山茱萸配方顆粒的質(zhì)量研究

鄭峙云，張茂婷，蔣曉靜，陳培勝，王舉濤，桂雙英,3,4

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥　230012；2.安徽濟(jì)人藥業(yè)有限公司，安徽 亳州　236000；3.安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院藥物制劑研究所，安徽 合肥　230012；4.大別山區(qū)農(nóng)林特色產(chǎn)業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽 合肥　230012)

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山茱萸配方顆粒的質(zhì)量研究

鄭峙云1，張茂婷1，蔣曉靜1，陳培勝2，王舉濤1，桂雙英1,3,4

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥230012；2.安徽濟(jì)人藥業(yè)有限公司，安徽 亳州236000；3.安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院藥物制劑研究所，安徽 合肥230012；4.大別山區(qū)農(nóng)林特色產(chǎn)業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽 合肥230012)

[摘要]目的建立山茱萸配方顆粒的質(zhì)量控制方法。方法采用薄層色譜法對(duì)山茱萸配方顆粒中馬錢苷進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法測(cè)定山茱萸配方顆粒中馬錢苷含量。結(jié)果薄層色譜法能定性檢出馬錢苷，斑點(diǎn)清晰、分離度好；馬錢苷質(zhì)量濃度在5～80 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均加樣回收率為102.12%，RSD為2.46%(n=6)。結(jié)論所建立的方法可行，可用于山茱萸配方顆粒的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞]山茱萸；配方顆粒；馬錢苷；薄層色譜法；高效液相色譜法

山茱萸為山茱萸科植物山茱萸(CornusofficinalisSieb.et Zucc.)的干燥成熟果肉[1]，是40種用量較大的重點(diǎn)中藥材之一?，F(xiàn)代研究表明，山茱萸主要含有環(huán)烯醚萜、鞣質(zhì)、黃酮、有機(jī)酸及其酯類、糖類、氨基酸和揮發(fā)性成分等，具有降血糖、延緩衰老、抗心律失常等藥理作用[2]。

中藥配方顆粒是以中藥飲片為原料，采用現(xiàn)代技術(shù)提取、濃縮、干燥、制粒而成的中藥免煎顆粒[3]。與傳統(tǒng)中藥湯劑相比較，具有質(zhì)量穩(wěn)定、療效可靠、便于生產(chǎn)、服用方便等優(yōu)點(diǎn)[4]。筆者分別采用薄層色譜法、高效液相色譜法對(duì)山茱萸配方顆粒進(jìn)行定性鑒別和含量測(cè)定研究，以期有效控制山茱萸配方顆粒的質(zhì)量。

1材料

1.1儀器JJ200B型分析天平：美國雙杰兄弟江蘇常熟有限公司；DZF-6050型真空干燥箱：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；島津LC-20A高效液相色譜儀(包括SPD-M20A紫外檢測(cè)器、LC-20AB泵、LC-solution色譜工作站)：日本島津；KQ2200超聲波清洗器：江蘇省昆山市超聲儀器有限公司；托盤天平：浙江省慈溪市華徐衡器實(shí)業(yè)有限公司；YP1002電子天平：上海佑科儀器儀表有限公司；SHB-3循環(huán)水式多用真空泵：河南省鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；HH-S2系列恒溫水浴鍋：江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠；WFH-203三用紫外分析儀：上海精科實(shí)業(yè)有限公司。

1.2試藥馬錢苷對(duì)照品：成都瑞芬思生物科技有限公司，純度99.9%，批號(hào) M-010-110311；熊果酸對(duì)照品：成都曼斯特生物科技有限公司，純度99.9%，批號(hào) MUST-13020602；硅膠G薄層板：青島海洋化工廠分廠，規(guī)格100 mm×100 mm；點(diǎn)樣毛細(xì)管：上海長(zhǎng)城科學(xué)儀器商店；10批山茱萸配方顆粒：安徽濟(jì)人藥業(yè)有限公司，批號(hào) 1310081～1310090。

