聯(lián)合檢測(cè)RF、AKA、抗CCP抗體和CRP對(duì)RA的診斷價(jià)值

王　波,牛莉莉,?！〔?/p>

(1.大連市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科，遼寧 大連116001；2.大連醫(yī)科大學(xué) 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)2010級(jí)；

3.大連市兒童醫(yī)院)

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聯(lián)合檢測(cè)RF、AKA、抗CCP抗體和CRP對(duì)RA的診斷價(jià)值

王波1*,牛莉莉2,常波3

(1.大連市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科，遼寧 大連116001；2.大連醫(yī)科大學(xué) 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)2010級(jí)；

3.大連市兒童醫(yī)院)

摘要：目的探討聯(lián)合檢測(cè)類風(fēng)濕因子(RF)、抗角蛋白抗體(AKA) 、抗環(huán)瓜氨酸多肽(CCP)抗體和C反應(yīng)蛋白(CRP)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)診斷中的價(jià)值。方法收集68例RA病人和42例非RA的自身免疫病病人血清，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法測(cè)抗CCP抗體，間接免疫熒光法檢測(cè)AKA，免疫比濁法測(cè)RF和CRP，然后對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算分析。結(jié)果RA組RF、AKA、抗CCP抗體和CRP的陽性率均明顯高于非RA組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。單項(xiàng)檢測(cè)RA診斷的敏感性由高到低排序是CRP、抗CCP抗體、RF、AKA，特異性由高到低排序?yàn)锳KA、抗CCP抗體、RF、CRP，四者串聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)提高了RA診斷的敏感性(91.2%)，并聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)提高了特異性,甚至達(dá)到100%。結(jié)論RF、AKA、抗CCP抗體、CRP單獨(dú)檢測(cè)RA都具有一定的靈敏度和特異性，但單獨(dú)應(yīng)用一項(xiàng)指標(biāo)容易造成漏診或誤診。聯(lián)合檢測(cè)四項(xiàng)指標(biāo)可極大提高特異性和敏感度，有利于提高RA患者的早期診斷。

關(guān)鍵詞：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎; 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體; 抗角蛋白抗體; C反應(yīng)蛋白

(ChinJLabDiagn,2016,20:0425)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是以關(guān)節(jié)及周圍組織受累為主要表現(xiàn)的全身性疾病，是臨床上常見的自身免疫性疾病之一。如診療不及時(shí)，病情會(huì)在短時(shí)間內(nèi)逐漸加重，出現(xiàn)軟骨和骨的破壞與侵蝕，關(guān)節(jié)畸形，從而失去勞動(dòng)能力，具有很高的致殘率[1]。早期進(jìn)行診斷和干預(yù)治療可有效減少RA致殘率。目前臨床上主要通過臨床表現(xiàn)、X線影像學(xué)檢查、類風(fēng)濕因子(RF)等血清學(xué)抗體檢查等來確診RA，其中自身抗體等血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)在早期診斷中占據(jù)重要地位，其敏感性和特異性對(duì)RA確診意義重大[2]。在RA診斷中，傳統(tǒng)血清學(xué)指標(biāo)，如RF、C反應(yīng)蛋白(CRP)具有敏感性高而特異性不高的特點(diǎn)，不利于臨床早期的診斷。隨著科研水平的提高和技術(shù)的發(fā)展，一些抗體如抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體(抗CCP抗體)、抗角蛋白抗體(AKA)等對(duì)RA的高特異性獲得了許多研究人員的認(rèn)可[3]。本研究通過對(duì)RF、抗CCP抗體、AKA、CRP的測(cè)定來探討其各自以及四者串聯(lián)、并聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)RA的診斷價(jià)值。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源

