臍血血紅蛋白電泳在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血診斷中的臨床應(yīng)用

廖淑珍，丁凱宏，侯春江

(廣西壯族自治區(qū)百色市人民醫(yī)院檢驗科　533000)

·臨床研究·

臍血血紅蛋白電泳在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血診斷中的臨床應(yīng)用

廖淑珍，丁凱宏，侯春江

(廣西壯族自治區(qū)百色市人民醫(yī)院檢驗科533000)

摘要:目的本文就臍血血紅蛋白電泳在新生兒珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)診斷中的臨床應(yīng)用進(jìn)行討論和說明。方法選取百色市人民醫(yī)院2013年4月1日至2015年5月1日的1 148例臍血標(biāo)本進(jìn)行詳細(xì)討論和分析。對1 148例臍血標(biāo)本分別采用臍血血紅蛋白電泳和紅細(xì)胞滲透脆性試驗(簡稱一管法)的篩查方式。對進(jìn)行產(chǎn)前檢查的1 148例臍血標(biāo)本進(jìn)行臍血血紅蛋白電泳檢測，并觀察檢查后1 148例臍血標(biāo)本地貧類型分布及一管法的篩查溶血率。結(jié)果經(jīng)過一管法篩查后發(fā)現(xiàn)，其溶血率大于60%，1 148例臍血標(biāo)本中有402例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s,其中α-地貧的靜止型共29例，標(biāo)準(zhǔn)型108例，血紅蛋白H病共12例，Hb Bart′s水腫共5例。結(jié)論對于α-新生兒地貧的診斷使用臍血血紅蛋白電泳進(jìn)行檢測，能夠有效地進(jìn)行判斷，而且操作方便，但是對于β-新生兒地貧的診斷還需要進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞:：臍血蛋白電泳；α-新生兒珠蛋白生成障礙性貧血；β-新生兒珠蛋白生成障礙性貧血；診斷

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)屬于一種較為常見的新生兒疾病，是由于q常染色體隱性遺傳造成。經(jīng)過相關(guān)調(diào)查統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，我國地貧多發(fā)區(qū)域為廣西，有20%的人群為地貧攜帶者，而江西、四川、臺灣及香港等地區(qū)的地貧攜帶者分別占2.7%、4.1%、5.5%及8.4%[1-3]。在我國南寧、百色等壯族人民出現(xiàn)地貧的新生兒最多，廣西出現(xiàn)地貧的遺傳疾病概率最大[4]。若不能對地貧的新生兒進(jìn)行檢查，就容易出現(xiàn)不能合理飲食、盲目進(jìn)補等情況[5]。一般情況下，對于地貧的新生兒使用血紅蛋白電泳及紅細(xì)胞滲透脆性試驗(簡稱一管法)的檢查方式，但是其檢查效果并不顯著。因此，對于地貧新生兒提出了采用由臍血蛋白電泳的檢查方式，其檢查效果顯著。本研究探討臍血蛋白電泳在新生兒地貧診斷中的臨床應(yīng)用效果，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取本院2013年4月1日至2015年5月1日的1 148例臍血標(biāo)本作為研究對象，并對其資料進(jìn)行討論和分析。首先對本院同期1 148例產(chǎn)前婦女資料進(jìn)行統(tǒng)計和分析。1 148例產(chǎn)前婦女年齡17～39歲，平均(27.7±2.4)歲。對1 148例產(chǎn)前婦女含乙二胺四乙酸抗凝血標(biāo)本進(jìn)行一管法篩查檢測，HbA(88.22±9.42)%，HbF(1.24±0.53)%，HbA2(0.79±0.23)%，RBC脆性試驗(58.24±18.93)%。

1.2方法

1.2.1制作臍血標(biāo)本在新生兒出生時將臍帶剪短，并在胎盤端保存2～3 mL的臍帶血，注入含EDTA-K2抗凝劑的試管中，未及時檢測標(biāo)本應(yīng)于2～8 ℃冰箱保存。