2方法與結(jié)果

2.1薄層色譜鑒別取本品顆粒2 g，加無水乙醇10 mL，超聲處理(功率200 W，頻率40 kHz)15 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取馬錢苷對(duì)照品，加無水乙醇制成1 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照2010年版《中華人民共和國藥典》附錄ⅥB薄層色譜試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸(50∶10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同的紫紅色斑點(diǎn)，見圖1。

注：1～5和7～11為山茱萸配方顆粒；6為馬錢苷對(duì)照品。

圖1山茱萸配方顆粒薄層色譜圖

2.2含水量測(cè)定根據(jù)2010年版《中華人民共和國藥典》一部“顆粒劑”項(xiàng)下水分測(cè)定法(附錄Ⅸ H)，按照山茱萸藥材和飲片水分的第一法測(cè)定。方法如下：取本品2 g，平鋪于干燥至恒質(zhì)量的扁形稱量瓶中，厚度不超過5 mm；疏松供試品不超過10 mm；精密稱定，打開瓶蓋在105 ℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30 min，精密稱定，再在105 ℃干燥1 h，冷卻，稱質(zhì)量，至連續(xù)兩次稱質(zhì)量的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失的質(zhì)量，計(jì)算供試品中含水量，含水量不超過6.0%。結(jié)果見表1。

表1　10批山茱萸配方顆粒水分測(cè)定

2.3含量測(cè)定

2.3.1色譜條件色譜柱：Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(15∶85)，檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；流速1.0 mL/min；柱溫：25 ℃。按馬錢苷峰計(jì)理論板數(shù)應(yīng)不低于3 000。色譜圖見圖2。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備精密移取“2.1”項(xiàng)下馬錢苷對(duì)照品溶液1 mL，加80%甲醇稀釋制得100 μg/mL馬錢苷溶液，即得。

圖2對(duì)照品(A)和供試品(B)的高效液相色譜圖(1.馬錢苷)

2.3.3供試品溶液的制備取本品顆粒約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，精密稱定質(zhì)量，超聲(功率200 W，頻率40 kHz)1 h，放冷，再精密稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4線性關(guān)系考察分別精密吸取馬錢苷對(duì)照品(100 μg/mL)0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL置10 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋定容，配成濃度分別為5、10、20、40、60、80 μg/mL的馬錢苷對(duì)照品系列溶液。取上述對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以馬錢苷濃度(x)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=34 982x+3 552.4，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，馬錢苷在5～80 μg/mL的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5精密度試驗(yàn)精密吸取馬錢苷對(duì)照品溶液(40 μg/mL)10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果RSD=1.34%，說明該方法精密度良好。

2.3.6重復(fù)性試驗(yàn)稱取同一批山茱萸顆粒(批號(hào) 1310088)6份，各0.1 g，精密稱定。按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，依法測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果RSD=1.83%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取山茱萸顆粒(批號(hào) 1310088)0.1 g，精密稱定，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，分別于0、1、2、4、8、12 h進(jìn)樣10 μL，測(cè)定馬錢苷峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果RSD=1.89%，表明12 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.3.8加樣回收率試驗(yàn)稱取已知含量的山茱萸顆粒(批號(hào) 1310088)6份、各0.05 g，精密稱定。分別加入馬錢苷對(duì)照品溶液(100 μg/mL)4 mL，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，分別精密吸取10 μL進(jìn)樣，依法測(cè)定，計(jì)算回收率與RSD，結(jié)果見表2。

表2　山茱萸配方顆粒中馬錢苷

2.3.9樣品測(cè)定取10批山茱萸配方顆粒，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，分別精密吸取10 μL進(jìn)樣，依法測(cè)定并計(jì)算含量，結(jié)果見表3。

表3　山茱萸配方顆粒中馬錢苷含量測(cè)定(n=3)

