,表達減弱,其平均光密度值比較,模型組高于空白組和藥物組(P<0.05),藥物空白組與空白組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見圖2。

    表2 各組大鼠DC-SIGN、TLR4蛋白表達平均光密度值

    (1)與空白組比較,P<0.05;(2)與模型組比較,P<0.05

    2.3DC-SIGN、TLR4 mRNA表達

    結(jié)果顯示,H.pylori刺激后,模型組的TLR4、DC-SIGN mRNA明顯高于空白組 (P<0.05),藥物組經(jīng)頭花蓼處理后,TLR4 、DC-SIGN mRNA的表達水平下降 (P<0.05),而藥物空白組與空白組TLR4 、DC-SIGN mRNA的表達水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見圖3。

    3討論

    H.pylori作為一種模式致病菌,其細胞壁主要成分為脂多糖,含有病原體相關(guān)模式分子,而胃上皮細胞表面具有的模式識別受體可調(diào)控前者識別H.pylori,行使抗原提呈細胞功能,募集的炎癥細胞相互作用和協(xié)調(diào),形成固有免疫局部防御乃至調(diào)節(jié)后續(xù)的適應(yīng)性免疫反應(yīng)[10-12]。林凱等[12]研究表明,在H.pylori感染下,胃黏膜上皮細胞表達樹突狀細胞表型DC-SIGN,系CLR的重要成員,在針對病原微生物的免疫反應(yīng)中,具有模式識別受體的功能,可通過協(xié)同Toll樣受體參與免疫反應(yīng),TLR4可在人類胃上皮細胞上表達,TLR4作為LPS的優(yōu)先受體,H.Pylori及其菌體成分LPS等刺激均可使TLR4的表達上調(diào),進而激活NF-κB,促進細胞因子的合成與釋放,引發(fā)炎癥免疫反應(yīng)。DC-SIGN、TLR4作為重要的識別模式受體,通過激活一系列的信號轉(zhuǎn)到途徑,調(diào)控著諸多細胞生物學(xué)行為,在H.pylori感染后的免疫反應(yīng)中,發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用,SD大鼠在受到H.pylori刺激時,模式識別受體發(fā)揮著關(guān)鍵的作用,識別模式受體TLR4、DC-SIGN通過識別病原菌相關(guān)分子脂多糖,引起炎性因子的分泌,誘導(dǎo)機體免疫應(yīng)答反應(yīng)清除外來抗原,構(gòu)成了機體免疫反應(yīng)的天然屏障。但是,H.pylori的持續(xù)作用,引起過度的炎癥反應(yīng),會對組織、器官造成嚴(yán)重的損害或?qū)е缕渌嚓P(guān)疾病,如重癥細菌感染導(dǎo)致TLR4通路持續(xù)活化,引起過度的炎癥反應(yīng),造成敗血癥、TLR4信號通路過度激活從而介導(dǎo)激素性股骨頭壞死的發(fā)生[13-14]。因此,免疫平衡的調(diào)節(jié)在免疫反應(yīng)中及其重要。林凱[12]研究認為H.pylori可刺激TLR4、DC-SIGN的表達,產(chǎn)生炎癥和免疫反應(yīng)。本次研究與Castano-Rodriguez和林凱結(jié)果一致,免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),感染H.pylori后,上皮細胞DC-SIGN、TLR4表達明顯上調(diào),頭花蓼可能通過轉(zhuǎn)錄和翻譯水平調(diào)節(jié)著免疫平衡。多數(shù)研究表明,中藥對LPS介導(dǎo)的TLR4信號通路的抗炎作用,是通過影響TLR4/NF-κB的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),調(diào)控釋放相關(guān)炎性因子來完成的。謝毅等[15]研究發(fā)現(xiàn)TLR4在肝組織的表達量在加味大柴胡湯的作用下有所減少。李卿姬等[16]研究發(fā)現(xiàn),人類臍靜脈內(nèi)皮細胞受LPS刺激后,TLR4表達升高,補陽還五湯治療后,TLR4明顯下降;本研究中在藥物頭花蓼作用后,DC-SIGN、TLR4的表達下調(diào),轉(zhuǎn)錄和翻譯水平下調(diào)一致,頭花蓼的主要成分之一為黃酮,黃酮能抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位,它的單體黃芪皂苷可以抑制LPS的核轉(zhuǎn)位,頭花蓼可能通過相同的作用抑制TLR4、DC-SIGN的表達,也推測頭花蓼可能形成穩(wěn)定的黏膜屏障,通過改變胃黏膜周圍的微環(huán)境,抑制了TLR、CLR的表達,進而減少TNF-α、IL-6等炎性因子的產(chǎn)生以及切斷了部分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[17]。在感染H.pylori引起的固有免疫中,TLR4、DC-SIGN一方面促進免疫細胞膜表面有關(guān)免疫分子的表達和促進免疫細胞的成熟,另一方面可促進細胞因子的合成和釋放,引發(fā)一系列的炎癥反應(yīng),頭花蓼可能通過調(diào)節(jié)TLR4和DC-SIGN的表達水平來平衡機體的反應(yīng),TLR與CLR的識別與LPS介導(dǎo)的信號通路以及基因多態(tài)性以及收到巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶等諸多因素影響,因此,頭花蓼在模式識別過程中具體如何調(diào)控,該機制有待深入研究。

