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    Urovysion FISH檢測(cè)尿液泌尿道腫瘤相關(guān)基因的異常及在老年科體檢中的應(yīng)用

    2016-06-27 05:45:20謝國(guó)化王根發(fā)

    李 莉,徐 苓,謝國(guó)化,王根發(fā),張 良

    (上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科;2.老年醫(yī)學(xué)科;3.泌尿外科 200092)

    ·論著·

    Urovysion FISH檢測(cè)尿液泌尿道腫瘤相關(guān)基因的異常及在老年科體檢中的應(yīng)用

    李莉1,徐苓1,謝國(guó)化1,王根發(fā)2,張良3△

    (上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科;2.老年醫(yī)學(xué)科;3.泌尿外科200092)

    摘要:目的了解基于Urovysion熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測(cè)尿液脫落細(xì)胞中泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤相關(guān)性染色體異常在老年科體檢中的應(yīng)用價(jià)值。方法收集1 350例老年科患者的晨尿,采用Urovysion FISH檢測(cè)尿液細(xì)胞中第3、7、17號(hào)染色體的非整數(shù)倍,以及第9號(hào)染色體長(zhǎng)臂21區(qū)域的缺失。結(jié)果1 350例患者中共檢測(cè)出3號(hào)染色體異常55例(4.07%),7號(hào)染色體異常68例(5.04%),17號(hào)染色體異常41例(3.04%),9號(hào)染色體異常36例(2.67%)。經(jīng)病理證實(shí)為膀胱癌22例(1.63%),其他泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤16例(1.19%)。結(jié)論Urovysion FISH對(duì)于泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤的早期診斷有較高的應(yīng)用價(jià)值,可以作為老年科泌尿系腫瘤篩查的一線方法。

    關(guān)鍵詞:泌尿系腫瘤;熒光原位雜交;尿液細(xì)胞學(xué)

    泌尿道腫瘤中膀胱癌是老年人群中發(fā)病率較高的惡性腫瘤,根據(jù)美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)的最新統(tǒng)計(jì)資料顯示,2012年全球膀胱癌新發(fā)病例42.98萬(wàn)例,死亡病例16.51萬(wàn)例。男女比例為10∶1,因而膀胱癌是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤[1]。 膀胱癌的早期診斷對(duì)疾病的預(yù)后有極其重要的影響,早期診斷主要以尿液脫落細(xì)胞學(xué)診斷、膀胱鏡組織活檢病理學(xué)檢查及影像學(xué)檢查等方法為主。 近期一種基于熒光原位雜交技術(shù)(FISH)原理的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用到臨床實(shí)踐中,此項(xiàng)技術(shù)主要檢測(cè)尿液標(biāo)本中第3、7、17號(hào)染色體的非整數(shù)倍,以及第9號(hào)染色體長(zhǎng)臂21區(qū)域(9p21)的缺失。根據(jù)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道顯示,F(xiàn)ISH對(duì)泌尿系腫瘤的診斷有較高的敏感度和特異性,同時(shí)對(duì)腫瘤的療效和預(yù)后判斷有較好的效果。 本文采用Urovysion FISH試劑盒檢測(cè)老年科患者泌尿系統(tǒng)脫落細(xì)胞中4種染色體的異常,評(píng)價(jià)FISH在老年人群中普查泌尿系腫瘤的意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1資料與方法

    1.1一般資料收集本院2011年3月至2014年10月老年醫(yī)學(xué)科患者1 350例,其中男965例(71.48%),女385例(28.52%),平均年齡(72.3±12.3)歲。

    1.2標(biāo)本采集與制備所有參試者均于試驗(yàn)當(dāng)天取晨尿30~200 mL,置清潔容器中送至本院實(shí)驗(yàn)室待檢。行初步尿液脫落細(xì)胞計(jì)數(shù),如尿液脫落細(xì)胞數(shù)過(guò)少,則判定為不合格標(biāo)本,囑患者第2周再送尿液標(biāo)本。 所有標(biāo)本均于當(dāng)天進(jìn)行處理。

