三唑類殺菌劑對蘋果主要病原菌的毒力及田間防效

王 麗，周增強，侯 琿

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 鄭州果樹研究所，河南 鄭州 450009)

三唑類殺菌劑對蘋果主要病原菌的毒力及田間防效

王 麗，周增強*，侯 琿

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 鄭州果樹研究所，河南 鄭州 450009)

為了找出能有效防治蘋果主要病害的三唑類殺菌劑，為蘋果病害的防治提供理論依據(jù),采用菌絲生長速率法測定了4種三唑類殺菌劑對3種蘋果病害病原菌的毒力，篩選出高效殺菌劑后進行田間防治試驗。毒力測定結(jié)果表明，戊唑醇、己唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑?qū)μO果輪紋病菌均有較好的抑制作用，有效中濃度(EC50)分別為0.188 6、2.751 3、0.076 3、0.108 6 mg/L,其對蘋果炭疽病菌的EC50分別為0.438 0、47.512 0、0.720 0、1.876 6 mg/L，對蘋果斑點落葉病菌的EC50分別為9.004 7、9.020 9、0.432 0、3.355 6 mg/L。2014年和2015年選用抑菌效果較好的戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑進行田間藥效試驗，結(jié)果表明，430 g/L戊唑醇SC對春梢期斑點落葉病防效最好，分別為82.74%和85.32%，但3種藥劑間差異不顯著；10%苯醚甲環(huán)唑WG對炭疽病的防效最好，分別為82.20%和83.53%，與戊唑醇差異不顯著；10%苯醚甲環(huán)唑WG和430 g/L戊唑醇SC對輪紋病的防治效果均較好，貯藏30 d防效分別為80.97%、83.09%(2014年)和81.04%、79.45%(2015年)，但2種藥劑差異不顯著?？傮w來說，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑?qū)?種蘋果主要病害均有良好的田間防治效果，建議在生長季防治蘋果病害時交替使用。

三唑類殺菌劑； 蘋果輪紋??； 蘋果炭疽病； 蘋果斑點落葉?。?毒力測定； 田間防效

目前我國蘋果病害發(fā)生嚴(yán)重影響蘋果的產(chǎn)量和質(zhì)量。蘋果輪紋病是近年來蘋果生產(chǎn)上危害最為嚴(yán)重的病害之一，其對枝干的危害逐年加重，造成樹勢衰弱、枝干枯死，引起大量爛果，且貯藏期可持續(xù)發(fā)病[1-4]。蘋果炭疽病在果實坐果后即可感染，但在果實近成熟時開始發(fā)病，采收后在貯藏期繼續(xù)發(fā)展，造成采前大量落果和采后貯藏中果腐[5]。蘋果斑點落葉病主要危害葉片，也危害枝條和果實，許多果園病葉率在90%以上，落葉率為20%～80%，造成果實品質(zhì)和產(chǎn)量下降[6-8]。這些主要病害的發(fā)生給蘋果生產(chǎn)造成嚴(yán)重的損失，其防治任務(wù)尤為關(guān)鍵。三唑類殺菌劑主要通過阻礙真菌麥角甾醇的生物合成而影響真菌細(xì)胞壁的形成，對多數(shù)真菌病害均有良好的防治效果，是一類具有開發(fā)潛力的優(yōu)良藥劑，自1973年被引入國內(nèi)后廣泛用在各種病害的防治上[9]。其中，戊唑醇在蘋果輪紋病的防治上已取得良好效果[10]，三唑類殺菌劑對蘋果斑點落葉病的毒力也有報道[11]，但病害的發(fā)生是發(fā)展變化的，且三唑類殺菌劑對蘋果輪紋病、炭疽病、斑點落葉病3種病害同時防治的研究較少。為此，比較了戊唑醇、己唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑4種三唑類殺菌劑對蘋果輪紋病菌、炭疽病菌和斑點落葉病菌的毒力，初步篩選出高效藥劑后進行田間試驗，以期找出防治這3種蘋果病害的有效藥劑，為三唑類殺菌劑的應(yīng)用和蘋果主要病害的防治提供參考。