    注:A為H.pylori培養(yǎng)(100×),B為空白組大鼠胃黏膜(HE,×400),C為模型組大鼠胃黏膜(HE,×400)圖1 H.pylori培養(yǎng)及各組大鼠胃黏膜Fig.1 H.pylori culture and rats' gastric mucosa

    注:A、B、C及D分別為空白組、模型組、藥物組及藥物空白組的DC-SIGN表達E、F、G及H分別為空白組、模型組、藥物組及藥物空白組的TLR4表達圖2 各組大鼠胃黏膜DC-SIGN及TLR4蛋白表達(SP,×40)Fig.2 Immunohistochemical staining of G cells gastric antrum(SP,×40)

    (1)與空白組比較, P<0.05;(2)與模型組比較P<0.05圖3 頭花蓼對H.pylori感染SD大鼠胃黏膜TLR4和DC-SIGN mRNA表達的影響Fig.3 Effect of Polygonum Capitatum on TLR4 mRNA and DC-SIGN mRNA expression of gastric mucosa of Hp infected rats

    4參考文獻

    [1] Heyl KA, Fischer AG,Bel UB,et al.Inhibition ofHelicobacterpyloriurease activity in vivo by the synthetic nickel binding protein Hpn[J].Eur J Microbiol Immunol, 2013(3): 77-80.

    [2] Pachathundikandi SK, Tegtmeyer N, Backert S. Signal transduction ofHelicobacterpyloriduring interaction with host cell protein receptors of epithelial and immune cells[J]. Gut Microbes, 2013(4): 454-474.

    [3] Diesing AK, Nossol C, Faber-Zuschratter H,et al. Rapid interaction ofHelicobacterpyloriwith microvilli of the polar human gastric epithelial cell line NCI-N87[J]. Anat Rec (Hoboken), 2013(296): 1800-1805.

    [4] Hongying F, Xianbo W, Fang Y, et al. Oral immunization with recombinant Lactobacil-lus acidophilus expressing the adhesin Hp0410 ofHelicobacterpyloriinduces mucosal and sys-temic immune responses[J]. Clin Vaccine Immunol, 2014(21): 126-132.

    [5] Soilleux EJ, Morris LS, Leslie G, et al. Constitutive and 1080 induced expression of DC-SIGN on dendritic cell and macrophage subpopulations in situ and in vitro[J]. Leukoc Biol, 2002 (3): 445-450.

    [6] Engering A, Van Vliet SJ, Hebeda K, et al. Dynamic populations of dendritic cell-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin-positive immature dendritic cells and liver lymph node-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin- positive endothelial cells in the outer zones of the paracortex of human lymph nodes[J]. Am J Pathol, 2004(5): 1587-1590.

