金屬線碼標(biāo)記操作對(duì)大黃魚5種血清酶活力的影響

黃建華，沈斌，黃曉婷，朱愛(ài)意

（浙江海洋大學(xué)，國(guó)家海洋設(shè)施養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，浙江舟山316022）

金屬線碼標(biāo)記操作對(duì)大黃魚5種血清酶活力的影響

黃建華，沈斌，黃曉婷，朱愛(ài)意

（浙江海洋大學(xué)，國(guó)家海洋設(shè)施養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，浙江舟山316022）

金屬線碼標(biāo)記體積非常小，對(duì)標(biāo)記生物的存活、生長(zhǎng)、發(fā)育影響都比較小，且保持率很高，代碼能力強(qiáng)，能研究到每個(gè)個(gè)體，可進(jìn)行大規(guī)模標(biāo)志并且檢測(cè)方便，具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究采用長(zhǎng)3±0.05 mm、直徑0.57±0.02 mm的涂鉻金屬絲，模擬金屬線碼注射到大黃魚背部肌肉中，通過(guò)分析大黃魚血清中與抗氧化、非特異性免疫相關(guān)的超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、溶菌酶（LZM）、酸性磷酸酶（ACP）及堿性磷酸酶（AKP）的活性變化，觀察大黃魚對(duì)金屬標(biāo)記操作的應(yīng)激反應(yīng)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：血清SOD、CAT、LZM、ACP和AKP的活性均呈現(xiàn)出先升高后降低并逐漸恢復(fù)至正常水平的趨勢(shì)。SOD酶活性在12 h時(shí)與對(duì)照組存在顯著差異，其余4個(gè)酶活性在6 h與12 h時(shí)均與對(duì)照組存在顯著差異。24 h時(shí)各酶的活性均開(kāi)始降低且與對(duì)照組已無(wú)顯著差異，金屬標(biāo)記操作3 d后各酶的活性均基本恢復(fù)至正常水平。結(jié)果表明，在金屬標(biāo)記的早期，由標(biāo)記引起的應(yīng)激會(huì)對(duì)大黃魚的抗氧化、非特異性免疫系統(tǒng)產(chǎn)生輕微的影響，但該影響隨著標(biāo)記后暫養(yǎng)時(shí)間的推移逐漸減弱，至3 d時(shí)其影響已基本消失。因此，建議應(yīng)將金屬線碼標(biāo)記的大黃魚暫養(yǎng)3 d以上再進(jìn)行放流比較合適。

金屬線碼標(biāo)記；大黃魚；抗氧化；免疫；酶活

金屬線碼標(biāo)志方法發(fā)明于20世紀(jì)60年代，在國(guó)外現(xiàn)已成為最廣泛使用的魚類標(biāo)志技術(shù)之一[1]，是使用專門設(shè)備將印有數(shù)字編碼的磁性金屬細(xì)絲注射到魚體皮下組織，在回捕時(shí)使用專門的檢測(cè)儀器進(jìn)行鑒定的標(biāo)記方法[2]。金屬線碼標(biāo)由直徑0.25 mm的磁性金屬絲制作，標(biāo)上刻有編碼，能區(qū)分不同個(gè)體。標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)度為1.1 mm，視魚體大小選用[3]。其體積非常小，注入魚體的傷口小，愈合快，很少引起魚體組織的損傷，與體外標(biāo)相比，幾乎不影響魚類的捕食、游泳和生境選擇[4-6]；且保持率很高[1-6]，標(biāo)記的生物存活率、標(biāo)記的保持率直接影響著日后標(biāo)記放流效果的評(píng)估。而且線碼標(biāo)記的部位很少被食用，即使被食用，由于線碼標(biāo)記體積小，沒(méi)有危害成分，且無(wú)毒性，所以對(duì)人體基本無(wú)影響[3]。金屬線碼標(biāo)記和檢測(cè)可以通過(guò)自動(dòng)化儀器進(jìn)行，便于進(jìn)行大規(guī)模標(biāo)志和檢測(cè)。但此技術(shù)從外表通常無(wú)法識(shí)別是否為已標(biāo)記生物，需要專門的儀器進(jìn)行檢測(cè)，而此類設(shè)備較昂貴，所以在國(guó)內(nèi)這種方法暫時(shí)使用得不多[6-8]。