1 材料和方法

1.1 供試材料

供試菌種： 蘋果輪紋病菌(Botryosphaeriadothidea)、蘋果炭疽病菌(Glomerellacingulata)和蘋果斑點落葉病菌(Alternariamali)，均是從中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所試驗園采集病樣，經(jīng)組織分離和純化后獲得菌株。將菌株4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 供試藥劑

選擇4種三唑類殺菌劑原藥進行毒力測定，分別是96.5%戊唑醇原藥、95%己唑醇原藥、97%苯醚甲環(huán)唑原藥和97%丙環(huán)唑原藥，均由江蘇劍牌農(nóng)藥化工有限公司提供。

田間防治試驗中，選擇10%苯醚甲環(huán)唑WG(瑞士先正達作物保護有限公司)、430 g/L戊唑醇SC(德國拜耳作物科學(xué)公司)和25%丙環(huán)唑EC(深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司)為試驗藥劑，80%代森錳鋅WP[陶氏益農(nóng)農(nóng)業(yè)科技(中國)有限公司]和50%多菌靈WP(山東曹達化工有限公司)為對照藥劑。

1.3 室內(nèi)毒力測定

1.3.1 藥劑配制 用萬分之一電子天平分別定量稱取4種供試原藥，丙酮溶解后，配成1%的母液備用。試驗前根據(jù)需要用0.1%吐溫80水溶液將其稀釋成系列濃度梯度。

1.3.2 測定方法 采用菌絲生長速率法測定。無菌操作條件下，取上述配制好的藥液各2 mL，分別移入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，再在各皿中分別加入融化的PSA培養(yǎng)基10 mL。將藥液和培養(yǎng)基充分混勻，待培養(yǎng)基完全凝固后，將培養(yǎng)好的病原菌用打孔器打成菌餅(直徑5 mm)，自菌落邊緣挑起菌餅，分別轉(zhuǎn)接到不同質(zhì)量濃度的培養(yǎng)基上，每處理4皿，重復(fù)3次，以不加藥處理作對照。放入人工氣候箱，在28 ℃下培養(yǎng)。

1.4 田間防治試驗

根據(jù)室內(nèi)毒力測定結(jié)果，選用戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑進行田間防治試驗，以常規(guī)藥劑代森錳鋅和多菌靈為對照藥劑。

1.4.1 試驗設(shè)計和安排 試驗在河南省滑縣白道口鎮(zhèn)楊店蘋果園進行，品種為首紅。設(shè)6個處理：430 g/L戊唑醇SC 4 000倍液(有效成分108 mg/L)、10%苯醚甲環(huán)唑WG 1 500倍液(有效成分67 mg/L)、25%丙環(huán)唑EC 800倍液(有效成分313 mg/L)、80%代森錳鋅WP 1 000倍液(有效成分800 mg/L)、50%多菌靈WP 800倍液(有效成分625 mg/L)和清水對照(CK)。小區(qū)隨機區(qū)組排列，每小區(qū)成齡蘋果樹2株，重復(fù)4次，對水噴霧。于2014年7月2日、7月16日、8月4日和8月16日共噴藥4次，2015年7月2日、7月13日、7月23日和8月3日共噴藥4次。

1.4.2 調(diào)查時間和方法 蘋果輪紋病病情調(diào)查：于采收期調(diào)查(2014年9月28日、2015年9月11日)，記載每個處理各重復(fù)的總果數(shù)、病果數(shù)，隨后于當(dāng)日按樹上東、西、南、北、中等不同位置隨機采收外觀無病的好果，每小區(qū)各選50個果，每處理共200個果裝入筐中，常溫貯藏，于貯藏后15、30 d繼續(xù)調(diào)查，記錄總果數(shù)、病果數(shù)。