研究標(biāo)本均來源于大連中心醫(yī)院2015年1月至2015年3月住院的患者。實(shí)驗(yàn)組均為RA患者，共68例(其中20例RF陰性)。所有患者診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ACR) 和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)2010年的RA分類標(biāo)準(zhǔn)[4]。其中女49例，男19例，年齡31-81歲。其他自身免疫組42例，包括骨關(guān)節(jié)炎13例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)8例，強(qiáng)直性脊柱炎6例，干燥綜合征4例，痛風(fēng)2例，系統(tǒng)性硬化癥1例，其他免疫性疾病8例，以上病例均符合相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中女24例，男18例，年齡23-79歲。

1.2主要試劑

抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體試劑盒(美國雅培公司),抗角蛋白抗體檢測(cè)試劑盒(北京和杰創(chuàng)新生物技術(shù)有限公司)，類風(fēng)濕因子檢測(cè)試劑盒(美國貝克曼庫爾特有限公司)，C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒(美國貝克曼庫爾特有限公司)。

1.3主要儀器及耗材

熒光顯微鏡(德國蔡司公司EUROStarⅡ),ARCHITECT i 2000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀(美國雅培公司),IMMAGE 800特定蛋白儀(美國貝克曼庫爾特有限公司)，離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司)，移液槍(芬蘭Dragonmed移液槍，量程20 μl-200 μl)。

1.4檢測(cè)方法

1.4.1標(biāo)本采集所有患者均于清晨抽取空腹靜脈血5 ml，待血液凝固后3 000轉(zhuǎn)/分鐘離心6 min，分離血清后確保所有標(biāo)本均無溶血，-20℃保存待檢。所有操作均嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

1.4.2抗CCP抗體測(cè)定利用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法的原理，檢測(cè)結(jié)果大于5 U/ml為陽性。

1.4.3AKA檢測(cè)采用間接免疫熒光法檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果在熒光顯微鏡下觀察，見到角質(zhì)層出現(xiàn)明顯的多條板層狀(連續(xù))或者點(diǎn)片狀(不連續(xù))的熒光即為陽性結(jié)果。

1.4.4RF和CRP的檢測(cè)利用雙光徑免疫比濁法的原理，試劑均采用與儀器配套的國際標(biāo)準(zhǔn)試劑。檢測(cè)結(jié)果RF>30I U/ml為陽性，CRP>0.5 mg/dl為陽性。

1.5數(shù)據(jù)處理

收集的數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05或P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1RF、AKA、抗CCP抗體、CRP在RA組和非RA組陽性率的比較

RA組RF、AKA、抗CCP抗體、CRP的陽性率分別為70.6%、66.1%、79.4%、80.9%。非RA組RF、AKA、抗CCP抗體、CRP的陽性率分別為21.4%、7.1%、9.5%、61.9%。RA組RF、AKA、抗CCP抗體、CRP陽性率明顯高于非RA組，兩者之間存在顯著差異(P<0.01或P<0.05)，其中在RA組以CRP陽性率最高，AKA陽性率最低。

此外，在20例RF陰性的RA患者中，AKA、抗CCP抗體、CRP的陽性率分別為45%、75%、80%，可以看出這三項(xiàng)指標(biāo)對(duì)RF陰性的RA患者檢測(cè)的也有較高的陽性檢出率。

表1　兩組RF、AKA、抗CCP抗體、CRP在各組中陽性

2.2RF、AKA、抗CCP抗體、CRP敏感性、特異性的比較分析

經(jīng)過計(jì)算，在四項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)中，敏感性由高到低排序是CRP、抗CCP抗體、RF、AKA，分別為80.9%、79.4%、70.6%、66.1%，特異性由高到低排序?yàn)锳KA、抗CCP抗體、RF、CRP，分別為92.9%、90.4%、78.6%、38.1%。

表2　RF、AKA、抗CCP抗體、CRP敏感性和特異性(%)

2.3RF、AKA、抗CCP抗體、CRP四者串聯(lián)、并聯(lián)檢測(cè)的敏感性、特異性的比較分析

相較于RF、AKA、抗CCP抗體、CRP單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)RA，四項(xiàng)指標(biāo)串聯(lián)檢測(cè)RA，使特異性大大提高，甚至達(dá)到100%。而四項(xiàng)指標(biāo)并聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)則使敏感性提高，達(dá)到了91.2%。

