不同產(chǎn)地柴胡藥材質(zhì)量的對(duì)比研究

李衛(wèi)紅，趙紅革，鄭津英

（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006）

中藥制劑工程與技術(shù)Engineering and Technology of Chinese Materia Medica Preparation

不同產(chǎn)地柴胡藥材質(zhì)量的對(duì)比研究

李衛(wèi)紅，趙紅革，鄭津英

（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006）

中醫(yī)藥學(xué)在世界上首先發(fā)現(xiàn)了中藥并首創(chuàng)了方劑，醫(yī)方是“除疾保性命之術(shù)”，而劑則有“調(diào)百藥齊，和之所宜”之功。采用現(xiàn)代藥物制劑技術(shù)重新研究并升華古典方劑之術(shù)，開(kāi)創(chuàng)未來(lái)藥物制劑技術(shù)和新劑型藥物研究的全新思維和方向。

目的：通過(guò)測(cè)定灰分、揮發(fā)油含量以及柴胡皂苷a的含量、薄層色譜鑒別等，對(duì)來(lái)自湖北、河南、山西、遼寧、內(nèi)蒙古5個(gè)產(chǎn)地的柴胡飲片做質(zhì)量上的對(duì)比。方法：灼燒法測(cè)定總灰分及酸不溶性灰分；水蒸氣蒸餾法測(cè)定揮發(fā)油含量；薄層色譜法進(jìn)行鑒別；高效液相色譜法測(cè)定柴胡皂苷a的含量。結(jié)果：5個(gè)產(chǎn)地柴胡飲片中總灰分的含量分別為9.97%、10.22%、6.9%、9.03%、10.37%，酸不溶性灰分的含量分別分別為3.66%、3.96%、2.24%、3.59%、4.91%，揮發(fā)油含量分別為0.043%、0.048%、0.051%、0.056%、0.037%。通過(guò)薄層色譜鑒別，5個(gè)產(chǎn)地柴胡飲片均與柴胡皂苷a、d、對(duì)照藥材在同一位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，說(shuō)明均含有柴胡皂苷a、d，與對(duì)照藥材所含成分相同。HPLC法測(cè)定柴胡皂苷a的含量分別為0.487%、0.081%、0.381%、0.4395、0.168%。結(jié)論：通過(guò)對(duì)比性研究，產(chǎn)自內(nèi)蒙古的柴胡在質(zhì)量上要好于其他產(chǎn)地。

柴胡飲片；總灰分；揮發(fā)油；柴胡皂苷a；質(zhì)量

中藥是中華民族的瑰寶，有幾千年的歷史。中藥材的質(zhì)量是整個(gè)中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的基石，中藥材的質(zhì)量如何，直接影響中醫(yī)中藥的臨床療效，繼而關(guān)系到中醫(yī)中藥的發(fā)展乃至興亡，中藥材及其飲片質(zhì)量可謂既關(guān)乎患者的個(gè)體生命安危又牽動(dòng)著中醫(yī)藥事業(yè)的命脈。近年來(lái)，由于市場(chǎng)的無(wú)序競(jìng)爭(zhēng)，假藥材、偽品種沖擊質(zhì)好價(jià)高的道地藥材，使得中藥材及其飲片質(zhì)量現(xiàn)況不容樂(lè)觀，質(zhì)量失控現(xiàn)象已十分嚴(yán)重［1］。本文以柴胡為例，對(duì)山西、河南、內(nèi)蒙古、湖北、東北等5個(gè)產(chǎn)地的柴胡藥材進(jìn)行了質(zhì)量對(duì)比研究。柴胡為傘形科植物柴胡或狹葉柴胡的干燥根，具有和解表里、疏肝、升陽(yáng)之功效，主治感冒發(fā)熱、瘧疾、胸脹腹痛等病癥。其主含皂苷、揮發(fā)油及多糖類，柴胡皂苷是柴胡檢測(cè)柴胡皂苷a的有效成分之一，以柴胡皂苷a、d含量較高。本文通過(guò)中灰分、酸不溶性灰分、揮發(fā)油含量，對(duì)5個(gè)產(chǎn)地的柴胡藥材做一系統(tǒng)研究，為中藥制劑的藥材選擇提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀：LC-2010A HT安捷倫；紫外檢測(cè)器：Waters2487；色譜柱：ODS C1810μm（4.6 mm×200mm）；超聲波清洗器：KQ-250E，江蘇昆山市超聲儀器有限公司；電子分析天平：普利賽斯瑞士；高速多功能粉碎機(jī)：SL-1000A浙江永康市松青五金廠；馬弗爐：SY-4-10，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；水浴鍋：HH-S4，北京科偉永興儀器有限公司；揮發(fā)油提取器。