二是隨著三峽等控制性工程建成造成長江中下游水文情勢發(fā)生改變，現(xiàn)有水功能區(qū)納污能力計算成果也需要按照新的水文條件做進一步的復(fù)核和調(diào)整。

蘋果炭疽病病情調(diào)查：2014年7月2日(藥前)、8月16日和8月28日共調(diào)查3次，2015年7月2日(藥前)、8月3日和8月14日共調(diào)查3次。每小區(qū)2株樹均調(diào)查，合計總果數(shù)、病果數(shù)。

蘋果斑點落葉病病情調(diào)查：2014年5月28日(藥前)、7月2日和8月28日共調(diào)查3次，2015年6月2日(藥前)、7月13日和8月14日共調(diào)查3次。每小區(qū)2株樹均調(diào)查，每株分東、西、南、北、中5個方向各固定2個新梢(春梢和秋梢)，定期調(diào)查其全部葉片，記錄總?cè)~數(shù)、各級病葉數(shù)。分級方法如下：0級，無病斑；1級，病斑面積占整個葉面積的10%以下；3級，病斑面積占整個葉面積的11%～25%；5級，病斑面積占整個葉面積的26%～40%；7級，病斑面積占整個葉面積的41%～65%；9級，病斑面積占整個葉面積的66%以上。

1.5 數(shù)據(jù)調(diào)查與統(tǒng)計分析

1.5.1 室內(nèi)毒力 待對照菌絲長滿皿時調(diào)查各處理菌絲的生長情況，用數(shù)顯游標(biāo)卡尺十字交叉測量菌落擴展直徑，按下式計算抑菌率。

抑菌率=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-原菌餅直徑)×100%。

用DPS軟件計算毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)、有效中濃度(EC50)及其95%置信限[12]。

1.5.2 田間藥效 根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)，統(tǒng)計防治效果。蘋果輪紋病和炭疽病防效計算公式：

病果率=病果數(shù)/總果數(shù)×100%，

蘋果斑點落葉病田間防效計算公式：

病情指數(shù)=∑(各級病葉數(shù)×相對級數(shù)值)/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×9)×100,

防效=[1-(藥前對照病情指數(shù)×藥后藥劑處理病情指數(shù))/(藥后對照病情指數(shù)×藥前藥劑處理病情指數(shù))]×100% 。

采用Excel和DPS軟件對防治效果進行方差分析，以Duncan’s新復(fù)極差法進行差異顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 三唑類殺菌劑對蘋果病原菌的室內(nèi)毒力

對蘋果輪紋病菌的毒力測定結(jié)果(表1)表明，苯醚甲環(huán)唑的抑制作用最強，其EC50值為0.076 3 mg/L，丙環(huán)唑和戊唑醇次之，EC50值分別為0.108 6、0.188 6 mg/L，己唑醇的EC50值為2.751 3 mg/L。對蘋果炭疽病菌的毒力測定結(jié)果表明，戊唑醇的抑制作用最強，其EC50值為0.438 0 mg/L，苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑次之，EC50值分別為0.720 0、1.876 6 mg/L，己唑醇對蘋果炭疽病菌的抑制作用較弱。對蘋果斑點落葉病菌的毒力測定結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑的抑制作用最強，其EC50值為0.432 0 mg/L，其次是丙環(huán)唑，EC50值為3.355 6 mg/L，戊唑醇和己唑醇對蘋果斑點落葉病菌的抑制效果相近，其EC50值分別為9.004 7、9.020 9 mg/L。通過室內(nèi)毒力試驗可以看出，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑?qū)?種病菌都有很強的抑制作用，為進一步驗證其活性，用這3種藥劑進行田間防治試驗。