1.2.2檢驗儀器1 148例臍血標(biāo)本進(jìn)行新生兒地貧檢驗的儀器2014年5月以前使用美國Helena SPIFE 3000全自動電泳儀(瓊脂糖凝膠法)，2014年5月起使用高分辨率電泳儀，法國Sebia公司生產(chǎn)的 Capillarys 2 FLEX PIERCING全自動毛細(xì)管電泳儀及其配套血紅蛋白電泳試劑盒CAPILLARYS HEMOGLOBIN(E)。

1.2.3電泳方法使用瓊脂糖凝膠法檢測時，在儀器電泳之前需要進(jìn)行血紅蛋白液的制備，取紅細(xì)胞約250 μL，用生理鹽水洗滌后以3 000 r/min離心5 min，棄去上清液，重復(fù)此操作3次；吸干上清液后加入每管380 μL蒸餾水溶血約5 min；每管加入250 μL四氯化碳，置振蕩器上振蕩5～6 min，以3 000 r/min離心5 min，取上層血紅蛋白液備用。吸取血紅蛋白應(yīng)用液13.5 μL在點樣板，將標(biāo)本板、瓊脂糖凝膠片等放置好，進(jìn)行電泳測試，儀器自動染色、脫色和干燥處理，最后進(jìn)行掃描定量分析。使用Capillarys 2 FLEX PIERCING全自動毛細(xì)管電泳儀，無需制備血紅蛋白液，只需將合格的抗凝血標(biāo)本正確放入試管架，再將試管架從儀器入口導(dǎo)入，儀器自動進(jìn)行血紅蛋白電泳分析，約30 min后全部檢測程序完成，樣品結(jié)果即顯示在工作目錄下。新生兒地貧進(jìn)行一管法篩查檢驗時，使用米基醫(yī)療器械有限公司提供的試劑盒，并嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行測定。

1.3觀察指標(biāo)觀察經(jīng)過監(jiān)測后的1 148例臍血標(biāo)本的地貧類型分布，靜止型、標(biāo)準(zhǔn)型、血紅蛋白H病及Hb Bart′s水腫例數(shù)。同時觀察一管法的篩查溶血率。

1.4檢驗標(biāo)準(zhǔn)β-地貧輕型：HbA2或HbF輕度升高，大多在4%～8%；中間型：HbF可達(dá)10%，HbA2正常或升高；重型：因β鏈生成完全或幾乎完全受到抑制，以致含有β鏈的HbA 合成減少或消失，HbF 30%～90%，HbA多低于40%或甚至為0%[5-6]。α-地貧靜止型(-α/αα)：患者無癥狀，紅細(xì)胞形態(tài)正常，出生時臍帶血中Hb Bart′s水平為1.0%～2.0%，但3個月后即消失。輕型(標(biāo)準(zhǔn)型)(-/αα)：患者無癥狀，紅細(xì)胞形態(tài)有輕度改變，如大小不等、中央淺染、異形等；紅細(xì)胞滲透脆性降低；變性珠蛋白小體陽性；HbA2和HbF水平正?；蛏缘蚚7-8]。新生兒期Hb Bart′s可達(dá)5%～15%，于生后6個月時完全消失。經(jīng)煌焦油藍(lán)溫育后，少數(shù)紅細(xì)胞內(nèi)有H包涵體。血紅蛋白電泳無異常發(fā)現(xiàn)。血紅蛋白H?。篐bH在pH8.6或8.8電泳時，向陽極方向移動，電泳速度快于HbA;有溶血性貧血的特征，骨髓中紅細(xì)胞系統(tǒng)增生極度活躍[9]。HbH明顯增高(2.5%～40.0%)，HBA2及 HbF水平正常。Hb電泳可出現(xiàn) Hb H區(qū)帶。紅細(xì)胞滲透脆性試驗降低，紅細(xì)胞包涵體陽性；血紅蛋白Bart胎兒水腫綜合征(γ4)：Hb Bart′s占80%～100%，可有少量HbH。HbA、A2及F均缺失。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS18.0軟件分析，計數(shù)資料以率表示，組間比較以χ2檢驗；計數(shù)資料采用百分比表示,數(shù)據(jù)對比采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.11 148例臍血標(biāo)本的地貧類型分布見表1。在1 148例臍血標(biāo)本中共有154例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s，在檢出Hb Bart′s的154例臍血標(biāo)本中有29例為靜止型，占總數(shù)的18.83%，其發(fā)生率經(jīng)計算為2.526%；有108例為標(biāo)準(zhǔn)型，占總數(shù)的70.13%，其發(fā)生率經(jīng)計算為9.407%；有12例為血紅蛋白H病，占總數(shù)的7.79%，其發(fā)生率經(jīng)計算為1.045%；有5例為Hb Bart′s水腫，占總數(shù)的3.25%，其發(fā)生率經(jīng)計算為0.435%。