3討論

筆者通過薄層色譜法對(duì)配方顆粒進(jìn)行定性鑒別，參照2010年版《中華人民共和國藥典》一部“山茱萸”項(xiàng)下方法，可以有效鑒別出配方顆粒中馬錢苷，但未能檢出熊果酸。筆者曾進(jìn)行了多方面的探索研究，包括改變供試品溶液制備方法，如加大溶劑量，改變提取溶劑，延長(zhǎng)提取時(shí)間，增加提取次數(shù)，以及改變展開條件，結(jié)果均未鑒識(shí)出熊果酸。推測(cè)其原因可能在于： 提取過程是一個(gè)熱處理過程，加熱可能使熊果酸成分發(fā)生分解，導(dǎo)致含量很低，低于薄層鑒別的檢測(cè)限，最終無法鑒識(shí)出熊果酸； 熊果酸不溶于水，而配方顆粒的提取溶劑為水，未有效提取出熊果酸。

此外，山茱萸配方顆粒還應(yīng)符合2010年版《中華人民共和國藥典》一部制劑通則顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。在質(zhì)量控制評(píng)價(jià)方面，現(xiàn)行的中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)多采用薄層色譜和對(duì)單一成分進(jìn)行檢測(cè)。中藥是多成分的整體作用，由于中藥配方顆粒已失去飲片的形態(tài)，在質(zhì)量控制上缺少飲片性狀和顯微鑒別的重要指標(biāo)，因此在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定中必須加強(qiáng)專屬性鑒別和整體性質(zhì)量控制[5]。本研究采用高效液相色譜法建立了山茱萸配方顆粒中馬錢苷的測(cè)定方法，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)單，可有效用于山茱萸配方顆粒產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:26-27.

[2]張亞軍,高云艷.山茱萸化學(xué)成分與藥理研究概況[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2002,9(10):81-82.

[3]謝靖屹.中藥配方顆粒特點(diǎn)分析[J].廣州醫(yī)藥,2011,42(2):40-42.

[4]李松林,宋景政,徐宏喜.中藥配方顆粒研究淺析[J].中草藥,2009,40(S1):1-7.

[5]何翊,粟華生,溫慶偉，等.中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究淺析[C].中藥與天然藥高峰論壇暨第十二屆全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會(huì).?？冢褐袊帉W(xué)會(huì)中藥和天然藥專業(yè)委員會(huì),2012:339-343.

A Study of Quality ofFructusCorniFormula Granule

ZHENGZhi-yun1,ZHANGMao-ting1,JIANGXiao-jing1,CHENPei-sheng2,WANGJu-tao1,GUIShuang-ying1,3,4

(1.CollegeofPharmacy,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China; 2.AnhuiJirenPharmaceuticalCorporation,AnhuiBozhou236000,China; 3.InstituteofPharmaceutics,AnhuiAcademyofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China; 4.CollaborativeInnovationCenterofAgri-forestryIndustryinDabieshanArea,AnhuiHefei230012,China)

[Abstract]ObjectiveTo establish a method for quality control of Fructus Corni Formula Granule. MethodsThin-layer chromatography (TLC) and high-performance liquid chromatography were used for qualitative identification and content determination of loganin in Fructus Corni Formula Granule, respectively. ResultsLoganin could be detected by TLC. On TLC, the spots of loganin were clear and well separated. The concentration of loganin showed a good linear relationship with peak area within 5-80 μg/mL (r=0.999 9). The average recovery rate was 102.12%, and the relative standard deviation was 2.46% (n=6). ConclusionThe method is feasible for quality control of Fructus Corni Formula Granule.

[Key words]Fructus Corni; Formula Granule; Loganin; Thin-layer chromatography; High-performance liquid chromatography

(收稿日期：2015-07-23；編輯：張倩)

[中圖分類號(hào)]R283[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2016.02.027

通信作者：桂雙英，guishy0520@126.com

作者簡(jiǎn)介：鄭峙云(1970-)，女，實(shí)驗(yàn)師

基金項(xiàng)目：安徽省科技攻關(guān)項(xiàng)目(15011d04005)