表1 三唑類殺菌劑對蘋果主要病原菌的毒力

2.2 三唑類殺菌劑對蘋果病害的田間防治效果

2.2.1 蘋果輪紋病 2 a采收期調(diào)查,果實都是零星發(fā)病。從表2可以看出，2014年常溫貯藏15 d，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、代森錳鋅和多菌靈處理的防效分別為82.21%、80.11%、74.86%、76.72%和78.19%；貯藏至30 d，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、代森錳鋅和多菌靈處理的防效分別為83.09%、80.97%、73.06%、78.02%和79.02%。戊唑醇的防治效果稍高，但3種三唑類藥劑的防治效果差異不顯著，與對照藥劑的差異也不顯著，說明這3種三唑類藥劑都可以較好地控制蘋果輪紋病。2015年，當(dāng)常溫貯藏15 d，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、代森錳鋅和多菌靈處理的防效分別為80.03%、82.93%、73.99%、78.96%和74.99%；貯藏至30 d，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、代森錳鋅和多菌靈處理的防效分別為79.45%、81.04%、71.33%、77.87%和76.76%。戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑的防治效果稍高，與對照藥劑差異不顯著，說明這2種三唑類藥劑控制蘋果輪紋病的效果較好。

表2 三唑類殺菌劑對蘋果輪紋病的田間防效

注：同列數(shù)據(jù)后不同字母表示在P<0.05水平上差異顯著，下同。

2.2.2 蘋果炭疽病 2014年2次調(diào)查結(jié)果表明，3種三唑類藥劑中苯醚甲環(huán)唑的防效最好，分別為85.98%和82.20%；戊唑醇次之，分別為82.35%和78.04%；丙環(huán)唑的防效較差，分別為76.47%和74.91%(表3)。2015年2次調(diào)查結(jié)果也表明苯醚甲環(huán)唑的防效最好，分別為84.99%和83.53%；戊唑醇次之，分別為82.91%和81.94%；丙環(huán)唑的防效較差，分別為75.72%和74.37%。方差分析結(jié)果表明，2014年苯醚甲環(huán)唑防效與丙環(huán)唑差異顯著，與戊唑醇差異不顯著，前期與兩對照藥劑差異顯著，后期不顯著；2015年各藥劑處理間的防效差異均不顯著。說明苯醚甲環(huán)唑在控制蘋果炭疽病上效果最好。

表3 三唑類殺菌劑對蘋果炭疽病的田間防效

2.2.3 蘋果斑點落葉病 從表4可以看出，2014年春梢期,戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、代森錳鋅和多菌靈處理的防效分別為82.74%、82.40%、77.61%、79.31%和77.73%；秋梢期,戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、代森錳鋅和多菌靈處理的防效分別為81.26%、82.08%、76.36%、79.51%和77.73%。戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑的防治效果稍高，但3種三唑類藥劑的防治效果差異不顯著，與對照藥劑的差異也不顯著，說明這3種三唑類藥劑都可以較好地控制蘋果斑點落葉病。2015年春梢期,戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、代森錳鋅和多菌靈處理的防效分別為85.32%、80.95%、78.69%、79.55%和76.96%；秋梢期,戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、代森錳鋅和多菌靈處理的防效分別為82.45%、78.67%、76.51%、76.31%和76.09%。戊唑醇的防治效果較高，其中春梢期與對照藥劑多菌靈的防效差異達顯著水平，說明戊唑醇控制蘋果斑點落葉病的效果較好。

表4 三唑類殺菌劑對蘋果斑點落葉病的田間防效

3 結(jié)論與討論

本研究選用的4種三唑類藥劑中，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑?qū)μO果輪紋病菌、炭疽病菌和斑點落葉病菌的菌絲生長均有明顯的抑制作用。苯醚甲環(huán)唑?qū)μO果輪紋病菌和斑點落葉病菌的抑制作用均最強，EC50值為0.076 3 mg/L和0.432 0 mg/L，戊唑醇對蘋果炭疽病菌的抑制作用最強，其EC50值為0.438 0 mg/L，這與以往的報道不太一致，可能是因為不同病原菌對該類藥劑敏感性存在一定差異[11]。