表1　　1 148例臍血標(biāo)本的地貧類型及分布

2.2檢出Hb Bart′s帶的154例臍血標(biāo)本父母進(jìn)行檢驗及一管法的篩查溶血率一管法的篩查溶血率大于60%。對有β-地貧臍帶攜帶的父母進(jìn)行電泳檢驗，發(fā)現(xiàn)沒有異常血紅蛋白帶、HbF、HbA水平與沒有地貧的標(biāo)本HbF、HbA水平對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

地貧屬于一種嚴(yán)重危害人們身體健康的疾病，分為異常血紅蛋白病和地貧兩種。對于使用臍血蛋白電泳在新生兒地貧血的診斷中具有重要作用。Hb Bart′s被國際認(rèn)為是一種特殊的血紅蛋白，其被廣泛應(yīng)用于新生兒地貧中，在新生兒出生后，靜止型Hb Bart′s很快就會消失。全自動毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的原理是在溶血試劑中進(jìn)行過稀釋的紅細(xì)胞樣品，會被注射到毛細(xì)管的正極端，在高壓電的作用下進(jìn)行電泳分離，然后血紅蛋白會被靠近負(fù)極端的415 nm光波檢測裝置檢測到，然后對檢測結(jié)果進(jìn)行記錄和分析[10-12]。對于新生兒地貧的診斷可以使用臍血蛋白電泳、一管法及紅細(xì)胞指數(shù)的檢測方法，但是從上述研究內(nèi)容中可知，對于新生兒地貧的診斷使用一管法并不合適，而紅細(xì)胞指數(shù)的檢測方法在醫(yī)學(xué)研究中沒有明確定論，因此最適合進(jìn)行新生兒地貧的診斷方法就是臍血蛋白電泳的檢測方式[13]。在電泳診斷中，其對于Hb Bart′s水腫胎和α-地貧基因的診斷率極高。貧血是由于血紅蛋白異常造成的，因此在實施電泳檢測時就會出現(xiàn)血紅蛋白異常的現(xiàn)象。雖然臍血蛋白電泳的檢測方式對于新生兒地貧的診斷準(zhǔn)確、診斷方式簡便，但是在進(jìn)行新生兒地貧的診斷過程中只對α-新生兒地貧診斷準(zhǔn)確，但在檢驗過程中有時易出現(xiàn)假陰性和假陽性的情況，并且對于β-新生兒地貧的診斷還尚待研究[14-15]。

從以往研究結(jié)果中可知，對于血紅清蛋白采用電泳的檢查方式其中有967例患者被確診為α-地貧基因，準(zhǔn)確率為89.9%；有404例患者被確診為β-地貧基因，準(zhǔn)確率為82.9%。由此可見，對于新生兒地貧的診斷采用毛細(xì)管血蛋白電泳的診斷方式較為有效。另有研究顯示，對于α-地貧缺失型采用電泳的診斷方式準(zhǔn)確率高、簡單、重復(fù)性好。

