不同炮制方法對川楝子中川楝素和異川楝素含量的影響

郭 燦，曾 莉

成都市第五人民醫(yī)院，四川 成都 611130

不同炮制方法對川楝子中川楝素和異川楝素含量的影響

郭 燦，曾 莉

成都市第五人民醫(yī)院，四川 成都 611130

目的：通過HPLC法比較川楝子不同炮制品中川楝素和異川楝素含量的差異。方法：采用HPLC法對川楝子生品及各炮制品，以川楝素和異川楝素作為指標，進行含量測定。色譜條件：色譜柱(4.6 mm× 250 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(30∶70)；檢測波長210 nm；柱溫35℃；進樣量10 μL；流速1.0 mL/min。結(jié)果：炒品相對其他炮制品種而言，川楝素和異川楝素含量較高。結(jié)論：不同炮制方法中，炒品中川楝素和異川楝素含量下降幅度最小。

川楝子；川楝素；異川楝素；炮制

川楝子，又名楝實、金鈴子，為楝科Meliaceae植物川楝Melia toosendan的干燥果實，冬季果實成熟時采收，是常用的理氣止痛藥，主要產(chǎn)地為四川、湖北、湖南、貴州等地，因為入藥以四川產(chǎn)的藥材為道地藥材，因此稱為川楝子?！侗静菥V目》記載該藥入肝、胃、小腸經(jīng)，性味苦寒，有小毒，并有酸味。《中國藥典》中記載其具有疏肝泄熱、行氣止痛、殺蟲之功效。用于肝郁化火，胸脅、脘腹痛、蟲積腹痛、疝氣痛［1］。藥典收錄的炮制品只有川楝子和炒川楝子兩種。生川楝子有毒，傳統(tǒng)入藥常需要炮制，炮制后能降低川楝子毒性，而且能增強川楝子的理氣止痛作用［2］。傳統(tǒng)的炮制方法有炒焦法、鹽制法、醋制法等，因此對川楝子生品、炒品、鹽炙品、醋炙品進行含量測定，分析比較不同炮制方法對川楝子中川楝素和異川楝素含量影響的程度。川楝子中川楝素的結(jié)構(gòu)是半縮醛結(jié)構(gòu)，以互變異構(gòu)體存在，并不斷轉(zhuǎn)換，所以要以兩個峰面積之和計算［3-5］。近年來，對于川楝子的研究主要側(cè)重于三萜類成分川楝素的藥理作用及其配伍減毒［6-8］方面，以及異川楝素的殺蟲作用。

1 材料

1.1 儀器日本島津高效液相色譜(HPLC)儀：包括LC-20AT高壓輸液泵、SPD-20A紫外檢測器、N2010色譜工作站；Phenomenex Luna-C18色譜柱；RE-5210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；CP225D十萬分之一電子天平(德國賽多利斯集團)；DZF-6050-MBE型真空干燥箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)；高速萬能粉碎機(永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司)；KQ-220型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DK-S2型電熱恒溫水浴鍋(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；ZKJ-101型循環(huán)水真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)。

1.2 試藥川楝子飲片(成都中醫(yī)大惠康中藥飲片公司，批號：100301)；川楝素標準品(批號：111842)；異川楝素標準品(中國食品藥品檢定研究院，批號：200502)；甲醇、乙腈均為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純；炮制輔料(鹽、米醋)：市售。

2 方法與結(jié)果

2.1 川楝子炮制品的制備生品：稱取已經(jīng)撿去雜質(zhì)后的川楝子200 g，曬干，切厚片。清炒品：稱取已經(jīng)撿去雜質(zhì)的川楝子200 g，曬干，切厚片，置熱鍋內(nèi)，用中火翻炒，炒至果皮微黃，取出，放冷。醋制品：稱取已經(jīng)撿去雜質(zhì)的川楝子200 g，曬干，切厚片，加入50 mL釀造米醋浸潤，待米醋吸盡后，用文火炒至色澤微黃，取出，放冷。鹽炙品：稱取已經(jīng)撿去雜質(zhì)的川楝子200 g，曬干，切厚片，加20%鹽，加適量水稀釋拌潤，待鹽水吸盡后，用文火炒至色澤微黃，取出，放冷。

2.2 川楝素和異川楝素的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱Phenomenex Luna-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(30∶70)；柱溫35℃；檢測波長210 nm；流速1.0 mL/min；進樣量10 μL。川楝素和異川楝素的對照品和川楝子樣品中川楝素和異川楝素分離的色譜圖見圖1。

圖1 川楝子樣品與對照品的HPLC圖

2.3 溶液制備

2.3.1 標準品溶液的制備 分別精密稱取川楝素和異川楝素對照品各2 mg，加10 mL色譜級甲醇溶解，用0.22 μm微孔濾膜濾過后，轉(zhuǎn)移定容至10 mL量瓶中，作為標準品儲備液。