表3　四項(xiàng)指標(biāo)串、并聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)的敏感性和

注：*串聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)，#并聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)

3討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是臨床上常見的自身免疫性疾病，在其發(fā)病早期即可以出現(xiàn)關(guān)節(jié)破壞,如果沒有得到及時(shí)有效的診斷，錯(cuò)過了最佳的治療時(shí)間，大多數(shù)患者在兩三年之內(nèi)就會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)的不可逆轉(zhuǎn)性破壞，進(jìn)而發(fā)展為關(guān)節(jié)畸形和功能障礙,嚴(yán)重影響患者的身心健康。我國目前主要根據(jù)臨床特征、X線影像學(xué)檢查以及RF等自身抗體來確診RA。而自身抗體在RA的發(fā)生、發(fā)展過程中也發(fā)揮著重要的作用，由于其檢查具有便捷，快速，容易操作等優(yōu)點(diǎn)，因此在臨床診斷RA中得到廣泛應(yīng)用。隨著人們對(duì)RA的不斷探索和臨床診斷方法的進(jìn)步，而且 RA的發(fā)病率不斷增長(zhǎng)，所以在RA的發(fā)病早期及時(shí)采取治療措施干預(yù)，以便及時(shí)控制病情的進(jìn)展是減輕RA關(guān)節(jié)損害的關(guān)鍵措施[5,6]。

由于在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、強(qiáng)者性脊柱炎等其它自身免疫疾病患者甚至正常人血清中均可檢測(cè)到RF[7]，因此單一檢測(cè)RF容易造成臨床上的誤診或漏診，故一般需要結(jié)合其它指標(biāo)與RF聯(lián)合檢測(cè)以確診RA。Bas[8]等研究發(fā)現(xiàn)，RF與RA患者的臨床表現(xiàn)和骨侵蝕性的損害程度相關(guān)，因此在了解疾病的發(fā)展?fàn)顩r方面具有重要價(jià)值。尋找RA的高特異性抗體成為科研的熱門方向。近年來,臨床通過檢測(cè)血清抗CCP抗體來輔助RA的診斷,諸多研究證實(shí)了其具有較高的特異性[9]，而且在RA發(fā)病早期即可檢出。在2010年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(American College of Rheumatology,ACR)與歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(European League Against Rheumatism，EULAR)共同推出的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)中，抗CCP抗體被定為RA診斷的血清學(xué)標(biāo)志性抗體，可見這一指標(biāo)在RA的早期診斷中有重要價(jià)值。本項(xiàng)研究中，抗CCP抗體的特異性經(jīng)計(jì)算為90.4%，RF為78.6%，可見抗CCP抗體的特異性略高于RF。有報(bào)道指出，此抗體有助于早期RA及RF陰性患者的確診，并可用于區(qū)分RA及其他RF陰性RA的診斷，并可用于區(qū)分RA及RF陽性骨關(guān)節(jié)炎癥[10]。

AKA是在RA患者血清中發(fā)現(xiàn)一種能與鼠食管中上段角質(zhì)層反應(yīng)的IgG抗體。AKA具有很高的特異性，在疾病早期即可檢出，且抗體與疾病嚴(yán)重程度和活動(dòng)性有一定的相關(guān)性[11]。AKA與RA病情嚴(yán)重性和功能障礙有關(guān)，其檢測(cè)RA的敏感性40%-70%[12]。在本項(xiàng)研究中AKA的敏感度為66.1%，與研究報(bào)道相符。其特異性為92.9%，在四項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)中特異性最高。但是由于AKA敏感性低，故一般只能作為臨床上診斷RA的輔助指標(biāo)。