    1.3FISH檢測(cè)FISH檢測(cè)按Pathvysion Urovysion DNA Kit試劑盒(USA)說(shuō)明書(shū)操作,簡(jiǎn)要描述如下。將20~50 mL新鮮尿液以2∶1比例與聚乙二醇混合,存放于4 ℃冰箱中當(dāng)天處理。 將尿液置500 r/min離心10 min以取得泌尿道脫落細(xì)胞。用甲醇、冰醋酸混合液固定后2次離心沉淀,將沉淀的細(xì)胞用15 μL固定液重懸浮,制成細(xì)胞涂片。熒光探針包括3個(gè)重復(fù)序列,分別可以識(shí)別3、7和17號(hào)染色體的著絲粒片段。另有一特殊探針識(shí)別9p21片段。 在37 ℃潮濕環(huán)境下過(guò)夜完成雜交,沖洗后空氣干燥,然后用4′、6′-二脒基-2-苯基吲哚Ⅱ進(jìn)行反染色,隨后上熒光顯微鏡分析結(jié)果。

    1.4FISH結(jié)果判斷對(duì)至少25個(gè)形態(tài)學(xué)異常的細(xì)胞進(jìn)行分析,直至出現(xiàn)大于或等于4個(gè)細(xì)胞獲得復(fù)染色體,即CEP3-紅色,CEP-7綠色,CEP-17藍(lán)綠色信號(hào)的異常;或者出現(xiàn)大于或等于12個(gè)細(xì)胞具有9p21片段的同源缺失(即LSI 9p21黃色信號(hào)的缺失)。

    2結(jié)果

    2.1FISH檢測(cè)尿液中脫落細(xì)胞染色體異常的方法驗(yàn)證首先驗(yàn)證了Urovysion FISH在尿液脫落細(xì)胞中檢測(cè)染色體異常的準(zhǔn)確性,結(jié)果顯示,F(xiàn)ISH能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出尿液脫落細(xì)胞中3、7、17號(hào)染色體的異常,以及9p21區(qū)段的缺失。4種染色體異常的熒光顯微鏡下表現(xiàn)見(jiàn)圖1。圖1A為正常尿液脫落細(xì)胞FISH結(jié)果,表現(xiàn)為紅色、綠色、藍(lán)綠色及黃色各2個(gè)信號(hào); 圖1 B為FISH陽(yáng)性結(jié)果,表現(xiàn)為3、7、17號(hào)染色體多重信號(hào)增加;圖1C為7號(hào)染色體異常結(jié)果,表現(xiàn)為綠色信號(hào)缺失;圖1D為17號(hào)染色體異常,表現(xiàn)為藍(lán)綠色信號(hào)缺失;圖1E為9p21缺失異常,表現(xiàn)為黃色信號(hào)缺失; 圖1F為3號(hào)染色體異常,表現(xiàn)為紅色信號(hào)缺失。

    圖1  泌尿道脫落細(xì)胞FISH檢測(cè)結(jié)果

    2.21 350例老年患者尿液脫落細(xì)胞中染色體異常結(jié)果分析 Urovysion FISH檢測(cè)老年科患者尿液脫落細(xì)胞染色體正常1 112例(82.37%),異常238例(17.63%),其中3號(hào)染色體異常55例(4.07%),7號(hào)染色體異常68 例(5.04%),17號(hào)染色體異常 41例(3.04%),9p21缺失36例(2.67%)。病理學(xué)確診膀胱癌 22例(1.63%),其他泌尿系腫瘤16例(1.19%)。

    3討論

    目前,膀胱癌的確診主要以膀胱鏡活檢、影像學(xué)表現(xiàn)及最終病理學(xué)診斷等手段,為臨床醫(yī)生提供準(zhǔn)確的病例類型和臨床分期。 FISH檢測(cè)尿液脫落細(xì)胞學(xué),分析膀胱上皮細(xì)胞中染色體的異常,可為膀胱癌的早期診斷提供重要的線索和依據(jù)。并且是一種無(wú)創(chuàng)性診斷方法,獲得了美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局和國(guó)家藥監(jiān)局批準(zhǔn),用于普通人群膀胱癌的篩選檢查。

