正交試驗法優(yōu)選冠舒顆粒提取工藝

蔣殿欣，王鈺涵，張煒煜

(長春中醫(yī)藥大學，長春 130117)

正交試驗法優(yōu)選冠舒顆粒提取工藝

蔣殿欣，王鈺涵，張煒煜*

(長春中醫(yī)藥大學，長春 130117)

摘要：目的優(yōu)選冠舒顆粒的醇提工藝和水提工藝。方法采用單因素考察法和L9(34)正交試驗法，以總皂苷含量為考察指標，考察乙醇濃度、加醇量、提取時間、提取次數(shù)對醇提工藝的影響。以總多糖含量為考察指標，考察提取時間、提取次數(shù)、加水量對水提工藝的影響。結(jié)果最佳醇提工藝為加8倍于藥材量70%乙醇提取3次，每次2 h；最佳水提工藝為加6倍于藥材量水提取3次，每次2 h。結(jié)論冠舒顆粒提取工藝穩(wěn)定可行，適合大工業(yè)生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：冠舒顆粒；總皂苷；總多糖；提取工藝

冠舒顆粒為吉林省科技廳重點科技攻關(guān)項目，由人參、三七、梔子、甘草組成，是臨床用于治療冠心病的有效藥物。人參的主要活性成分為多糖和皂苷[1-4]，三七富含皂苷類成分，迄今已從三七的不同部位分離鑒定70多個達瑪烷型皂苷[5-7]，具有廣泛的藥理作用[8]?，F(xiàn)代植物化學研究[9]發(fā)現(xiàn)，梔子中含有一些有機酸、黃酮、香豆素、揮發(fā)油、皂苷、木脂素、多糖及其他類化合物，具有抗炎、抗氧化、利膽、利尿、抗腫瘤、解熱、鎮(zhèn)痛、輻射防護、降血脂等多種藥理活性。故本實驗擬選擇總皂苷、總多糖含量分別為冠舒顆粒的醇提工藝、水提工藝的評價指標，采用正交試驗優(yōu)選提取工藝，為該制劑的工業(yè)化生產(chǎn)提供有力的技術(shù)支持。

1材料

WFH-203J型三用紫外可見分析儀(上海精科實業(yè)有限公司)，AR2140型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，JA5103N電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)，RE- 52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。人參皂苷、葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號111129,110833-200904)，人參、三七、梔子、甘草均購于安徽易元堂中藥飲片科技有限公司，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學姜大成教授鑒定，均符合2015版《中國藥典》一部相關(guān)項下要求，乙醇為分析純，乙腈、甲醇均為色譜純，娃哈哈純凈水。

2方法與結(jié)果

2.1總皂苷提取工藝的優(yōu)選2.1.1乙醇濃度的考察按處方比例稱取藥材，共5分，各67.5 g，加入8倍于藥材量濃度分別為65%、70%、75%、80%、85%的乙醇回流提取2次，每次1.5 h，提取液濾過，濾液合并，減壓回收乙醇至無醇味，濃縮，干燥至恒重；取粉末0.3 g，精密稱定，按總皂苷含量測量方法進行測定，結(jié)果分別為326.249、656.041、403.174、214.192、153.515 mg/100 g，表明乙醇濃度在70%時，總皂苷含量最高，故確定乙醇濃度為65%～75%。

2.1.2正交試驗設計以提取物中總皂苷的含量為考察指標，采用L9(34)正交試驗考察乙醇濃度、加醇量、提取時間、提取次數(shù)對考察指標的影響，優(yōu)選乙醇回流提取工藝。按處方比例稱取藥材，共9分，各100 g，按因素水平表(表1)設計的條件進行回流提取，提取液濾過，濾液合并，減壓回收乙醇至無醇味，濃縮，干燥至恒重，依法測定干膏中總皂苷的含量，計算提取率。試驗安排及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1　總皂苷提取工藝正交試驗因素水平

表2　總皂苷提取工藝正交試驗安排

表3　總皂苷提取工藝方差分析

注：#P<0.05F0.05(2，2)=19.00F0.01(2，2)=99.00

表2、表3結(jié)果表明，以總皂苷含量為指標，影響醇提工藝的因素作用順序為：回流次數(shù)>醇濃度>提取時間>加醇量，回流次數(shù)的影響因素有顯著性差異(P<0.05)，結(jié)合經(jīng)濟合理適合工業(yè)化生產(chǎn)及處方中其他有效成分的影響，確定最佳工藝為A2B2C3D3。即處方加8倍于藥材量70%乙醇提取3次，每次2 h。