從田間試驗結(jié)果可以看出，生長季和貯藏期戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑都可以很好地控制蘋果輪紋病的發(fā)生，苯醚甲環(huán)唑可以更好地控制蘋果炭疽病。蘋果斑點落葉病在整個生長季可發(fā)生多次再侵染，導(dǎo)致藥劑的防效下降，增加了防治難度[13]。戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑3種藥劑的防治效果相差不大，都能很好地防治該病，在生長季可將這3種藥劑交替使用。總體來說，這3種三唑類殺菌劑對3種蘋果主要病害都有較好的防治效果,和對照藥劑的防效相當(dāng)，表明該類藥劑對3種病害有一定兼治作用，可以通過把握用藥時間、合理選擇用藥量，提高對3種病害同時防治的效果。建議在蘋果生長前期這3種藥劑交替使用，在生長后期使用苯醚甲環(huán)唑，這樣可以更好地控制炭疽病的發(fā)生。

由于三唑類殺菌劑的作用位點相對單一，存在潛在的高水平抗藥性風(fēng)險[14]，生產(chǎn)中單一、過量地使用可能導(dǎo)致病原菌的抗藥性亞群體迅速形成，可將該類藥劑與其他常規(guī)藥劑交替使用，延緩抗性的產(chǎn)生。同時，亟須加強相關(guān)病原菌對該類殺菌劑的抗性風(fēng)險預(yù)測及治理策略研究，以提高防治病害的有效性和延長藥劑的使用壽命。

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Virulence and Field Control Efficacy of Triazole Fungicides on Pathogens of Main Apple Diseases

WANG Li，ZHOU Zengqiang*，HOU Hui

(Zhengzhou Fruit Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou 450009，China)

The study aimed to provide theoretical basis for controlling apple disease using triazole fungicides.The toxicities of four triazole fungicides to pathogens of three apple diseases were tested by mycelium growth rate to screen out effective fungicides preliminarily,which were further used in the field control trial.The activity in laboratory studies disclosed that tebuconazole,pexaconazole,difenoconazole and propiconazole could efficiently inhibit mycelia growth ofBotryosphaeriadothidea,and their EC50values were 0.188 6,2.751 3,0.076 3,0.108 6 mg/L separately.They could also inhibit mycelia growth ofGlomerellacingulataandAlternariamali,with the EC50values of 0.438 0,47.512 0,0.720 0 ,1.876 6 mg/L,and 9.004 7,9.020 9,0.432 0,3.355 6 mg/L respectively.The field trials applying tebuconazole,difenoconazole and propiconazole in 2014 and 2015 showed that the control effect of 430 g/L tebuconazole SC against alternaria leaf spot in spring-growth stage was the best,82.74% and 85.32% respectively,but there was no significant difference among the three fungicides;10% difenoconazole WG was the best to preventGlomerellacingulata,and the control effects were 82.20% and 83.53% after the final spray,showing no obvious difference from tebuconazole;10% difenoconazole WG and 430 g/L tebuconazole SC both had good effects on apple ring rot,and the control effects were 80.97%,83.09% in 2014,and 81.04%,79.45% in 2015 at 30 days after storage,but there was no obvious difference between the two fungicides.Tebuconazole,difenoconazole and propiconazole had significant control effects on the three diseases,which were suggested to be used alternately in the growing season to prevent apple diseases.

triazole fungicides;Botryosphaeriadothidea;Glomerellacingulata;Alternariamali; virulence test; field control efficiency

2015-12-18

鄭州市重點科技攻關(guān)項目(131PZDGG317)；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程項目(CAAS-ASTIP)

王 麗(1981-)，女，河南正陽人，助理研究員，碩士，主要從事果樹病害研究。E-mail:wanlgi06@caas.cn

*通訊作者：周增強(1961-)，男，陜西眉縣人，副研究員，本科，主要從事果樹病害研究。E-mail:zhouzengqiang@caas.cn

S436.611.1

A

1004-3268(2016)07-0082-05