高效液相法測定鹽酸小檗堿片含量的不確定度評定

陳　麗

（河南省開封市食品藥品檢驗所，開封　475000）

?

高效液相法測定鹽酸小檗堿片含量的不確定度評定

陳麗

（河南省開封市食品藥品檢驗所，開封475000）

摘要：目的建立以高效液相法測定鹽酸小檗堿片含量的不確定度評定的方法。方法通過對各分量的分析，計算各分量的不確定度，最后計算出合成標準不確定度及擴展不確定度。結論本文所建立的方法可用于該制劑的不確定度的評定。關鍵詞：高效液相色譜法；不確定度；評定；鹽酸小檗堿片；含量測定

不確定度是表征被測量物質(zhì)真值所處的量值范圍的評定結果，是對實驗測量結果的可信度評定，隨著人們對中藥質(zhì)量要求的進一步提高，對檢驗結果的可靠性要求也在不斷提高，不確定度的測量也被大家所重視，本文用高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿片含量，并根據(jù)《化學分析中不確定度的評估指南》CNAS—GL06有關規(guī)定對其含量的測定不確定度進行評定。

1　實驗部分

1.1儀器與試藥島津LC-2010C高效液相色譜儀；Sartorius CP225D分析天平、Agela Promosil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm粒徑5 μm）、紫外檢測器、水為去離子純化水、鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所、批號：110713-200911含量：86.8%）、分析純磷酸二氫鉀、庚烷磺酸鈉、色譜純乙腈。

1.2色譜條件用十八烷基硅烷基鍵合硅膠為填充劑；用磷酸鹽緩沖溶液-乙腈（60∶40）作為流動相、進樣量：10 μl、柱溫：36℃、紫外檢測器檢測波長：263 nm、流速：1 ml/min。

1.3對照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對照品約10 mg，精密稱定，置250 ml量瓶中，加沸水溶解，放冷，用水稀釋至刻度（制成每1 ml中約含鹽酸小檗堿40 μg的溶液），搖勻。

1.4供試品溶液的制備取本品20片，精密稱定，置100 ml量瓶中，加沸水適量使鹽酸小檗堿溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml置50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取上述兩種溶液各10 μl進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量。

2　結果

2.1數(shù)學模型①含量測定不確定度：在實際操作中，對照品精密稱取2份，每份經(jīng)稀釋后進樣3次，經(jīng)過回歸計算確定校正系數(shù)f值，同時精密稱取供試品2份，每份經(jīng)稀釋后進樣2次，根據(jù)峰面積由校正系數(shù)f求得濃度值，以濃度平均值求得供試品的百分含量。根據(jù)藥典規(guī)定，含量計算公式為：X= (f×AT×M×mR×1/VR) /(Ai×mT×1/ VT1×VT2/VT3×50×1000)。X為鹽酸小檗堿占標示量的百分含量（%）；f為校正系數(shù)；AT為供試品溶液色譜峰面積；M為鹽酸小檗堿的平均片重；mR為對照品稱樣量；1/VR為對照品的稀釋倍數(shù)；Ai為對照品溶液色譜峰面積；mT為供試品的稱樣量；1/VT1×VT2/VT3為供試品的稀釋倍數(shù)，50為鹽酸小檗堿的規(guī)格。②稱量帶入的不確定度：根據(jù)天平附帶資料，天平的分辨率為0.01 mg，按矩形分布計算（k=31/2），則稱量不確定度u (m1) =0.01×10-3/31/2=5.8× 10-6g，天平稱量重復性誤差為0.02，則重復性帶入的不確定度u (m2) =0.02×10-3/31/2=1.15×10-5g。天平的標準不確定度（u(m)=（u(m1)2+ u(m2)2）1/2=1.29×10-5。③玻璃儀器的不確定度：本法使用儀器為250 ml、100 ml、50 ml量瓶及5ml移液管，250 ml量瓶容量允差為±0.1 ml；100 ml量瓶容量允差為±0.1 ml；50 ml量瓶（A級）容量允差為± 0.05 ml，5 ml移液管容量允差為±0.015 ml。按三角分布計算（k=61/2），則250 ml、100 ml量瓶校正帶入的不確定度urel(V1) urel(V4)分別為0.10/61/2=0.0408；50 ml量瓶校正帶入的不確定度urel(V2)為0.05/61/2=0.0204 ml，5 ml移液管其標準不確定度urel(V3)為0.015/61/2=0.00612 ml。溫度：實驗室溫度在（20±3）℃范圍內(nèi)波動，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1，假設為均勻分布，其標準不確定度分別為2.1×10-4×3×100/31/2=0.00115；2.1×10-4×3×50/ 31/2=0.00182；2.1×10-4×3×5/31/2=0.00182 2.1×10-4×3×250/ 31/2=0.0909。以上兩種分量合成得：urel(V1)（0.04082+ 0.001152）1/2=0.00424。urel(V2)（0.02042 +0.001822）1/2= 0.00273。urel(V3)（0.0006122+0.001822）1/2=0.000638。urel(V4) （0.04082+0.09092）1/2=0.0996。