1.2 試劑與藥材

柴胡皂苷a對(duì)照品：批號(hào)110777-200406，中國(guó)藥品生物制品鑒定所；柴胡皂苷d對(duì)照品：批號(hào)110778-201208，中國(guó)食品藥品檢定研究院；柴胡對(duì)照藥材：120992-200504，中國(guó)藥品生物制品鑒定所；內(nèi)蒙古、遼寧、河南、湖北產(chǎn)柴胡藥材（安徽亳州），山西柴胡藥材（山西省藥材公司）。

稀鹽酸、硝酸銀試劑、無(wú)灰濾紙，乙腈、甲醇（色譜純），乙酸乙酯、乙醇（均為分析純），對(duì)二甲氨基苯甲醛、硫酸、濃氨試液。

2 方法與結(jié)果

2.1 柴胡灰分測(cè)定

2.1.1 總灰分的測(cè)定 將柴胡飲片置粉碎機(jī)粉碎，使能通過(guò)二號(hào)篩，混合均勻，取柴胡粉末3 g，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01 g），緩緩升溫、熾熱，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量（%）。每個(gè)樣品平行做2份，結(jié)果取其平均值。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 灰分測(cè)定結(jié)果

2.1.2 酸不溶性灰分的測(cè)定 取上項(xiàng)所得的灰分，在坩鍋中小心加入稀鹽酸約10 mL，用表面皿覆蓋坩鍋，置水浴上加熱10 min，表面皿用熱水5 mL沖洗，洗液并入坩堝中，用無(wú)灰濾紙濾過(guò)，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)（滴加硝酸銀試液，不顯白色沉淀）為止。濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中酸不溶性灰分的含量（%）。每個(gè)樣品平行做2份，結(jié)果取其平均值。

2.1.3 薄層鑒別 取本品粉末0.5 g，置50mL燒杯中，加甲醇20 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，濾液濃縮至5mL，作為供試品溶液。另取柴胡對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取柴胡皂苷a對(duì)照品、柴胡皂苷d對(duì)照品，加甲醇制成每1mL各含0.5mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8∶2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別至日光燈及紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 柴胡皂苷色譜圖

圖2 紫外燈下柴胡皂苷色譜圖

2.2 揮發(fā)油的提取

稱取500 g柴胡藥材粉末，置揮發(fā)油提取器中，加入一定量的水，加熱提取4 h，讀取揮發(fā)油毫升數(shù)。

2.3 柴胡皂苷a的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。理論板數(shù)按柴胡皂苷a峰計(jì)算應(yīng)不低于10 000。

表2 HPLC測(cè)定柴胡皂苷a含量的流動(dòng)相梯度洗脫表

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取柴胡皂苷a對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，搖勻，備用。

2.3.3 供試品溶液的制備 取柴胡粉末（過(guò)四號(hào)篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25mL，密塞，30℃水溫超聲處理（功率200W，頻率40 kHz）30 min，濾過(guò)，用甲醇20 mL分2次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取對(duì)照品溶液5μL、10μL、20μL、30μL、40μL，按2.3.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以峰面積對(duì)進(jìn)樣質(zhì)量進(jìn)行回歸，得柴胡皂苷a線性回歸方程：y=357 790x+10 908，R2=1，線性范圍為2.080 0μg～16.640 0μg。結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 線性關(guān)系圖