    [7] 黃繼漢,黃曉輝.藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2004(9):1069-1072.

    [8] Alm RA,Trust TJ.Analysis of the genetic diversity of Helicobater pylori :the tale of two genomes[J],J Mol Med, 1999 (1):834-846.

    [9] Heyl KA, Fischer A, G?bel UB,et al. Inhibition ofHelicobacterpyloriurease activity in vivo by the synthetic nickel binding protein Hpn[J]. European Journal Microbiology and Immunology, 2013(1): 77-80.

    [10]Wessler S,Backert S.Molecular mechanisms of epithelial-barrier disruption byHelicobacterpylori[J].Trends Micro-biol, 2008(16):397-405.

    [11]Wroblewski LE,Shen L,Ogden S,et al.Helicobacterpyloridysregulation of gastric epithelial tight junctions by urease-mediated myosinⅡactivation[J].Gastroenterology, 2009(136):236-246.

    [12]林凱,曾敬清,劉偉,等.固有免疫分子DC-SIGN在幽門螺桿菌感染胃黏膜上皮細胞表達意義[J].現(xiàn)代免疫學(xué), 2011(1):101-103.

    [13]魏濱,王紅艷.巨噬細胞表面血管內(nèi)皮生長因子受體-3抑制TLR4-NF-kB信號通路,抵抗內(nèi)毒素休克[J].科學(xué)新聞, 2014(4):501-514.

    [14]田雷,周東生,孫水,等.Toll樣受體4信號通路過度激活在大鼠激素性股骨頭壞死中的作用[J].西安交通大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版, 2014(5):623-625.

    [15]謝毅,陳明,談燚,等.加味大柴胡湯對阻塞性黃疸大鼠TLR4 mRNA表達的影響[J].蘇州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版, 2009(1):88-90.

    [16]李卿姬,姜華,姜玉姬.補陽還五湯含藥血清對Toll樣受體4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及氧化低密度脂蛋白受體-1表達的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志, 2012(1):364-366.

    [17]陳浩,王軍,武海闊,等.中藥干預(yù)對TLR4表達影響的研究進展[J].陜西中醫(yī), 2014(1):382-384.

    (2016-03-28收稿,2016-05-27修回)

    中文編輯: 吳昌學(xué); 英文編輯: 劉華

    Effect ofPolygonumCapitatumon Pattern Recognition Molecules DC-SIGN, TLR4

    REN Yanjun, MO Fei, HE Yun, ZHAO Shuqin, JIANG Mingli, SUN Chaoqin

    (DepartmentofClinicalLaboratory,GuihzouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guihzou,China)

    [Abstract]Objective: To observe the effect of Polygonum capitatum on protein and mRNA expression of immune response pattern recognition receptor DC-SIGN, TLR4, and to investigate the possible mechanism and regulation role of Polygonum capitatum anti H.pylori. Methods: SD rats were divided into blank group, model group, drug group and drug blank group. Model group and drug group received intragastric administration of 1×1011cfu/L H.pylori bacteria solution while blank group and drug blank group received intragastric administration of brain heart infusion broth. 8 weeks later, the microscope was used to observe the histological changes of gastric mucosa of rats in order to identify whether the model was successful to. After modeling was successful, drug group and drug blank group were treated with Polygonum capitatum by intragastric administration while blank group and model group received physiological saline by intragastric administration. Immunohistochemistry and real-time PCR were adopted to detect the protein and mRNA expression of in gastric mucosa of rats. The expression of different parts of gastric mucosa of rats in each group was observed. Results: After rats were infected with H.pylori, the gastric mucosal glands showed irregular arrangement, with visible vascular congestion and a large number of lymphocytes infiltration in the submucosal layer, which proved that model was established successfully. The results of Immunohistochemistry and real-time PCR showed that H.pylori up-regulated TLR4, DC-SIGN expression level (P<0.05). After the treatment of Polygonum capitatum, TLR4 and DC-SIGN expression level significantly down-regulated (P<0.05). TLR4, DC-SIGN were mainly expressed in cytoplasm of gastric mucosal epithelial cells. After rats were infected with H.pylori, TLR4, DC-SIGN showed strongly positive expression. Conclusion: H.pylori infection can up-regulate DC-SIGN and TLR4 expression level in gastric mucosa epithelial cells, but after treatment of Polygonum capitatum their expression levels significantly decrease.

