γ干擾素誘導蛋白-10在強直性脊柱炎患者血清中的表達及其臨床意義

楊　彪， 王　瑤， 趙曉光， 王　磊

(1西安醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院骨科，西安　710077； 2西安醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科；*通訊作者，E-mail:95244556@qq.com)

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γ干擾素誘導蛋白-10在強直性脊柱炎患者血清中的表達及其臨床意義

楊彪1， 王瑤2*， 趙曉光1， 王磊1

(1西安醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院骨科，西安710077；2西安醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科；*通訊作者，E-mail:95244556@qq.com)

摘要：目的 檢測強直性脊柱炎(AS)患者血清中γ干擾素誘導蛋白-10(IP-10)的表達水平，分析IP-10與疾病的關(guān)系，評價其在AS疾病活動中的臨床意義。方法選取AS活動期患者34例、AS穩(wěn)定期患者24例及體檢健康者46例作為研究對象，采用ELISA法檢測血清中IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平，分析血清IP-10水平與AS各臨床和實驗室指標的相關(guān)性。結(jié)果AS活動期組及穩(wěn)定期組患者血清IP-10含量水平均顯著高于健康對照組(P<0.05)；IP-10在AS活動期組含量水平高于穩(wěn)定期組(P<0.05)；兩組AS患者血清IL-17、IL-23及TNF-α含量水平均高于健康對照組(P<0.05)；IL-17和TNF-α在AS活動期組含量水平高于穩(wěn)定期組(P<0.05)。相關(guān)性分析表明，AS患者中IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分呈正相關(guān)。結(jié)論血清中IP-10水平可能是AS發(fā)病過程中重要的免疫學標志，檢測IP-10有助于對AS的診斷和病情的評估。

關(guān)鍵詞：γ干擾素誘導蛋白-10；強直性脊柱炎；細胞因子

強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一種與遺傳相關(guān)的自身免疫性疾病[1]，主要侵犯骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織及外周關(guān)節(jié)，致殘率高。AS通常在青壯年發(fā)病，目前病因尚未完全闡明，多數(shù)研究顯示其發(fā)病可能與遺傳、感染及免疫環(huán)境等因素有關(guān)[2]。

γ干擾素誘導蛋白-10(interferon-γ-inducible protein 10,IP-10)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種在誘導白細胞遷移至炎癥部位的過程中扮演重要角色的趨化因子。已有研究證實IP-10通過促進CD4+T細胞和F4/80+巨噬細胞的遷移及上調(diào)滑膜CD4+T細胞核因子-κB受體活化因子配體表達等多種方式引發(fā)骨質(zhì)破壞，是風濕及類風濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、幼兒特發(fā)性關(guān)節(jié)炎等骨關(guān)節(jié)炎癥性疾病的重要發(fā)病因素[3-5]。本文以AS患者為研究對象，以健康人作為對照，檢測血清中IP-10含量，結(jié)合IL-17、IL-23和TNF-α的分泌水平，探討IP-10與IL-17、IL-23和TNF-α分泌模式在AS患者致病過程中發(fā)生的變化，為進一步了解IP-10的致病機制提供資料。

1材料與方法

1.1研究對象

研究對象為2014-03～2015-12在我院門診或收治住院中符合2010年中華醫(yī)學會風濕病分會制定的《強直性脊柱炎診斷及治療指南》[6]中疾病診斷標準的患者58例，按照強制性脊柱炎疾病活動指數(shù)(bath ankylosing spondylitis disease activity index,BASDAI)計分方法進行評分，將其分為兩組：活動期組34例(定義為BASDAI≥4分)，穩(wěn)定期組24例(定義為BASDAI<4分)。46例本院體檢健康者入選標準：肝腎功能、血脂、血常規(guī)、尿常規(guī)、影像學檢查均正常，與AS組的性別、年齡相匹配。所有參與研究的AS患者及健康對照組均排除:①處于急性或慢性感染期；②患有嚴重心、肝、腎及血液系統(tǒng)疾??；③合并其他診斷明確的自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、嚴重性腸病、銀屑病、葡萄膜炎等；④患有糖尿病、甲狀腺等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾??；⑤腫瘤患者。

1.2研究方法

所有研究對象均在臨床干預(yù)治療前清晨空腹采集靜脈血，送我院檢驗科，常規(guī)檢查血分析、血沉、C反應(yīng)蛋白、類風濕因子、HLA-B27等相關(guān)項目，同時另采集靜脈血3 ml，3 500 r/min離心10 min，取血清于-80 ℃冷凍保存待測。采用雙抗體夾心ELISA法，按照試劑盒說明書的操作要求檢測外周血清中IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平。

對所有研究對象進行詳細的審查、登記，填寫統(tǒng)一編制的表格，內(nèi)容包括一般情況(如：姓名、性別、年齡、身高、體重、BMI等)及檢測各項指標及結(jié)果，數(shù)據(jù)編入計算機進行統(tǒng)計分析。實驗所用人IP-10 ELISA監(jiān)測試劑盒購自美國Biosource公司，IL-17及IL-23 ELISA監(jiān)測試劑盒購自美國B&D公司,TNF-α ELISA監(jiān)測試劑盒購自上海北諾公司。