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按1.2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20μL。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一產(chǎn)地柴胡藥材粉末6份，各約0.5 g，按2.3.3、2.3.1項(xiàng)下進(jìn)行制備及色譜條件進(jìn)行分析，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，在0 h、2 h、4 h、6 h各進(jìn)樣1次，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.8 回收率實(shí)驗(yàn) 取6份已知含量的柴胡藥材粉末約0.25 g，分別加入柴胡皂苷a對(duì)照品約1.2 mg，按2.3.3 項(xiàng)進(jìn)行制備以及2.3.1色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算樣品中柴胡皂苷a的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表7。

Y＝（C-A）/B×100%，其中，Y為回收率，A為樣品中所含被測(cè)成分量，B為加入對(duì)照品量，C為實(shí)測(cè)值。

表7 回收率試驗(yàn)結(jié)果

方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，該含量測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠，能有效控制柴胡藥材質(zhì)量。

2.3.9 含量測(cè)定 按2.3.1項(xiàng)下色譜條件及方法進(jìn)行制備，供試品溶液進(jìn)樣量為20μL，由回歸方程計(jì)算出不同產(chǎn)地柴胡飲片中柴胡皂苷a的含量。結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 柴胡皂苷a揮發(fā)油及含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

總灰分和酸不溶性灰分的檢查在中藥材藥品標(biāo)準(zhǔn)中起著至關(guān)重要的作用，土壤污染、農(nóng)藥殘留等因素都能導(dǎo)致灰分含量升高，甚至超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。由于樣本中山西產(chǎn)柴胡藥材來(lái)自于野生，其灰分值在正常范圍內(nèi)，而其他5個(gè)產(chǎn)地的藥材的灰分含量均超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。由薄層色譜圖可以看出，5個(gè)產(chǎn)地柴胡飲片均與柴胡皂苷a、d、對(duì)照藥材在同一位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，說(shuō)明均含有柴胡皂苷a、d，以及與對(duì)照藥材所含成分相同。

線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性以及回收率結(jié)果顯示，柴胡皂苷a的含量測(cè)定方法可行。受地域影響，種植藥材當(dāng)?shù)氐沫h(huán)境不同，柴胡皂苷a的含量存在較大差別。通過(guò)對(duì)柴胡藥材的灰分、揮發(fā)油含量及柴胡皂苷a的含量做一系統(tǒng)比較，其結(jié)果對(duì)柴胡制劑研究時(shí)科學(xué)選擇藥材提供依據(jù)。

由于受檢測(cè)條件所限制，柴胡皂苷d的含量未做檢測(cè)，對(duì)柴胡藥材質(zhì)量的研究結(jié)果造成一定影響。

［1］張慧燕，麻廣霖.淺談提高中藥材及其飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)保證中藥質(zhì)量的意義［J］.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007，8（4）：4-6.

（編輯：翟春濤）

Com parative study on the quality of radix bupleuri from different origin

LiWeihong，Zhao Hongge，Zheng Jinying
（Shanxi Insititute of Medicine and Life Science，Taiyuan Shanxi030006）

Objective：The quality of radix bupleuri from Hubei，Henan，Shanxi，Liaoning and Inner Mongolia was compared by the determination of ash and the content of volatile oil and saikoside a and TLC identification，and so on. Method：The determination of total ash and acid insoluble ash were determined by burningmethod and volatile oil content was determined by water vapor distillation method.The content of saikosaponin a and d was determined by HPLC. Results：The total ash content were 9.97%，10.22%，6.9%，9.03%，10.37%and Acid insoluble ash content were 3.66%，3.96%，2.24%，3.59%，4.91%.Volatile oil contentwere 0.043%，0.048%，0.051%，0.056%，0.037%.By TLC，Radix Bupleuri of five areas，saikosaponin a and d and the control herbs showed the same color spots in the same position，which shows contain saikosaponin a and d in radix bupleuri of five areas，the same as the control herbs in contained ingredients.The contents of saikosaponin by HPLC were 0.487%，0.081%，0.381%，0.4395，0.168%.Conclusion：Through comparative study，radix bupleuri produced in Inner Mongolia is better than any other areas in quality.

radix bupleuri；total ash；volatile oil；saikosaponin a；quality

R285

A

1671-0258（2016）01-0028-04

山西省科技廳攻關(guān)項(xiàng)目（2007031088-3）

李衛(wèi)紅，高級(jí)工程師，E-mail：2388771265@qq.com