    [Key words]Helicobacter pylori; gene expression; immune; Toll like receptor; type C lectin receptor; Polygonum capitatum

    *[基金項目]高等學(xué)校特色專業(yè)建設(shè)點[No(2010)15]; 貴州省科技計劃課題[黔科合J字(20142027)號]; 貴州省科技合作計劃基金[黔科合LH(2015)7417號]; 貴州省衛(wèi)生計生委科學(xué)技術(shù)基金[gzwjkj2015-1-003]; 貴陽市科技計劃項目 [筑科合同(20141001)號]

    [中圖分類號]R961.1

    [文獻標(biāo)識碼]A

    [文章編號]1000-2707(2016)06-0640-05

    DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.005

    **貴州醫(yī)科大學(xué)2013級臨床檢驗診斷學(xué)碩士研究生

    ***通信作者 E-mail:354406804@qq.com

    網(wǎng)絡(luò)出版時間:2016-06-16網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1647.022.html

    猜你喜歡
    基因表達免疫螺桿菌
    幽門螺桿菌陽性必須根除治療嗎
    抗菌肽對細菌作用機制的研究
    基因芯片在胃癌及腫瘤球細胞差異表達基因篩選中的應(yīng)用
    藏藥對免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用的研究
    早期腸內(nèi)營養(yǎng)對急性重型顱腦外傷患者免疫及炎癥指標(biāo)的影響
    運動與機體免疫能力關(guān)系研究綜述
    人間(2016年24期)2016-11-23 19:12:24
    美洲大蠊提取液對大鼠難愈合創(chuàng)面VEGF表達影響的研究
    口腔與胃內(nèi)幽門螺桿菌感染的相關(guān)性
    二甲基砷酸毒理學(xué)的研究進展
    愛尚生活(2016年9期)2016-10-21 10:52:39
    人成视频在线观看免费观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| tube8黄色片| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产一区二区三区综合在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品国产av在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看 | 国产成人一区二区在线| 97精品久久久久久久久久精品| 精品一区在线观看国产| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲人成电影观看| 久久性视频一级片| 久久免费观看电影| 又紧又爽又黄一区二区| 国产精品欧美亚洲77777| 七月丁香在线播放| 1024视频免费在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 又大又爽又粗| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品乱久久久久久| 精品少妇内射三级| 黄色视频不卡| 性色av一级| 色视频在线一区二区三区| 麻豆乱淫一区二区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 一区二区三区激情视频| 国产一级毛片在线| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 男人操女人黄网站| 婷婷色综合www| 99热网站在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 午夜两性在线视频| 老司机影院毛片| 亚洲精品一二三| 久久精品久久久久久久性| 一区在线观看完整版| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 在线观看www视频免费| 91麻豆av在线| 最黄视频免费看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲人成77777在线视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久精品人人爽人人爽视色| 免费在线观看影片大全网站 | 欧美日韩福利视频一区二区| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久久久久精品精品| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲熟女毛片儿| 美女视频免费永久观看网站| 最近手机中文字幕大全| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲精品久久午夜乱码| 美女主播在线视频| 丝袜人妻中文字幕| 老鸭窝网址在线观看| 国产精品.久久久| 人妻人人澡人人爽人人| 久久精品成人免费网站| 男女床上黄色一级片免费看| 99热全是精品| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 丝袜在线中文字幕| 首页视频小说图片口味搜索 | 国产野战对白在线观看| 国产视频一区二区在线看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产视频一区二区在线看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 极品人妻少妇av视频| 久久av网站| 国产精品一二三区在线看| 夫妻午夜视频| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美精品一区二区免费开放| 女人精品久久久久毛片| 日本色播在线视频| 亚洲男人天堂网一区| 成人影院久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 无遮挡黄片免费观看| 一本久久精品| 亚洲精品在线美女| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩大码丰满熟妇| av欧美777| 18禁观看日本| 亚洲成人免费电影在线观看 | 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 九草在线视频观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产高清国产精品国产三级| 99精品久久久久人妻精品| 久久久国产精品麻豆| 涩涩av久久男人的天堂| 性少妇av在线| 国产一区二区三区av在线| 婷婷色综合大香蕉| 一区二区三区精品91| 老鸭窝网址在线观看| 午夜福利免费观看在线| 深夜精品福利| 亚洲欧美清纯卡通| 高清av免费在线| 日本vs欧美在线观看视频| 视频在线观看一区二区三区| 国产精品.