大黃魚Larimichthys crocea是我國(guó)近海最重要的傳統(tǒng)經(jīng)濟(jì)魚類之一，因其肉味鮮美而馳名中外，曾創(chuàng)造了巨大的商業(yè)價(jià)值。上世紀(jì)80年代后，隨著捕撈強(qiáng)度和捕撈力度的日益增加、海洋環(huán)境污染及其他未知因素，致使?jié)O業(yè)資源遭到嚴(yán)重破壞，使大黃魚資源嚴(yán)重衰退，近乎銷聲匿跡[9]。為了恢復(fù)這一傳統(tǒng)漁業(yè)資源，補(bǔ)充自然海域大黃魚的群體數(shù)量，促進(jìn)海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展，政府每年投入大量經(jīng)費(fèi)用于大黃魚的增殖放流。但是，由于目前尚未對(duì)放流大黃魚開(kāi)展全面的標(biāo)志研究，因此關(guān)于大黃魚增殖放流的效果至今尚無(wú)法進(jìn)行較好的評(píng)估。鑒此，建立一種適用于大黃魚增殖苗種的規(guī)?；瘶?biāo)記及檢測(cè)方法已成當(dāng)務(wù)之急。傳統(tǒng)的掛牌、剪鰭等標(biāo)志方法存在對(duì)魚體損傷及放流后死亡率較高的缺點(diǎn)[10]，并不適用于大黃魚規(guī)?；瘶?biāo)記放流?；瘜W(xué)標(biāo)記易被魚體排異或同化吸收而使效果不明顯[8]，還可能存在魚體中過(guò)量有毒物質(zhì)殘留等缺點(diǎn)[10]。而金屬線碼標(biāo)志由于其體積小、標(biāo)志保持率高、具有編碼功能等特點(diǎn)，在大黃魚規(guī)?；鲋撤帕骷靶Чu(píng)估方面具有廣泛的潛在應(yīng)用前景。

但金屬線碼作為異物植入魚體內(nèi)，會(huì)引起魚體排異、應(yīng)激等一些不良反應(yīng)，很可能會(huì)導(dǎo)致魚體死亡并導(dǎo)致標(biāo)記的失敗。本研究通過(guò)分析標(biāo)記前后大黃魚血清SOD、CAT、LZM、ACP和AKP的活性變化，對(duì)金屬線碼標(biāo)記操作可能引起的應(yīng)激反應(yīng)、免疫排異等開(kāi)展研究，并為該標(biāo)記方法在大黃魚增殖放流中的大規(guī)模應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)魚

本實(shí)驗(yàn)所用的大黃魚購(gòu)自浙江舟山某養(yǎng)殖基地，充氧運(yùn)回，120尾，平均體長(zhǎng)12.4±2.1 cm，體重24.1± 4.6 g。大黃魚運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后暫養(yǎng)于直徑4 m、深1.5 m的海水循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)，24 h水循環(huán)，每天換水約5%，海水鹽度25.6，水質(zhì)溶解氧8.0 mg/L左右。每天09:00和16:00定時(shí)投喂大黃魚養(yǎng)殖配合飼料，投喂1 h后吸去殘餌，投喂量約為魚體重的5%，暫養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)前一天停止投喂。

1.1.2 金屬線碼

涂鉻金屬絲長(zhǎng)度3±0.05 mm，直徑0.57±0.02 mm，無(wú)菌消毒處理備用。

1.1.3 主要試劑

超氧化物歧化酶（SOD）（貨號(hào)：A001-1）、過(guò)氧化氫酶（CAT）（貨號(hào)：A007-1）、溶菌酶（LZM）（貨號(hào)：A050）、酸性磷酸酶（ACP）（貨號(hào)：A060）、堿性磷酸酶（AKP）（貨號(hào)：A059-2）酶活測(cè)定試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程有限公司；麻醉劑：取海水加入MS-222，制成2.5%MS-222溶液備用。

1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器及器材

Microfuge 22R臺(tái)式離心機(jī)（美國(guó)貝克曼公司），MultiskanFC酶標(biāo)儀，DR5000分光光度計(jì)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方案