2.3.2 供試品溶液的制備 川楝子生品和各炮制品粉碎、過40目篩，干燥后的各川楝子炮制品粉末精密稱定約1.5g，放置到具塞錐形瓶中，加入25 mL色譜甲醇，稱量，記錄數(shù)據(jù)，開始超聲提取30分鐘，放冷，再稱一次重量，用甲醇補足到超聲前的重量，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜過濾。濾液定容至25 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.3.3 線性關系考查 取適量川楝素和異川楝素對照品溶液，以甲醇配制為濃度0.540、0.270、0.135、0.067 5、0.033 75和0.016 875 mg/mL的梯度，在已知色譜條件下進行測定，以峰面積和濃度進行回歸處理，得川楝素回歸方程：

Y=2 064.2X+1 034.3(r=0.999 9)，在0.016 875～2.70 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系。異川楝素：Y=134.4 X+267.5(r=0.999 9)，在0.016 875～2.70 μg范圍內(nèi)線性關系良好。

2.3.4 精密度試驗 重復進樣標準品混合溶液6次，進行含量測定，結(jié)果 RSD分別為0.162%、0.133%，精密度結(jié)果良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗 同一樣品分別于0、2、4、6、8、12小時進樣，測得川楝素和異川楝素峰含量，計算RSD為2.341%、2.032%，穩(wěn)定性結(jié)果良好。

2.3.6 重現(xiàn)性試驗 按照上述供試品溶液的制備方法，取一批樣品分別平行制備6份供試品溶液，測定川楝素和異川楝素的含量，計算RSD為1.522%、1.831%，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.3.7 加樣回收率試驗 精密稱定川楝子炒制品6份各1.5 g，分別精密加入1 mg的川楝素對照品，按含量測定方法進行測定，計算川楝素和異川楝素加樣回收率，結(jié)果平均回收率分別為98.46%、96.78%，RSD分別為1.096%、1.233%。

2.3.8 樣品含量測定 按上述色譜條件，測定川楝子樣品中川楝素和異川楝素的峰面積，分別計算川楝素和異川楝素的含量。結(jié)果見表1。

表1 川楝子生品及不同炮制品中川楝素和異川楝素的含量(n=6)

3 討論

中藥與其他植物藥的重要區(qū)別特征是中藥材的炮制工藝，川楝子是有毒中藥材，按傳統(tǒng)入藥要求，應該用炮制品，川楝素是川楝子眾多成分之一。川楝素既是活性作用成分，也是毒性成分。異川楝素主要有殺蟲作用［9-11］。本研究發(fā)現(xiàn)，由于川楝素紫外吸收不強，因此只能在末端吸收處進行測量，結(jié)果造成準確度下降。通過比較不同炮制方法樣品中川楝素和異川楝素含量，發(fā)現(xiàn)各炮制品中，生品中川楝素和異川楝素含量最高，其他經(jīng)過炮制后川楝素和異川楝素含量均有所下降，炒品的綜合指標均優(yōu)于其他炮制品，為規(guī)范炮制品品種提供了科學依據(jù)。其中醋品與鹽品的川楝素和異川楝素含量較低，可能炮制過程中悶潤時間過長，炮制時加熱需較長時間，且加大火候才能干燥，因此使成分破壞。另外各種炮制品中所含川楝素含量醋品最低，表明在高溫下，酸對川楝子中川楝素含量有較大影響。但是川楝子成分復雜，雖然川楝素是其主要活性成分，但不能以單個成分含量判斷產(chǎn)品質(zhì)量［12］。

不同炮制品炮制前后的成分含量有變化，與其功效不同有一定關系。炒川楝子可降低苦寒之性、毒性，能疏肝理氣止痛，適用于肋脅痛、胃脘痛；醋川楝子行氣散痞，能增加疏肝理氣止痛功效［13-14］；鹽川楝子能引藥下行，長于療疝止痛。各炮制品在藥理中均表現(xiàn)出抗炎作用，其中鹽制品的鎮(zhèn)痛抗炎作用效果最好［15］。

本研究比較川楝素和異川楝素含量的差異，結(jié)果表明川楝子飲片質(zhì)量受到炮制方法的影響，但炮制過程中，成分如何轉(zhuǎn)變及炮制原理等深入問題仍未解決，需進一步深入研究。

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文后參考文獻著錄格式示例（二）

連續(xù)出版物（期刊，含外文期刊）

［序號］主要責任者（作者為3位以下全部著錄，3位以上著錄前3位，后加“，等”）．文獻題名［文獻類型標志］.刊名，年，卷（期）：起頁-止頁.

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GUO Can,ZENG Li The Fifth People′s Hospital of Chengdu,Chengdu 611130,China

A

1004-6852(2016)11-0030-03

2015-10-27

郭燦(1969—)，女，副主任中藥師。研究方向：中藥學。