2.2對照品溶液的相對不確定度urel(A1)對照品稱樣u (RM)和溶液色譜峰面積u (A1)引起的不確定度。兩份對照品稱樣分別為0.01098 g和0.01082 g；稱樣的相對標準不確定度：u(RM)=【（u(m)/0.01098）2+（u(m)/0.01082）2】1/2=0.00167。兩份對照品溶液分別進樣3次，重復測量的峰面積分別為：A1：2549410、2548394、2549145和A2：2538467、2539613、2539306 u (RA)的產(chǎn)生主要由重復性進樣引起，由儀器給出的進樣峰面積標準偏差為隨機測量，按每一次的重復次數(shù)n=3，用A1的RSD計算其標準不確定度。A1的RSD值為0.0207%。對照品溶液色譜峰面積引起的不確定度u (A1) = RSD/31/2=0.000120。鹽酸小檗堿對照品含量為86.6%，未提供不確定度，則將其視為真值，引入的不確定度為0。合成：urel(A1)=[ u(RM)2+ urel(V4)2+ u(A1)2]1/2=0.0996。

2.3供試品溶液的相對不確定度分別稱取兩份供試品分別為0.3723g和0.3738g，供試品稱量相對標準不確定度= u(TM)=【（u(m)/0.3723）2+（u(m)/0.3738）2+（u(m)/1.4068）2】1/2=4.97×10-5。兩份供試品溶液分別進樣3次，重復測量的峰面積分別為：Y1:2348211、2348250、2348267和Y2：2342437、2342468、2342483用Y1的RSD計算其標準不確定度。Y1的RSD為：0.00122%。供試品溶液色譜峰面積引起的不確定度u (Y1) = RSD/31/2=7.04×10-6。合成：urel(Y1)=[ u(TM)2+ urel(V2)2+ urel(V3)2+ u(Y1)2]1/2=0.00694。

3　合成不確定度U (x)

urel(X)=[ urel(Y1)2+ urel(A1)2]1/2=0. 326。實驗中測得x= 96.00%。U (x) = urel(X)×x=0. 326×96.00%=0.31%。實驗結果一般以擴展不確定度來表示，取包含因子k=2 (置信概率為95%)，則含量測定擴展不確定度U=k×U (x) =2×0.31% =0.62%則含量測定結果可表示為96.00%±0.62%（k=2）。

4　總結

藥品檢驗結果是判定藥品是否合格的重要依據(jù)，《中國藥典》對于不確定度的評定沒有明確要求，但實際上在藥品檢驗工作中推行不確定度的評定有一定價值，它為評價分析方法、評定實驗室及檢測人員的技術水平和藥品質(zhì)量的準確判定都提供了較為客觀的依據(jù)。

本文通過對鹽酸小檗堿含量測定過程中各步驟不確定度的評定得出最后測量結果為96.00%±0.62%，測量結果真實反映了實驗室日常檢驗結果的水平。

Evaluation of Uncertainty Measurement in Content Determination of Berberine Hydrochloride by HPLC

CHEN Li
(Kaifeng Institute for Food and Drug Control, Henan Province, Kaifeng 475000, China)

Abstract:Objective To establish a method for the evaluation of the uncertainty in the content determination of berberine hydrochloride by HPLC. Methods Each components of uncertainty was calculated by analyzing the various variable parameters among the procedures. The combined standard uncertainty and the expanded uncertainty were then finally obtained by synthesizing the uncertainties of various component variables. Conclusion The method of the evaluation of uncertainty measurement established in this paper is reasonable and reliable.

Keywords:HPLC; uncertainty; evaluation; berberine hydrochloride; content determination

收稿日期：（本文編輯：張文娟本文校對：張文娟2016-01-08）

doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2016.06.067

文章編號：1672-2779（2016）-06-0138-03