實(shí)驗(yàn)時(shí)隨機(jī)取體色、體表、運(yùn)動(dòng)正常的魚放到2.5%MS-222麻醉劑溶液中，麻醉3～5 min，待魚出現(xiàn)側(cè)翻時(shí)取出魚，用毛巾裹住，露出魚背部，用一次性注射器，通過(guò)空壓法將金屬絲注射至魚背部皮下，迅速放入海水循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在標(biāo)記后0 h（未打標(biāo)記，其他與標(biāo)記組相同操作）、3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、5 d時(shí)分別取10尾大黃魚，麻醉處理，進(jìn)行尾靜脈取血、稱重、測(cè)體長(zhǎng)。血液樣品室溫靜置3小時(shí)后，3 000 r/min離心10 min，取血清，放入-25℃冰箱保存，備用。

1.3 酶活力單位定義

SOD活力單位定義：每100 mL血清在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為1個(gè)SOD活力單位（U/mL）。

CAT活力單位定義：每毫升血清每秒鐘分解1 μmol的H2O2的量為一個(gè)活力單位（U/mL）。

LZM采用免疫比濁法進(jìn)行測(cè)定，單位U/mL。

ACP活力單位定義：100 mL血清在37℃與基質(zhì)作用30 min產(chǎn)生1 mg酚為1個(gè)ACP活力單位（U/ 100 mL）。

AKP活力單位定義：100 mL血清在37℃與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg酚為1個(gè)AKP活力單位（U/ 100 mL）。

1.4 酶活的測(cè)定

血清SOD、CAT、LZM、ACP和AKP的酶活測(cè)定均按南京建成試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.5 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2003軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。利用SPSS 18.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)，顯著水平為P<0.05（*）和P<0.01（**）。

2 結(jié)果

2.1 金屬線碼標(biāo)記對(duì)大黃魚存活率的影響

標(biāo)記大黃魚放回養(yǎng)殖池內(nèi)后，開(kāi)始時(shí)由于麻醉作用尚未消除，魚體出現(xiàn)側(cè)翻、頭朝上并隨著水流浮動(dòng)的現(xiàn)象并持續(xù)3～5 min。隨后，大黃魚開(kāi)始游動(dòng)并伴有較為明顯的應(yīng)激反應(yīng)（如游速較快、易受驚嚇等）。約6 h后游動(dòng)放緩，24 h后游動(dòng)基本正常，投喂飼料，部分魚開(kāi)始攝食，3 d后攝食、活動(dòng)基本恢復(fù)正常。在標(biāo)記傷口處，剛開(kāi)始能看到有輕微傷口痕跡，1 d時(shí)基本愈合，3 d時(shí)標(biāo)記傷口幾乎不明顯。試驗(yàn)期間標(biāo)記大黃魚的存活率為100%。

2.2 金屬線碼標(biāo)記操作脅迫對(duì)大黃魚血清酶活的影響

2.2.1 標(biāo)記操作對(duì)SOD活性的影響

圖1 標(biāo)記操作對(duì)大黃魚血清SOD活性的影響Fig.1Effect of tagging on serum SOD activity of L.crocea

如圖1所示，對(duì)照組大黃魚血清SOD酶活性平均20.687 U/mL，標(biāo)記操作后血清SOD酶的活性開(kāi)始逐漸上升，標(biāo)記12 h后其血清SOD酶活性升至最高（平均22.107 U/mL），與對(duì)照組相比上升了6.9%，酶活性顯著差異（P<0.05）。隨后血清SOD酶活性開(kāi)始逐漸下降，標(biāo)記24 h后SOD酶活性降至平均21.228 U/mL且與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P>0.05），標(biāo)記3 d后降至正常水平。

2.2.2 標(biāo)記操作對(duì)對(duì)CAT活性的影響

圖2 標(biāo)記操作對(duì)大黃魚血清溶CAT活性的影響Fig.2Effect of tagging on serum CAT activity of L.crocea

如圖2所示，對(duì)照組大黃魚的血清CAT酶活性平均4.986 U/mL，標(biāo)記操作后其血液中CAT酶活性呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢(shì)。標(biāo)記6 h后，其血清CAT酶活性平均為5.474 U/mL，與對(duì)照組相比升高了9.8%（P<0.05）。標(biāo)記12 h后CAT酶活性升至最高，平均5.657 U/mL（P<0.05）。隨后，血清CAT酶活性開(kāi)始下降，24 h時(shí)與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05），3 d時(shí)已基本恢復(fù)到初始水平。