久久久| 一级黄色大片毛片| 韩国高清视频一区二区三区| 韩国精品一区二区三区| 青春草视频在线免费观看| 免费在线观看完整版高清| 亚洲精品一二三| 亚洲欧美色中文字幕在线| 无遮挡黄片免费观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 日韩视频在线欧美| 蜜桃在线观看..| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美激情高清一区二区三区| a级毛片在线看网站| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲男人天堂网一区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 人妻一区二区av| 亚洲人成77777在线视频| 久久久欧美国产精品| 国产成人一区二区在线| 大香蕉久久网| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产有黄有色有爽视频| 欧美日韩av久久| 青草久久国产| 日本a在线网址| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 老汉色∧v一级毛片| 真人做人爱边吃奶动态| www.熟女人妻精品国产| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美精品一区二区大全| 99re6热这里在线精品视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 成人黄色视频免费在线看| 欧美xxⅹ黑人| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲中文字幕日韩| 久久99热这里只频精品6学生| 久久性视频一级片| 免费观看av网站的网址| 精品福利永久在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲一区二区三区欧美精品| 叶爱在线成人免费视频播放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| av不卡在线播放| 男人舔女人的私密视频| 国产欧美亚洲国产| 美女大奶头黄色视频| 日本色播在线视频| 男人操女人黄网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 悠悠久久av| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 久久久久久免费高清国产稀缺| 狂野欧美激情性bbbbbb| svipshipincom国产片| 国产成人av教育| 国产免费福利视频在线观看| 永久免费av网站大全| 欧美日韩福利视频一区二区| 一级毛片 在线播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 色精品久久人妻99蜜桃| 日本欧美视频一区| 美国免费a级毛片| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲成人国产一区在线观看 | 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品国产国语对白av| 亚洲精品一区蜜桃| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 午夜久久久在线观看| 婷婷丁香在线五月| 一区二区三区精品91| 国产精品 国内视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲国产精品999| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 黄频高清免费视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 日本五十路高清| 免费观看av网站的网址| 丁香六月欧美| 午夜免费观看性视频| 人人妻人人澡人人看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 男人爽女人下面视频在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产精品熟女久久久久浪| 精品视频人人做人人爽| 免费观看a级毛片全部| 观看av在线不卡| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久精品国产亚洲av涩爱| 免费观看av网站的网址| 久久精品国产亚洲av高清一级| 欧美精品一区二区免费开放| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品一区二区免费欧美 | 极品少妇高潮喷水抽搐| 宅男免费午夜| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美另类一区| 亚洲熟女毛片儿| 捣出白浆h1v1| 99热国产这里只有精品6| 咕卡用的链子| 亚洲欧美色中文字幕在线| 母亲3免费完整高清在线观看| 多毛熟女@视频| 激情视频va一区二区三区| 九草在线视频观看| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲欧美清纯卡通| h视频一区二区三区| 超色免费av| 色播在线永久视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲色图综合在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 精品一区二区三区四区五区乱码 | 熟女av电影| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲,一卡二卡三卡| www.