1.3統(tǒng)計學處理

2結(jié)果

2.1一般資料比較

AS活動期組、AS穩(wěn)定期組及健康對照組在性別、年齡、BMI和類風濕因子上的差異無統(tǒng)計學意義，在白細胞計數(shù)(WBC)、血小板計數(shù)(PLT)、血沉(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、HLA-B27陽性率和BASDAI評分上差異有統(tǒng)計學意義，且AS活動期組的PLT、CRP和BASDAI評分均顯著高于AS穩(wěn)定期組(P<0.05，見表1)。

表1AS患者與健康對照一般資料比較

Table 1Comparison of general datum between AS patients and healthy controls

組別n男性[例(%)]年齡(歲)BMI(kg/m2)白細胞計數(shù)(×109/L)血小板計數(shù)(×109/L)類風濕因子(IU/ml)血沉(mm/h)C反應(yīng)蛋白(mg/L)HLA-B27陽性率(%)BASDAI評分(分)AS活動期組3428(82.4)29.0±7.323.0±5.19.6±5.1*303.0±116.2*6.8±2.130.9±14.2*19.3±14.1*91.2*6.1±1.1*AS穩(wěn)定期組2419(79.2)28.8±11.724.7±4.89.0±4.7*241.6±103.8*#7.1±1.226.2±14.7*11.7±6.1*#87.5*2.4±0.7*#健康對照組4637(80.4)30.1±9.224.8±4.96.8±1.7184.8±72.17.0±2.87.3±4.62.1±1.42.20.6±0.8

與健康對照組比較，*P<0.05；與AS活動組比較，#P<0.05

2.2血清IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α含量檢測結(jié)果比較

AS活動期組及穩(wěn)定期組患者血清IP-10含量水平均顯著高于健康對照組(F分別為88.68，12.81，均P<0.05)；IP-10在AS活動期組含量水平高于穩(wěn)定期組(F=26.80，P<0.05)。兩組AS患者血清IL-17、IL-23及TNF-α含量水平均高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(F分別為99.49，59.19，15.96，均P<0.05)；IL-17和TNF-α在AS活動期組含量水平高于穩(wěn)定期組(F分別為12.14，5.24，均P<0.05,見表2)。

2.3AS患者IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、WBC、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分間相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，AS患者中IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分呈正相關(guān)，與WBC無相關(guān)性(見表3)。

表2三組血清IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平比較(pg/ml)

Table 2Serum IP-10,IL-17,IL-23 and TNF-α levels in three groups(pg/ml)

組別nIP-10IL-17IL-23TNF-αAS活動期組34256.32±119.53*39.50±12.60*46.44±17.14*17.14±7.58*AS穩(wěn)定期組24120.71±58.70*#28.92±9.39*#39.16±13.72*13.08±5.06*#健康對照組4669.78±54.589.37±6.9415.85±8.528.93±6.17

與健康對照組比較，*P<0.05；與AS活動組比較，#P<0.05

表3AS患者IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、WBC、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分間相關(guān)性分析

Table 3Correlation analysis between IP-10 and IL-17,IL-23,TNF-α,WBC,PLT,ESR,CRP,BASDAI score

檢驗項目因子rPIL-170.53<0.01IL-230.58<0.01TNF-α0.39<0.01WBC0.120.23PLT0.29<0.01ESR0.55<0.01CRP0.55<0.01BASDAI0.70<0.01

3討論

AS是一種多因素共同參與的慢性炎癥性疾病，發(fā)病年齡輕，致殘率高，嚴重影響病人的生活質(zhì)量。雖然近年來對AS的診斷與治療均已取得了長足的進步，但目前仍然無法完全闡明該病發(fā)生的確切病因，無法找到根治性的治療方法。

γ干擾素誘導蛋白-10(IP-10)是近年來發(fā)現(xiàn)的半胱氨酸-X-半胱氨酸(CXC)類谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(Glu-Leu-Arg,ELR)亞族趨化因子,又名CXC趨化因子配體10(CXCL10)。是由γ干擾素所誘導產(chǎn)生的一類可以趨化淋巴細胞的蛋白質(zhì)，主要表達在活化的T淋巴細胞上，特別是Th1型T淋巴細胞，IP-10與之結(jié)合后能夠誘導Th1細胞活化并定向遷移至特定的組織中從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。此外IP-10還具有介導細胞凋亡、調(diào)節(jié)靶細胞生長和增殖、調(diào)節(jié)血管生成等功能。近年來，已有研究證實IP-10參與多種器官特異性自身免疫性疾病(如1型糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、Graves病等)和系統(tǒng)性自身免疫性疾病(如類風濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化等)的發(fā)病過程[7]，同時也是風濕、類風濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、幼兒特發(fā)性關(guān)節(jié)炎等骨關(guān)節(jié)炎癥性疾病的重要發(fā)病因素[3-5]。