2.2.3 標(biāo)記操作對(duì)對(duì)溶菌酶活性的影響

圖3 標(biāo)記操作對(duì)大黃魚血清溶菌酶活性的影響Fig.3Effect of tagging on serum LZM activity of L.crocea

如圖3所示，對(duì)照組大黃魚血清LZM活性平均47.109 U/mL，標(biāo)記操作后其血清中LZM活性同樣呈現(xiàn)先升高再下降的趨勢(shì)。標(biāo)記6 h后，大黃魚血清LZM活性平均49.123 U/mL，與對(duì)照組相比上升了4.3%（P<0.05）。標(biāo)記12 h后，LZM活性升至最高，平均49.317 U/mL（P<0.05）。隨后LZM酶活性開(kāi)始逐漸下降，標(biāo)記24 h后與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05），3 d后基本降到初始水平。

2.2.4 標(biāo)記操作對(duì)對(duì)ACP活性的影響

圖4 標(biāo)記操作對(duì)大黃魚血清ACP活性的影響Fig.4Effect of tagging on serum ACP activity of L.crocea

如圖4所示，對(duì)照組大黃魚血清ACP的活性平均為2.385 U/100 mL，標(biāo)記操作后ACP活性同樣呈現(xiàn)出先升高再降低的變化趨勢(shì)。從0～12 h，血清ACP活性持續(xù)升高，標(biāo)記6 h后ACP活性平均為2.731 U/100 mL，比對(duì)照組升高了14.5%（P<0.05）。標(biāo)記12 h后，ACP活性達(dá)到最大值（平均2.962 U/100 mL），比對(duì)照組升高了24.2%（P< 0.01）。隨后，大黃魚血清ACP活性逐漸降低，標(biāo)記24 h后與對(duì)照組已無(wú)顯著差異（P>0.05），3 d后恢復(fù)初始水平。

2.2.5 標(biāo)記操作對(duì)對(duì)AKP活性的影響

如圖5所示，對(duì)照組大黃魚的血清AKP活性平均為15.613 U/ 100 mL，金屬線碼標(biāo)記后，AKP活性出現(xiàn)了與ACP類似的先升高再降低的變化趨勢(shì)。從0～12 h，血清中AKP活性逐漸升高，標(biāo)記6 h后AKP活性平均達(dá)到18.088 U/100 mL，與對(duì)照組相比升高了15.9%，差異極顯著（P<0.01）。標(biāo)記12 h后，大黃魚血清AKP酶活性達(dá)到最大值，平均18.278 U/100 mL，與對(duì)照組相比顯著升高了17.1%（P< 0.01）。之后，血清AKP活性開(kāi)始逐漸降低，標(biāo)記24 h后與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05），3 d后恢復(fù)初始水平。

圖5 標(biāo)記操作對(duì)大黃魚血清AKP活性的影響Fig.5Effect of tagging on serum AKP activity of L.crocea

3 討論

3.1 金屬線碼標(biāo)記操作對(duì)大黃魚血清抗氧化酶SOD和CAT活性的影響

SOD和CAT是生物體內(nèi)清除自由基的主要抗氧化酶。SOD是一種廣泛存在于動(dòng)植物、微生物中的金屬酶，能催化生物體內(nèi)新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的超氧自由基(O2-)發(fā)生歧化反應(yīng)，是機(jī)體內(nèi)O2-的天然清除劑[11]，在生物體的自我保護(hù)系統(tǒng)中起著極為重要的作用。CAT存在于紅細(xì)胞及某些組織內(nèi)的過(guò)氧化體中，是生物防御體系的關(guān)鍵酶之一，它的主要作用就是催化清除體內(nèi)的過(guò)氧化氫，從而使細(xì)胞免于遭受H2O2的毒害[12]，其酶促活性為機(jī)體提供了抗氧化防御機(jī)理。