CRP是第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，也是目前臨床上使用最廣的炎癥標(biāo)志物之一，是判斷機(jī)體炎癥的極其靈敏的指標(biāo)。彭宇生等[13]研究證明CRP在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情進(jìn)展過程中起著重要作用，能夠作為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷和預(yù)后治療的一個(gè)參考指標(biāo)，且其升高與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的活動(dòng)呈正相關(guān)。在本項(xiàng)研究中，RA患者血清中的CRP在四項(xiàng)研究指標(biāo)中敏感性最高(80.9%)，說明對(duì)于部分RF陰性的RA患者，是可以通過檢測(cè)CRP來避免漏診。但因其特異性太低(38.1%)，容易引起臨床誤診，故在臨床上常常只作為輔助診斷指標(biāo)，用以和其它檢測(cè)指標(biāo)聯(lián)合提高診斷的準(zhǔn)確度。

本項(xiàng)研究中，RF、AKA、抗CCP抗體、CRP在RA組的陽性率均高于非RA組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)，說明四項(xiàng)指標(biāo)均可以作為RA的輔助診斷指標(biāo)。但四項(xiàng)指標(biāo)雖然都有其各自的優(yōu)勢(shì)，可是由于每項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)單獨(dú)應(yīng)用于RA診斷的時(shí)候都會(huì)存在一定的局限性，故不能同時(shí)滿足高敏感性和高特異性。而聯(lián)合檢測(cè)RF、AKA、抗CCP抗體、CRP可彌補(bǔ)單項(xiàng)指標(biāo)診斷RA的不足，極大提高RA診斷的敏感性或特異性。如在本研究中，CRP和AKA、RF及抗CCP抗體串聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)特異性達(dá)到了100%，并聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)的敏感性達(dá)到了91.2%。因此聯(lián)合檢測(cè)這四項(xiàng)指標(biāo)能有效減少漏診率和誤診率，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，有利于提高早期的診斷率，使患者能夠得到及時(shí)有效的治療，對(duì)于及時(shí)控制患者病情和改善預(yù)后有重要的意義。

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The role of combined application of RF,AKA,anti-CCP antibody and CRP in diagnosing rheumatoid arthritis

WANGBo,NIULi-li,CHANGBo.

(DepartmentofClinicalLaboratory,DalianMunicipalCenteralHospital,DalianLiaoning116001,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the clinical value of combination detection of rheumatoid factor(RF),anti-cyclic citrullinated peptide antibody (CCP),anti-keratin antibody(AKA) and c-reactive protein (CRP)in the diagnosing rheumatoid arthritis(RA).MethodsThe serum samples of 68 RA patients and 42 other autoimmune diseases patients were collected.Anti-CCP antibody was detected by chemiluminescent microparticle immunoassay(CMIA).AKA was measured by indirect immunofluorescence.Both RF and CRP were detected by Immune turbidimetry (ITM).Then analyze the results.ResultsIn RA group,positive rate of RF,Anti-CCP antibody,AKA,CRP was obviously higher than those of other autoimmune diseases patients(P<0.01 or P<0.05),the difference between both groups was statistically significant.Single diagnostic sensitivity of RA from high to low ranking is CRP Anti-CCP antibody RF AKA.The diagnostic specificity of RA from high to low ranking is AKA Anti-CCP antibody RF CRP.Four series of joint detection improves the sensitivity(91.2%) of RA diagnosis,parallel combined detection can improve the specificity and even reached 100%.ConclusionThe RF,AKA,Anti-CCP antibody and CRP detection alone RA has good sensitivity and specificity,but a separate application index easily missed diagnosis or misdiagnosis.Combined detection of four indexes may offer clinical benefits for diagnosis of RA and can significantly improve the specificity and sensitivity to diagnose RA.

Key words:Rheumatoid arthritis;Anti-cyclic citrullinated peptide;anti-keratin antibody;c-reactive protein

(收稿日期：2015-07-07)

作者簡(jiǎn)介：王波(1969- )，男，碩士，主任技師，研究方向：臨床免疫學(xué)。

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類號(hào)：R593.22

文章編號(hào)：1007-4287(2016)03-0425-04

*通訊作者