自偷自拍.com| 亚洲精品一二三| 老鸭窝网址在线观看| 精品人妻1区二区| av不卡在线播放| 久久久久网色| 亚洲熟女毛片儿| 啦啦啦啦在线视频资源| 日日摸夜夜添夜夜爱| 美女主播在线视频| 日本wwww免费看| xxx大片免费视频| 9191精品国产免费久久| av在线老鸭窝| 最新的欧美精品一区二区| 十分钟在线观看高清视频www| 中文字幕最新亚洲高清| 国产高清国产精品国产三级| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品乱久久久久久| av网站在线播放免费| 搡老乐熟女国产| 欧美性长视频在线观看| 亚洲第一av免费看| 欧美精品一区二区免费开放| 搡老乐熟女国产| 老司机靠b影院| 90打野战视频偷拍视频| 69精品国产乱码久久久| 亚洲成人免费电影在线观看 | 久久久国产精品麻豆| 国产麻豆69| 亚洲国产欧美网| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产一区二区 视频在线| 十八禁高潮呻吟视频| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产野战对白在线观看| 国产免费现黄频在线看| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲国产日韩一区二区| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲国产看品久久| 午夜福利乱码中文字幕| 欧美+亚洲+日韩+国产| 精品国产国语对白av| 精品一区二区三卡| 国产一区二区三区av在线| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品一区二区精品视频观看| 考比视频在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| cao死你这个sao货| 欧美日韩福利视频一区二区| 女人精品久久久久毛片| 国产男女内射视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 老司机影院成人| 国产精品欧美亚洲77777| 日本av免费视频播放| 欧美国产精品一级二级三级| 欧美国产精品一级二级三级| 国产有黄有色有爽视频| 性色av乱码一区二区三区2| 久久鲁丝午夜福利片| 免费高清在线观看日韩| 电影成人av| 久久99精品国语久久久| 七月丁香在线播放| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久热爱精品视频在线9| 欧美大码av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 麻豆乱淫一区二区| 午夜福利免费观看在线| 欧美另类一区| av天堂在线播放| 久久国产精品大桥未久av| 丝袜美腿诱惑在线| 免费少妇av软件| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美黑人欧美精品刺激| 99精国产麻豆久久婷婷| 宅男免费午夜| 视频区欧美日本亚洲| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲国产av影院在线观看| 下体分泌物呈黄色| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 久久热在线av| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲国产最新在线播放| 国产黄色视频一区二区在线观看| 午夜两性在线视频| 国产免费又黄又爽又色| 免费观看av网站的网址| 欧美精品一区二区免费开放| 婷婷丁香在线五月| 久久精品国产综合久久久| 国产精品国产av在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 99热全是精品| 99国产综合亚洲精品| 一级毛片电影观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 大香蕉久久成人网| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产一卡二卡三卡精品| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久久精品区二区三区| 久久99一区二区三区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产91精品成人一区二区三区 | av又黄又爽大尺度在线免费看| 在线观看免费午夜福利视频| 嫁个100分男人电影在线观看 | www日本在线高清视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品 欧美亚洲| 欧美+亚洲+日韩+国产| 男女边摸边吃奶| 美女福利国产在线| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产一区二区在线观看av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 看免费成人av毛片| av一本久久久久| 精品人妻1区二区| 亚洲人成电影观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 老汉色∧v一级毛片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美日韩综合久久久久久| 成年女人毛片免费观看观看9 | 黄片小视频在线播放| 国产黄频视频在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲精品第二区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 69精品国产乱码久久久| 午夜91福利影院| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 午夜老司机福利片| 丰满少妇做爰视频| 午夜福利视频在线观看免费| 久久精品成人免费网站| 成人三级做爰电影| 亚洲精品第二区| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲av成人精品一二三区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产成人av激情在线播放| 国产精品久久久av美女十八| 免费不卡黄色视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 最黄视频免费看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 青草久久国产| 免费看av在线观看网站| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲一码二码三码区别大吗| av不卡在线播放| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成人影院久久| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 啦啦啦中文免费视频观看日本| 女性被躁到高潮视频| 在线观看人妻少妇| 免费观看人在逋| 国产在线免费精品| 两性夫妻黄色片| 色视频在线一区二区三区| 国产视频一区二区在线看| 搡老岳熟女国产| 99国产综合亚洲精品| 亚洲美女黄色视频免费看| 