環(huán)境脅迫[13]、創(chuàng)傷應(yīng)激[14-15]等會(huì)引起動(dòng)物體內(nèi)活性氧的積累，對(duì)動(dòng)物體的健康造成威脅。本研究結(jié)果表明，金屬線碼標(biāo)記后，大黃魚血清SOD和CAT活性均在短時(shí)間內(nèi)迅速升高，并在12 h時(shí)活性達(dá)到最高（圖1和圖2）。該結(jié)果提示由標(biāo)記操作引起的創(chuàng)傷應(yīng)激和炎癥反應(yīng)很可能導(dǎo)致大黃魚體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化顯著增強(qiáng)并引起大黃魚體內(nèi)活性氧積聚，大黃魚血清中SOD和CAT活性應(yīng)激性升高，并通過(guò)兩種酶的協(xié)同作用清除體內(nèi)的氧自由基，從而避免氧自由基對(duì)機(jī)體造成的損傷。這與其他一些研究的結(jié)果相類似。例如，聶海等[14]研究發(fā)現(xiàn)，大鼠Rattus norvegicus血清SOD活性在創(chuàng)傷刺激早期也略有升高。而魏寧等[15]研究了采血應(yīng)激對(duì)白羽肉雞Gallus gallus血清SOD活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采血應(yīng)激同樣能夠?qū)е掳子鹑怆u血清SOD活性在24 h內(nèi)顯著升高。周繼紅等[16]對(duì)創(chuàng)傷處理的豬Sus scrofa的血液CAT活性開(kāi)展了研究，結(jié)果表明創(chuàng)傷應(yīng)激后豬血液CAT活性在12 h內(nèi)顯著升高。另外，高碳酸鹽堿度[17]、低海水鹽度[18-19]、重金屬[20]和農(nóng)藥脅迫[12,21]等均能導(dǎo)致魚體內(nèi)SOD和CAT活性的顯著升高，以達(dá)到快速消除體內(nèi)由應(yīng)激產(chǎn)生和過(guò)量活性氧。

隨著金屬線碼標(biāo)記操作暫養(yǎng)恢復(fù)時(shí)間的延長(zhǎng)，大黃魚體內(nèi)由于標(biāo)記操作脅迫所產(chǎn)生的氧自由基被應(yīng)激產(chǎn)生SOD和CAT的逐漸清除，大黃魚血清SOD和CAT活性開(kāi)始緩慢下降并逐漸恢復(fù)到正常水平（圖1和圖2）。該結(jié)果提示，隨著標(biāo)記時(shí)間的延長(zhǎng)（>3 d），金屬線碼標(biāo)記操作對(duì)大黃魚產(chǎn)生的生理影響也逐漸減弱并恢復(fù)至正常水平。

3.2 金屬線碼標(biāo)記操作對(duì)大黃魚血清非特異性免疫酶LZM活性的影響

溶菌酶LZM是生物體重要的非特異性免疫因子之一，具有殺菌、抗感染、誘導(dǎo)調(diào)節(jié)其他免疫因子合成和分泌、增加免疫力、修復(fù)傷口等功能[22]。本研究的結(jié)果表明，標(biāo)記操作后，大黃魚血清LZM活性在6 h時(shí)顯著上升并在12 h時(shí)活性達(dá)到最高（圖3），該結(jié)果提示，標(biāo)記操作導(dǎo)致的創(chuàng)傷應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等使大黃魚處于防御機(jī)制的快速動(dòng)員期，并引起大黃魚血清LZM活性在短時(shí)間內(nèi)快速上升，除了創(chuàng)傷應(yīng)激，有研究表明高密度養(yǎng)殖、溫度脅迫、重金屬和農(nóng)藥脅迫等都會(huì)誘導(dǎo)魚類血清LZM活性的快速升高；王文博等[23]研究發(fā)現(xiàn)鯽魚Carassius auratus血液LZM活性在擁擠脅迫3 d時(shí)顯著升高，隨后活性大幅下降，脅迫30 d時(shí)已顯著低于對(duì)照組。孫學(xué)亮等[24]對(duì)半滑舌鰨Cynoglossus semilaevis進(jìn)行了急性高溫脅迫研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)溫度脅迫后6 h其血液LZM活性急劇升高，之后維持在較高水平。而對(duì)草魚Ctenopharyngodon idella開(kāi)展的重金屬[22]和農(nóng)藥[25]脅迫研究發(fā)現(xiàn)，低濃度的有毒物質(zhì)暴露能夠顯著提高草魚血清LZM的活性。因此，魚類血清LZM活性不但是衡量機(jī)體免疫狀態(tài)的指標(biāo)之一，還是衡量養(yǎng)殖環(huán)境好壞的重要指標(biāo)。與SOD和CAT類似，大黃魚隨著標(biāo)記操作后暫養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，大黃魚血清LZM活性開(kāi)始緩慢下降并逐漸恢復(fù)到正常水平（圖3）。該結(jié)果提示，在LZM以及其他免疫因子的作用下，標(biāo)記操作對(duì)大黃魚產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)等影響隨著時(shí)間的推延開(kāi)始逐漸減弱并恢復(fù)至正常水平。