由本研究結(jié)果可見，一管法篩查的溶血率大于60%。對有β-地貧臍帶攜帶的父母進(jìn)行電泳檢驗發(fā)現(xiàn)沒有異常血紅蛋白帶、HbF、HbA的量與沒有地貧的標(biāo)本HbF、HbA的量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。但是，使用臍血蛋白電泳的檢測方式對于新生兒地貧的診斷準(zhǔn)確性非常高。在1 148例臍血標(biāo)本中共有154例臍血標(biāo)本檢出Hb Bart′s，總發(fā)生率為13.410%，在檢出Hb Bart′s的154例臍血標(biāo)本中有29例患者為靜止型，占總數(shù)的18.83%,其發(fā)生率為2.526%；有108例患者為標(biāo)準(zhǔn)型，占總數(shù)的70.13%,其發(fā)生率為9.407%；有12例患者為血紅蛋白H病，占總數(shù)的7.79%,其發(fā)生率為1.045%；有5例患者為Hb Bart′s水腫，占總數(shù)的3.25%,其發(fā)生率為0.435%。

綜上所述，對于新生兒地貧的診斷可以使用臍血蛋白電泳方式，其簡便、精確，值得在臨床診斷中大力推廣和應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]陳碧艷.基因缺失型α-地中海貧血分子診斷研究進(jìn)展[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2013,21(6):14-16．

[2]劉貴建,孫士鵬.地中海貧血的實驗診斷:項目和方法的選擇及臨床應(yīng)用評價[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2012,35(5):385-387．

[3]趙麗,肖建平,許倩.孕婦外周血胎兒基因檢測在無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,22(14):1522-1523．

[4]陳紅英,鄒艷,劉春艷,等.四川瀘州地區(qū)貧血患兒地中海貧血篩查和基因診斷結(jié)果分析[J].中國兒童保健雜志,2013,21(11):1139-1141．

[5]華亮,李婉玲,朱冰,等.5 042例地中海貧血高風(fēng)險兒童β-地中海貧血基因方分析[J].中國小兒血液與腫瘤雜志,2011,16(3):125-128．

[6]唐娟,張學(xué)林,蔣群芳,等.廣西桂林地區(qū)β-地中海貧血基因突變類型的探討[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2013,21(12):45．

[7]李翔,尹愛華,江靜波,等.臍帶血紅細(xì)胞MCV 和MCH 篩查新生兒地中海貧血的可行性研究[J].生命科學(xué)研究,2014,18(3):241-245．

[8]翁曉鄧,郭浩,徐欣,等.MCH與MCV在新生兒臍帶血α-地中海貧血輔助篩查價值的比較[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2010,18(12):95．

[9]陳大宇,蔡稔,鄭敏,等.全自動毛細(xì)管電泳技術(shù)在柳州市新生兒地中海貧血篩查的應(yīng)用及價值[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2014,22(1):70-71．

[10]甘冰,毛錦江.新生兒臍血血紅蛋白電泳HbA在篩查β地中海貧血中的意義[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2014,22(1):75-76．

[11]毛錦江,黃偉媚,甘冰,等.臍血蛋白電泳在α-地中海貧血基因診斷的價值[J].中國婦幼健康研究,2011,22(4):484-487.

[12]闞婷,李旺,李東明,等.孕早期胎兒地中海貧血基因型與血液學(xué)表型和產(chǎn)前診斷適應(yīng)證的遺傳研究[J].實用婦產(chǎn)科雜志,2014,30(6):435-439.

[13]甘冰,黃偉媚.αβ復(fù)合型地中海貧血基因檢測分析[J].臨床薈萃,2014,29(2):200-201.

[14]楊金玲,蔡稔,韋小妮,等.胎兒巴特(氏)血紅蛋白定量分析在產(chǎn)前診斷α-地中海貧血中的價值[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(12):1227-1228．

[15]李東明，何升，玉晉武，等.血紅蛋白定量分析在α-珠蛋白生成障礙性貧血產(chǎn)前診斷中的價值[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(13):1668-1669.

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.044

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)11-1551-02

(收稿日期：2016-01-23修回日期：2016-03-20)