2.1.3驗證試驗取8倍于處方量的藥材，共3分，按最佳的工藝條件進行提取，提取液濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，干燥至恒重，測定提取物中總皂苷的含量為614.242 mg/100 g，RSD值為1.55%。驗證結(jié)果表明該工藝穩(wěn)定可行。

2.2總多糖提取工藝的優(yōu)選

2.2.1正交試驗設計取最佳醇提工藝提取后的藥渣，平均分為9分，以總多糖的提取率為考察指標，采用L9(34)的正交設計進行試驗。按因素水平表設計的條件進行煎煮，提取液濾過，濾液合并，濃縮，干燥至恒重，測定提取物中總多糖的含量，計算提取率。試驗安排及結(jié)果表明，以總多糖含量為指標，影響水煎工藝的因素作用順序為：提取時間>提取次數(shù)>加水量，提取時間的影響因素有顯著性差異(P<0.05)，結(jié)合經(jīng)濟合理適合工業(yè)化生產(chǎn)及處方中其他有效成分的影響，確定最佳工藝為A1B3C3D3。即處方加6倍于藥材量水提取3次，每次2 h。2.2.2驗證試驗取醇提驗證試驗中藥渣按最佳水提工藝提取，提取液濾過，濾液合并，濃縮，干燥至恒重，測定提取物中總多糖含量為1 862.602 mg/100 g，RSD值為1.2%。驗證結(jié)果表明該工藝穩(wěn)定可行。

3小結(jié)

確定以君藥人參中脂溶性有效成分皂苷和水溶性成分多糖為考察指標，但兼顧臣藥三七的有效成分同樣為多糖和皂苷，臣藥也在處方中發(fā)揮著重要的作用，因此，最終確定脂溶性的有效成分為總皂苷，水溶性成分為總多糖，進行提取工藝的研究[10-17]。經(jīng)過醇提和水煎工藝制成顆粒。通過口服的方式給藥，達到治療疾病的效果。冠舒顆粒具有使用方便、攜帶方便、療效確切的優(yōu)點，并避免了傳統(tǒng)中藥湯劑味苦，服用量大，久置易霉變的缺點。本研究通過單因素考察法和正交試驗法確定了處方中有效成分的最佳提取工藝，為后續(xù)的大工業(yè)生產(chǎn)提供可靠的參數(shù)。

比較了超聲提取和乙醇回流提取方法[18]，當采用超聲提取法時，測得總皂苷含量重復性差，且總皂苷含量低于乙醇回流提取法。可能原因為采用超聲提取法時，總皂苷提取不完全。當采用乙醇回流提取法時，總皂苷含量重復性好，工藝穩(wěn)定可行。故確定醇提工藝為乙醇回流提取法。

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Optimization of extraction process for Guanshu Granules by orthogonal test

JIANG Dianxin,WANG Yuhan,ZHANG Weiyu*

(Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract：ObjectiveOptimize alcohol and water extraction processes of Guanshu granules.Methods According to the single factor method and L9(34) orthogonal test,the content of total saponins as test index,to optimize alcohol extraction process with ethanol concentration,ethanol amount,extracting time,extracting times.The total polysaccharides contents as test index,to optimize water extraction process with extracting time,extracting times,amount of water.ResultsThe best ethanol extraction process is extracting three times with 8 times the amount of 70% ethanol for 2 h per time;the best water extraction process is extracting three times with 6 times the amount of water for 2 h per time.ConclusionThe optimized process is reliable and feasible,and is suitable for industrial production.

Keywords：Guanshu Granules;total saponins;total polysaccharides;extraction process

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.03.011

基金項目：吉林省科學技術(shù)廳項目(20140204032YY)。

作者簡介：蔣殿欣(1989-)，男，碩士研究生，主要從事藥物新劑型及新型給藥系統(tǒng)。

*通信作者：張煒煜，電話-13500881796，電子信箱- weiyuzhang2003@126.com

中圖分類號：R284.2

文獻標志碼：A

文章編號：2095-6258(2016)03-0469-03

(收稿日期:2016-01-12)