3.3 金屬線碼標(biāo)記操作對(duì)大黃魚血液磷酸酶ACP和AKP活性的影響

與LZM一樣，ACP和AKP也是溶酶體酶的重要組成部分，在非特異性免疫中發(fā)揮重要的作用，是衡量機(jī)體免疫機(jī)能和健康狀況的重要指標(biāo)[17]。ACP和AKP參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，將代謝產(chǎn)物水解成磷酸和乙醇，然后將水解生成的小分子物質(zhì)排出體外[17]。另外，AKP還是血細(xì)胞溶酶體的特征酶，會(huì)對(duì)異物產(chǎn)生水解破壞作用[26]。本研究的結(jié)果表明，標(biāo)記操作脅迫后，大黃魚血清ACP和AKP活性同樣在短時(shí)間內(nèi)迅速升高，6 h時(shí)活性顯著高于對(duì)照組，并在12 h時(shí)活性達(dá)到最高（圖4和圖5）這可能是由于金屬線碼標(biāo)記引起大黃魚產(chǎn)生創(chuàng)傷應(yīng)激和局部炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)大黃魚血清ACP和AKP活性應(yīng)激性升高，從而參與非特異性免疫、排異反應(yīng)等生理過(guò)程，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，封青川等人的研究結(jié)果表明，大鼠肝臟部分切除能夠引起肝臟ACP和AKP活性顯著升高[27]。而葛明峰等人通過(guò)對(duì)大黃魚開(kāi)展致病弧菌感染研究發(fā)現(xiàn)，弧菌感染大黃魚也出現(xiàn)了血清ACP和AKP活性升高的現(xiàn)象[28]。另外，一些有毒有害物質(zhì)的脅迫也能誘導(dǎo)魚體內(nèi)ACP和AKP活性的升高。例如，鯉魚Cyprinus carpio經(jīng)不同濃度的三聚氰胺脅迫后，其體內(nèi)的ACP和AKP活性均出現(xiàn)了顯著的升高[29]。恩諾沙星可以使紅笛鯛Lutjanus sanguineus血清AKP活性先升高后降低[30]。與其他酶的活性變化相類似，大黃魚隨著金屬線碼標(biāo)記后暫養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，大黃魚血清ACP和AKP活性也開(kāi)始緩慢下降并逐漸恢復(fù)到正常水平（圖4和圖5）。該結(jié)果提示，隨著標(biāo)記時(shí)間的延長(zhǎng)，金屬線碼標(biāo)記操作對(duì)大黃魚產(chǎn)生的影響開(kāi)始逐漸減弱并恢復(fù)至正常水平，同時(shí)也說(shuō)明金屬線碼標(biāo)記本身對(duì)魚體造成創(chuàng)傷較小，魚體完全可以通過(guò)自身的免疫調(diào)節(jié)在短期內(nèi)恢復(fù)。

4 結(jié)論

金屬線碼標(biāo)記操作會(huì)使大黃魚產(chǎn)生一定的創(chuàng)傷應(yīng)激、免疫反應(yīng)及操作脅迫，但隨著標(biāo)記操作后暫養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，其對(duì)大黃魚產(chǎn)生的影響會(huì)快速減弱，至3 d時(shí)其影響已基本消失。因此，建議應(yīng)將金屬線碼標(biāo)記操作后的大黃魚至少暫養(yǎng)3 d后再進(jìn)行放流。

[1]HEIDINGER R C,COOK S B.Use of Coded Wire Tags for Marking Fingerling Fishes[J].N Am J Fish Mange,1988,8(2):268-272.