    FISH的特點(diǎn)是方法穩(wěn)定,可以避免標(biāo)本處理和固定過(guò)程中的影響因素。 其另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是能對(duì)結(jié)果直接進(jìn)行定性和定量分析,受觀察者主觀因素的影響較小。 本研究晨尿中脫落細(xì)胞的數(shù)量決定了分析結(jié)果的可靠性。因而細(xì)胞數(shù)量低于分析前要求,本研究采取了重新采樣的做法,以確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    本研究結(jié)果顯示,F(xiàn)ISH檢測(cè)尿液脫落細(xì)胞染色體異常產(chǎn)生了較為滿意的敏感度和特異性,與國(guó)外的報(bào)道結(jié)果相類似[2-4]。 3、7、17號(hào)染色體倍體異常,以及9p21區(qū)段的缺失在膀胱癌中呈現(xiàn)較高的發(fā)生率。Kim等[5]的研究結(jié)果顯示,尿液脫落細(xì)胞FISH陽(yáng)性結(jié)果可以預(yù)測(cè)尿液細(xì)胞學(xué)可疑及膀胱鏡檢陰性的膀胱癌患者的復(fù)發(fā)和腫瘤進(jìn)展,但需要的隨訪時(shí)間較長(zhǎng);陽(yáng)性FISH結(jié)果預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)比(HR)=2.35,95%CI:1.42~3.90,P=0.001,預(yù)測(cè)腫瘤進(jìn)展的HR=3.01,95%CI:1.10~8.21,P=0.03。在另一項(xiàng)前瞻性篩選研究中,Bonberg等[6]報(bào)道,染色體的不穩(wěn)定性與膀胱癌的發(fā)生密切相關(guān),3、7、17號(hào)染色體的多倍體異常,以及9p21位點(diǎn)的缺失是膀胱癌最為常見(jiàn)的拷貝數(shù)變異(CNV )表現(xiàn),此類異常具有累積性,且在腫瘤獲得診斷前3年即可被發(fā)現(xiàn);高分化性腫瘤比低分化性腫瘤有更高的累計(jì)性CNV。Urovysion FISH也可以檢測(cè)上泌尿道脫落細(xì)胞中染色體的異常,Reynolds等[7]報(bào)道,相對(duì)于尿液細(xì)胞學(xué)檢查,F(xiàn)ISH有更高的檢測(cè)敏感度和特異性,而二者聯(lián)合應(yīng)用可以顯著提高診斷的準(zhǔn)確性。 Urovysion FISH在非肌肉侵襲性膀胱癌的預(yù)后評(píng)估中具有顯著意義,在多變量分析模型中均值大于16%的CNV是膀胱癌的預(yù)后影響因子(P=0.048,OR:6.07,95%CI:1.02~57.45)[8]。同時(shí)9p21缺失大于12%是預(yù)后的獨(dú)立影響因子(P<0.001,OR:3.24,95%CI:1.85~5.62)。

    綜上所述,UroVysion FISH適合在一般老年人群中作為一種普查試驗(yàn)來(lái)篩選膀胱惡性腫瘤,并且可以提前數(shù)年為臨床醫(yī)生提供診斷的線索,避免侵入性的檢查方法。 同時(shí)可以作為膀胱癌預(yù)后判斷的一種有效方法。

    參考文獻(xiàn)

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    Application of Urovysion FISH in the detection of aberrant chromosomes of urothelial malignancies:a study of geriatric patients by detecting urine specimens

    LILi1,XULing1,XIEGuohua1,WANGGenfa2,ZHANGLiang3△

    (1.DepartmentsofClinicalLaboratory; 2.DepartmentofGerontology,XinHuaAffiliatedHospitalofShanghaiJiaoTongUniversity,Shanghai200092,China)

    Abstract:ObjectiveTo explore the clinical application values of Urovysion fluorescent in situ hybridization (FISH) in the detection of aberrant chromosomes of urothelial malignancies in exfoliated urothelial cells of geriatric patients.MethodsMorning urine samples from 1 350 cases of geriatric patients were collected.The aberrant chromosomes 3,7 and 17 aneuploidy and 9p21 locus deletions were tested with Urovysion FISH assay.ResultsIn total of 1 350 cases,55 cases (4.07%) were detected as chromosome 3 anueploidy; 68 cases (5.04%) were detected as chromosome 7 aneuploidy; 41 cases (3.04%) were detected as chromosome 17 anueploidy and 36 cases (2.67%) were detected as 9p21 locus deletions.The final pathologic diagnosis confirmed that 22 cases(1.63%) were bladder cancer and 16 cases (1.19%) were other urothelial carcinomas.ConclusionUrovysion FISH has high application value for the screening of urothelial malignancies and can be used as routine diagnostic method.

    Key words:urothelial malignancy;fluorescent in situ hybridization;urinary cytology

    作者簡(jiǎn)介:李莉,女,主管技師,主要從事分子生物學(xué)檢驗(yàn)方面的研究?!魍ㄓ嵶髡撸珽-mail:drliangz@126.com。

    DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.008

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1673-4130(2016)11-1470-02

    (收稿日期:2016-01-12修回日期:2016-03-12)

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