免费在线观看日本一区| 少妇粗大呻吟视频| 中国美女看黄片| www日本在线高清视频| 成在线人永久免费视频| 伦理电影免费视频| 1024视频免费在线观看| 91麻豆av在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | xxxhd国产人妻xxx| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美精品一区二区免费开放| 美女国产高潮福利片在线看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久免费观看电影| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 午夜91福利影院| 男人舔女人的私密视频| 国产高清不卡午夜福利| 成人国产av品久久久| 亚洲精品久久午夜乱码| av天堂在线播放| 亚洲一码二码三码区别大吗| 色综合欧美亚洲国产小说| 最近手机中文字幕大全| 亚洲专区中文字幕在线| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产欧美亚洲国产| 日本一区二区免费在线视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 高清av免费在线| 天堂俺去俺来也www色官网| www.999成人在线观看| 日本午夜av视频| 男男h啪啪无遮挡| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲人成网站在线观看播放| 日本vs欧美在线观看视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产又爽黄色视频| av网站免费在线观看视频| 久久ye,这里只有精品| 晚上一个人看的免费电影| www.av在线官网国产| 亚洲国产av新网站| 2021少妇久久久久久久久久久| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| av网站在线播放免费| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美黑人精品巨大| 99香蕉大伊视频| 又黄又粗又硬又大视频| 日本欧美视频一区| 成年av动漫网址| 久久狼人影院| 免费看十八禁软件| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久久久久久国产电影| 人妻 亚洲 视频| 1024视频免费在线观看| 久久ye,这里只有精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 美女高潮到喷水免费观看| 成人国产av品久久久| 免费日韩欧美在线观看| 人妻 亚洲 视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲av欧美aⅴ国产| 制服诱惑二区| 天堂俺去俺来也www色官网| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲欧美清纯卡通| 久久精品人人爽人人爽视色| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 美女高潮到喷水免费观看| 国精品久久久久久国模美| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 91老司机精品| 深夜精品福利| av国产精品久久久久影院| 国产一区二区激情短视频 | 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 十八禁网站网址无遮挡| 色综合欧美亚洲国产小说| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久9热在线精品视频| 国产精品免费视频内射| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产片特级美女逼逼视频| 男女边摸边吃奶| 在线观看www视频免费| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲国产精品国产精品| 成人国产av品久久久| 大片电影免费在线观看免费| 久久久精品免费免费高清| 两个人看的免费小视频| 岛国毛片在线播放| 人妻人人澡人人爽人人| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 一级黄片播放器| 男人操女人黄网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产精品人妻久久久影院| 久热这里只有精品99| 久久久久久久久免费视频了| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一本综合久久免费| 交换朋友夫妻互换小说| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 韩国精品一区二区三区| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 校园人妻丝袜中文字幕| 免费高清在线观看日韩| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 午夜精品国产一区二区电影| 日本vs欧美在线观看视频| 精品一区二区三卡| 久久影院123| 亚洲中文av在线| 中文字幕精品免费在线观看视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲精品在线美女| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 最新的欧美精品一区二区| 久久久久久人人人人人| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 天堂8中文在线网| 性高湖久久久久久久久免费观看| 我要看黄色一级片免费的| 久久精品成人免费网站| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 十分钟在线观看高清视频www| 久久亚洲精品不卡| 免费在线观看日本一区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日本欧美国产在线视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 热re99久久精品国产66热6| 国产国语露脸激情在线看| 男女午夜视频在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 好男人视频免费观看在线| 男女免费视频国产| 亚洲精品第二区| 操出白浆在线播放| 嫩草影视91久久| 桃花免费在线播放| 在线观看一区二区三区激情|