[2]洪波,孫振中.標(biāo)志放流技術(shù)在漁業(yè)中的應(yīng)用現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J].水產(chǎn)科技情報(bào),2006,33(1):73-76.

[3]周永東,徐漢祥,戴小杰,等.幾種標(biāo)志方法在漁業(yè)資源增殖放流中的應(yīng)用效果[J].福建水產(chǎn),2008(1):6-12.

[4]張?zhí)昧?李鐘杰,舒少武.魚類標(biāo)志技術(shù)的研究進(jìn)展[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2003,10(3):246-253.

[5]陳錦淘,戴小杰.魚類標(biāo)志放流技術(shù)的研究現(xiàn)狀[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,14(4):451-456.

[6]徐開(kāi)達(dá),周永東,王偉定,等.舟山海域黑綢標(biāo)志放流試驗(yàn)[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,17(1):93-97.

[7]楊德國(guó),危起樓,王凱,等.人工標(biāo)志放流中華鱘幼魚的降河洄游[J].水生生物學(xué)報(bào),2005,29(1):26-30.

[8]馬曉林,周永東,徐開(kāi)達(dá),等.浙江沿岸大黃魚標(biāo)志放流及回捕率調(diào)查研究[J].浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2016,35(1): 24-29.

[9]丁愛(ài)俠,賀依爾.岱衢族大黃魚放流增殖試驗(yàn)[J].南方水產(chǎn)科學(xué),2011,7(1):73-77.

[10]張輝,姜亞洲,袁興偉,等.大黃魚耳石鍶標(biāo)記研究[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2015,22(6):1 270-1 277.

[11]姚翠鸞,王維娜,王安利.水生動(dòng)物體內(nèi)超氧化物歧化酶的研究進(jìn)展[J].海洋科學(xué),2003,27(10):18-21.

[12]靳曉敏,吳垠,楊松,等.兩種菊酯類農(nóng)藥對(duì)鯉血清CAT和SOD的影響[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2006,25(3):615-618.

[13]LUSHCHAK V I,BAGNYUKOVA T V.Hypoxia induces oxidative stress in tissues of a goby,the rotan Perccottus glenii[J].Comp Biochem Phys B,2007,148(4):390-397.

[14]聶海,黃顯凱,賴西南,等.艙內(nèi)腹部爆炸傷大鼠血清及腸道組織MDA含量和SOD、GSH-Px活力變化及意義[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,30(10):910-913.

[15]魏寧,張步彩,蔡丙嚴(yán),等.采血應(yīng)激對(duì)白羽肉雞血清超氧化物歧化酶活性的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(12): 222-224.

[16]周繼紅,朱佩芳,周寶桐,等.豬鋼珠彈傷后粒細(xì)胞功能和血漿過(guò)氧化脂質(zhì)的變化[J].中華創(chuàng)傷雜志,1992,8(4):254.

[17]王卓,么宗利,林聽(tīng)聽(tīng),等.碳酸鹽堿度對(duì)青海湖裸鯉幼魚肝和腎SOD、ACP和AKP酶活性的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 2013,20(6):1 212-1 218.

[18]陳慶凱.低鹽脅迫對(duì)黃姑魚幼魚血清免疫和抗氧化性能的影響[J].海洋漁業(yè),2014,36(6):516-522.

[19]尹飛,孫鵬,彭士明,等.低鹽度脅迫對(duì)銀鯧幼魚肝臟抗氧化酶、鰓和腎臟ATP酶活力的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2011,22 (4):1 059-1 066.

[20]趙漢取,施沁璇,沈萍萍,等.低濃度Cd2+脅迫對(duì)青魚組織SOD活性和MT誘導(dǎo)的影響[J].水生態(tài)學(xué)雜志,2014,35(2):90-94.

[21]焦銘,孫雪,李筆,等.毒死蜱對(duì)斑馬魚血清CAT和SOD活性的影響[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,26(3):110-111.

[22]陳昌福,羅宇良,蔡冰,等.飼養(yǎng)水溫對(duì)草魚溶菌酶活性的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),1996,3(3):24-30.

