五味降脂膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

溫瑗源++孟令琨++陳宏斌+++樊湘澤++王媛++王德友

[摘要] 目的 建立五味降脂膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 方法 采用薄層色譜法對(duì)五味降脂膠囊中的五味子、白術(shù)等藥材進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測(cè)定五味降脂膠囊中的橙黃決明素含量。 結(jié)果 薄層色譜法鑒別斑點(diǎn)清晰，專(zhuān)屬性、重現(xiàn)性強(qiáng)；橙黃決明素在0.179～1.792 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。橙黃決明素平均加樣回收率為98.68%，RSD為1.91%。 結(jié)論 本研究建立的五味降脂膠囊定性鑒別與定量分析方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性和精密度良好。

[關(guān)鍵詞] 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法；五味降脂膠囊

[中圖分類(lèi)號(hào)] R927.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）01（a）-0008-03

五味降脂膠囊由五味子、決明子、當(dāng)歸、白術(shù)、山楂等多味中藥材經(jīng)提取加工而成，方中決明子味苦、甘、咸，可潤(rùn)腸通便，降脂明目，是治療便秘、高血脂、高血壓的常用中藥材[1-2]，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)顯示，決明子中富含大量的橙黃決明素、大黃素、大黃酚等成分，能夠有效抑制血清膽固醇的升高及主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成[3-4]。在五味降脂膠囊的工藝中，五味子、決明子以乙醇加熱回流提取，藥渣與麥冬、當(dāng)歸等藥材共同水煎。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，采用薄層色譜法對(duì)制劑中的五味子、白術(shù)等藥材分別進(jìn)行定性鑒別，并針對(duì)醇提部分工藝中決明子的含量進(jìn)行測(cè)定研究，旨在為控制五味降脂膠囊質(zhì)量提供可靠依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 試劑

五味降脂膠囊（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實(shí)驗(yàn)室）；五味子對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定所研究院，批號(hào)：120922～201108）；白術(shù)對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定所研究院，批號(hào)：120945～201309）；橙黃決明素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：121093～201303）；乙腈（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；其余試劑為分析純。

1.2 儀器

TU-1810型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；Prominenece UFLC高效液相色譜儀（日本島津公司）；TP-150超聲波清洗機(jī)（天鵬電子新技術(shù)有限公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；BP211D塞多利斯分析天平（塞多利斯公司）；真空干燥箱（上海一恒實(shí)驗(yàn)儀器總廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 五味子的薄層色譜鑒別

取本品5 g，研細(xì)，加三氯甲烷30 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄? ml使其溶解，作為供試品溶液。另取五味子對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。為增加鑒別的專(zhuān)屬性，取去除五味子的模擬處方制成五味子陰性樣品，再按五味子供試品溶液的制備方法依法制成五味子陰性對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（29∶10∶2）的上層溶液為展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色斑點(diǎn)（圖1）。

2.2 白術(shù)的薄層色譜鑒別

取本品5 g，研細(xì)，加環(huán)己烷20 ml，超聲處理15 min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)蛹状? ml使其溶解，作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。為增加鑒別的專(zhuān)屬性，取去除白術(shù)的模擬處方制成白術(shù)陰性樣品，再按白術(shù)供試品溶液的制備方法制成白術(shù)陰性對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各3 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）為展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸乙醇（1∶9）溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾（圖2）。

2.3 溶液制備及色譜條件

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取橙黃決明素對(duì)照品，精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液制成每1 ml含89 μg的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品粉末約5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加乙醇20 ml，超聲處理30 min，取出，放冷，再次稱(chēng)定重量，并用乙醇補(bǔ)足缺失重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 ml，蒸干，加稀鹽酸30 ml，水浴加熱水解60 min，冷卻后，三氯甲烷萃取3次，20 ml/次，合并三氯甲烷層，蒸干，殘?jiān)? ml無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液溶解，并于10 ml容量瓶中定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得[5-8]。

2.3.3 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（75∶25），檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm。流速：1 ml/min，進(jìn)樣量：10 μl。柱溫：30℃。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密吸取橙黃決明素對(duì)照品溶液0.179、0.441、0.891、1.344、1.792 μg注入液相色譜儀，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為：y=158216x+403.16，r=0.9996。結(jié)果顯示，線性范圍0.179～1.792 μg（表1）。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定橙黃決明素峰面積。結(jié)果顯示，RSD值為2.08%，提示儀器、方法的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取上述橙黃決明素對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別于0、3、6、9、12 h測(cè)定其橙黃決明素峰面積，計(jì)算RSD分別為0.48%、2.08%，結(jié)果顯示，兩者在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取6份五味降脂膠囊按上述方法分別制備6份供試品溶液，按含量測(cè)定方法測(cè)定橙黃決明素的含量。結(jié)果顯示，RSD為1.59%，提示該含量測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量供試品9份，分別精密加入濃度為0.89 μg/ml的對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，平均回收率為98.68%，RSD為1.91%（表2）。

2.9 橙黃決明素的含量測(cè)定

取3批樣品分別制得供試品溶液，按上述方法進(jìn)行含量測(cè)定，采用峰面積比較法計(jì)算橙黃決明素含量，結(jié)果顯示，本品含橙黃決明素>0.244 mg/g（表3）。

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為高脂血癥是由于濁邪內(nèi)阻，氣血瘀滯，絡(luò)脈不通所致，故治療多采用通便降脂、活血化瘀類(lèi)中藥[9-11]。臨床實(shí)踐證明，口服中藥制劑不但能夠有效治療高脂血癥，而且能夠延緩病情的發(fā)展[13-14]。五味降脂膠囊具有清腸降脂、舒心活絡(luò)作用，用于高脂血癥的輔助治療，臨床療效確切。本研究依據(jù)《中國(guó)藥典》2010版一部決明子項(xiàng)下的要求，并查閱大量文獻(xiàn)[15-18]，通過(guò)UV-1700紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)200～600 nm范圍內(nèi)對(duì)橙黃決明素的70%乙醇溶液進(jìn)行紫外波長(zhǎng)掃描，得紫外吸收光譜，結(jié)果顯示，橙黃決明素在284 nm處有最大吸收，與其他組分能達(dá)到較好分離，故將其檢測(cè)波長(zhǎng)選擇在284 nm處。在橙黃決明素測(cè)定的流動(dòng)相選擇上曾試用甲醇-0.1%磷酸水溶液（70∶30），乙腈-0.1%磷酸水溶液（75∶25）等多種[19-20]，結(jié)果顯示，以甲醇-0.1%磷酸水溶液（70∶30）作為流動(dòng)相，供試品色譜中橙黃決明素峰與雜質(zhì)峰分離效果不佳，存在雜質(zhì)峰干擾，且保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；以乙腈-0.1%磷酸水溶液（75∶25）作為流動(dòng)相，結(jié)果顯示，供試品色譜中橙黃決明素峰型對(duì)稱(chēng)，且組分分離度較好，與雜質(zhì)峰分離良好，故最終確定將乙腈-0.1%磷酸水溶液（75∶25）作為測(cè)定橙黃決明素含量方法的流動(dòng)相。

綜上所述，本研究所建立的定性及定量方法操作簡(jiǎn)便，有良好的重復(fù)性和精密度，為五味降脂膠囊的質(zhì)量控制提供了可靠依據(jù)。

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（收稿日期：2015-09-18 本文編輯：祁海文）