通過本研究發(fā)現(xiàn)，AS患者血清中的IP-10含量明顯高于健康對照組(P<0.05)，說明AS患者存在IP-10表達的增加。同時，AS活動期患者血清IP-10水平高于穩(wěn)定期組，提示IP-10水平與AS病程分期密切相關(guān)。進一步分析顯示，AS患者外周血中IL-17、IL-23的水平明顯高于健康對照組(P<0.05)，并且IL-17與IL-23的表達呈正相關(guān)，這與近年來內(nèi)外相關(guān)研究的結(jié)果相一致[8-13]。而TNF-α通過激活多形核細胞，刺激前列腺素產(chǎn)生，抑制堿性磷酸酶和膠原的合成及促進軟骨細胞分泌纖維蛋白溶解酶激活劑，促使纖維蛋白酶的合成等多種機制在AS的致病過程中發(fā)揮著重要的作用已經(jīng)成為學者們公認的事實[14-16]。通過相關(guān)性分析，可以看出，AS患者IP-10水平與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分均呈顯著正相關(guān)，而與WBC無相關(guān)性，這些結(jié)果再次提示IP-10在AS的發(fā)生和進展過程中起到了重要的作用，是AS特異性極強的敏感性指標，檢測血清IP-10水平可能有助于對AS疾病活動性的評估。

本研究通過監(jiān)測AS患者及健康人血清中IP-10含量，結(jié)合IL-17、IL-23和TNF-α的分泌水平，探討IP-10與IL-17、IL-23和TNF-α分泌模式在AS患者致病過程中發(fā)生的變化，證實IP-10同IL-17、IL-23及TNF-α均可能為AS發(fā)病過程中重要的免疫學標志，并且在AS發(fā)病的過程中發(fā)揮著重要的作用。

此外，研究IP-10在AS患者體內(nèi)血清中的表達及臨床意義，不僅有助于進一步了解AS的發(fā)病機制，還能為AS的臨床治療提供重要實驗室依據(jù)。已有研究表明，應(yīng)用CXCR3小分子拮抗劑AMG487能顯著降低滑膜細胞的侵襲性，降低滑液中基質(zhì)金屬蛋白酶水平，阻止IP-10-CXCR3介導的滑膜細胞的激活，從而減少肌動蛋白細胞骨架重組及板狀偽足的形成[17]。而應(yīng)用抗IP-10的單克隆抗體治療對甲氨蝶呤耐藥的RA患者有顯著的療效[18]。因此，針對IP-10的靶點治療有望成為AS治療的一種新的方向。

由于本研究的樣本量相對較少，研究方法僅局限于ELISA法定量檢測，干擾因素相對較多，可能存在系統(tǒng)誤差等問題，IP-10的臨床意義尚需更大的樣本、多中心研究進一步驗證。但我們有理由相信，IP-10作為一種新型的標志物，在不遠的將來一定能夠在AS等免疫相關(guān)疾病的早期篩查、輔助診斷、監(jiān)測病情、療效評價及判斷預(yù)后上得到廣泛的應(yīng)用。

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Expression of interferon-γ-inducible protein-10 in serum of patients with ankylosing spondylitis and its clinical significance

YANG Biao1, WANG Yao2*, ZHAO Xiaoguang1, WANG Lei1

(1DepartmentofOrthopedics,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity,Xi’an710077,China;2DepartmentofLaboratoryMedicine,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity;*Correspondingauthor，E-mail: 95244556@qq.com)

Abstract：ObjectiveTo investigate the levels of serum interferon-γ-inducible protein 10(IP-10) in patients with ankylosing spondylitis(AS)，and evaluate its clinical significance in the disease activity of AS.MethodsThe levels of IP-10,IL-17,IL-23 and TNF-α in serum from 34 patients with active ankylosing spondylitis,24 patients at stable phase and 46 healthy controls were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA). The correlation of serum IP-10 level with AS-associated clinical and laboratorial indexes were analyzed. ResultsThe levels of serum IP-10 in active and stable phase AS patients were significantly higher than that of healthy controls(P<0.05),and the serum IP-10 level in active AS patients was significantly higher than that in inactive AS patients(P<0.05). The levels of serum IL-17,IL-23 and TNF-α in AS patients were higher than that of healthy controls(P<0.05),and the levels of serum IL-17 and TNF-α in active AS patients were significantly higher than those of inactive AS patients(P<0.05). Correlation analysis showed that the level of IP-10 was positively correlated with IL-17,IL-23,TNF-α,PLT,ESR,CRP, BASDAI score in AS patients.ConclusionThe serum IP-10 level may be an important immune marker in the process of AS, and it can be helpful to diagnose and evaluate AS.

Key words:interferon-γ-inducible protein-10；ankylosing spondylitis；cytokines

作者簡介：楊彪，男，1977-03生，碩士，主治醫(yī)師,E-mail:yangbiao1977@126.com

收稿日期：2016-03-06

中圖分類號：R593.23

文獻標志碼：A

文章編號：1007-6611(2016)05-0459-04

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.05.014