[23]王文博,汪建國(guó),李愛(ài)華,等.擁擠脅迫后鯽魚血液皮質(zhì)醇和溶菌酶水平的變化及對(duì)病原的敏感性[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 2004,11(5):408-412.

[24]孫學(xué)亮,邢克智,陳成勛,等.急性溫度脅迫對(duì)半滑舌鰨血液指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)科學(xué),2010,29(7):387-392.

[25]武煥陽(yáng),許莉佳,靳濤,等.硫丹對(duì)草魚溶菌酶及過(guò)氧化氫酶活性的影響[J].水產(chǎn)科學(xué),2012,31(6):346-349.

[26]張輝,張海蓮.堿性磷酸酶在水產(chǎn)動(dòng)物中的作用[J].河北漁業(yè),2003(5):12-13.

[27]封青川,盧愛(ài)靈,李庚午,等.連續(xù)4次（每次間隔36 h）部分肝切除對(duì)大鼠肝ACP、AKP、HSC70/HSP68和PCNA的影響[J].動(dòng)物學(xué)報(bào),2001,47(專刊):190-198.

[28]葛明峰,李思源,王國(guó)良,等.3種致病弧菌感染對(duì)大黃魚7種酶活性的影響[J].海洋學(xué)研究,2012,30(2):74-80.

[29]吳紅松.三聚氰胺對(duì)鯉魚ACP、AKP、AST和LDH酶活性的影響[J].毒理學(xué)雜志,2014,28(4):301-303.

[30]張麗敏,吳灶和,簡(jiǎn)紀(jì)常,等.恩諾沙星對(duì)紅笛鯛血清中堿性磷酸酶活力、抗體IgM含量、溶菌酶含量及其抗菌能力的影響[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖,2009,30(4):1-7.

The Effects of Coded Wire Tagging on Activities of Five Serum Enzymes of Large Yellow Croaker

HUANG Jian-hua,SHEN Bin,HUANG Xiao-ting,et al
(National Engineering Research Center of Marine Facilities Aquaculture,Zhejiang Ocean University,Zhoushan316022,China)

The coded wire tag is so tiny that it has little influence on tagged fish’s survival,growth and development.Besides,given high retention rate and great coding capability,it contributes to studying each individual and tagging on a large scale as well as detecting easily.Thus there is a broad application prospect of CWT.In this study,the Chrome plated wire(3±0.05 mm long,0.57±0.02 mm in diameter)was injected into the back muscle of large yellow croaker to mimic the coded wire tagging.The activities of serum enzymes involved in antioxidation[Superoxide Dismutase(SOD)and Catalase(CAT)]and innate immunity[Acid phosphatase (ACP),alkaline phosphatase(AKP)and Lysozyme(LZM)]were measured to evaluate the stress reaction of coded wire tagging to large yellow croaker.Our results showed that the activities of serum SOD,CAT,LZM,ACPand AKP are all increased first and then reduced and gradually returned to levels of control group.The activity of SOD was significantly higher than the control at 12 h after coded wire tagging.While the activities of CAT, ACP,AKP and LZM were all significantly higher than the control at both 6 h and 12 h after tagging.At 24 h after tagging,the activities of five enzymes were all reduced and showed no significant difference to control group.At 3 d after tagging,the activities of five enzymes were all returned to levels of control group.Such results indicate that,in the early stage,the stress of coded wire tagging could cause slight effects to the antioxidation and innate immunity of large yellow croaker.However,these effects were gradually weakened as time goes on,then almost completely disappeared at 3 d after coded wire tagging.Thus,we suggest that the coded wire tagged large yellow croaker species should be domesticated for at least three days before releasing.

coded wire tag;large yellow croaker;antioxidation;immunity;enzymatic activity

S917.4

A

1008－830X(2016)06－0483－06

2016-10-20

國(guó)家國(guó)際科技合作專項(xiàng)（L2015RR0104）；國(guó)家海洋局海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201405014）

黃建華（1989-），男，安徽安慶人，碩士研究生，研究方向：大黃魚標(biāo)記技術(shù).E-mail:1099676512@qq.com

朱愛(ài)意，教授.E-mail:zay008@163.com