36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑的高效液相色譜分析

孫鈺潔 顏明

(江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，江蘇 南京 210036)

我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，農(nóng)業(yè)又是其它所有行業(yè)的基礎(chǔ)。農(nóng)作物的產(chǎn)量和安全生產(chǎn)是農(nóng)業(yè)發(fā)展的重中之重。農(nóng)作物生長(zhǎng)過(guò)程中容易遭受各種病蟲害侵襲，不可避免的需要使用農(nóng)藥。農(nóng)藥質(zhì)量和農(nóng)作物生長(zhǎng)密切相關(guān)。農(nóng)藥企業(yè)對(duì)農(nóng)藥生產(chǎn)中的質(zhì)量控制是保障農(nóng)藥質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。丙環(huán)唑作為一種內(nèi)吸性的三唑類殺菌劑，對(duì)環(huán)境具有保護(hù)和治療作用。丙環(huán)唑具有殺菌譜廣泛、活性高等優(yōu)點(diǎn)[1]，已成為目前最廣泛使用的農(nóng)作物殺菌劑之一。咪鮮胺是一種廣譜殺菌劑，可以與大多數(shù)殺菌劑、殺蟲劑、除草劑混用，提高農(nóng)作物病蟲害防治效果[2]。長(zhǎng)期使用單劑型農(nóng)藥，會(huì)使農(nóng)作物產(chǎn)生抗體，降低病蟲害防控效果。復(fù)配農(nóng)藥的使用可以避免這種情況的發(fā)生，還可以提高農(nóng)作物病蟲害防控效果。丙環(huán)唑和咪鮮胺復(fù)配制劑，可以提高單劑的殺菌效果。目前同時(shí)檢測(cè)丙環(huán)唑和咪鮮胺的方法比較少，已報(bào)道的有高效液相色譜法[3]，氣相色譜分析法[4]。氣相色譜法中需要內(nèi)標(biāo)定量，相對(duì)于高效液相色譜法操作較繁瑣。在已報(bào)道的高效液相色譜法中，采用了甲醇、乙腈和磷酸水溶液作流動(dòng)相，且流速較大，所用有機(jī)溶劑較多，且對(duì)色譜柱使用壽命有一定影響，但乙腈價(jià)格昂貴[5]。本文開發(fā)了一種高效液相色譜方法，用甲醇和水作流動(dòng)相，體積比為48∶52，流速1.0mL·min-1，進(jìn)樣體積5μL，整個(gè)分析過(guò)程30min內(nèi)完成。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

甲醇：默克色譜純；水：屈臣氏超純水；丙環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品：含量99.2%，淺黃色粘稠液體，上海市農(nóng)藥研究所提供；咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品：含量99.1%，白色固體粉末，上海市農(nóng)藥研究所提供；36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑，江蘇省揚(yáng)州市蘇靈農(nóng)藥化工有限公司提供。

1.2 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀；二極管陣列檢測(cè)器；色譜工作站；色譜柱：Eclipse XDB-C8不銹鋼柱(150mm×4.6mm，5μm)；萬(wàn)分之一天平；超聲波清洗器；微孔膜過(guò)濾器：孔徑0.45μm。

1.3 色譜操作條件

流動(dòng)相：等度洗脫，甲醇和水體積比為58∶42；流動(dòng)相流速為1.0mL·min-1。

柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm；進(jìn)樣體積：5μL；保留時(shí)間：丙環(huán)唑A約為20.77min，丙環(huán)唑B約為22.52min，咪鮮胺約為24.80min，見圖1。

圖1 36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑的高效液相色譜圖

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確分別稱取丙環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品0.02g(精確至0.0001g)和咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品0.05g(精確至0.0001g)，置于同一50mL容量瓶。稱完后容量瓶中加入30mL甲醇，放置于超聲清洗器中，超聲3min溶解完全。后靜置冷卻至室溫，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取1mL到進(jìn)樣小瓶備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱取36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑0.5g(精確至0.0001g)到50mL容量瓶。稱完后容量瓶中加入30mL甲醇，放置于超聲波清洗器中，超聲5min至溶解完全。后靜置冷卻至室溫，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45μm濾膜過(guò)濾，取1mL到進(jìn)樣小瓶備用。

1.4.3 測(cè)定

在以上條件下，待儀器平穩(wěn)后，按照標(biāo)樣、試樣、試樣、標(biāo)樣的順序進(jìn)樣，高效液相色譜分析數(shù)據(jù)。

1.4.4 計(jì)算

將重復(fù)測(cè)得的兩針樣品及樣品前后兩針標(biāo)樣的峰面積分別進(jìn)行平均計(jì)算，按如下公式計(jì)算丙環(huán)唑和咪鮮胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(X)，由于丙環(huán)唑是2個(gè)峰，因此丙環(huán)唑的定量是用2個(gè)峰面積相加的和來(lái)計(jì)算。

式中，A1為標(biāo)樣中丙環(huán)唑(咪鮮胺)峰面積平均值；A2為樣品中丙環(huán)唑(咪鮮胺)峰面積平均值；m1為丙環(huán)唑(或咪鮮胺)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為樣品的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中丙環(huán)唑(咪鮮胺)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

將丙環(huán)唑和咪鮮胺標(biāo)樣溶液，經(jīng)過(guò)Agilent1100高效液相色譜儀的DAD檢測(cè)器進(jìn)行紫外光譜掃描，得到丙環(huán)唑和咪鮮胺的紫外吸收光譜圖，掃描結(jié)果見圖2、圖3。由圖2、圖3可見，丙環(huán)唑和咪鮮胺在225nm波長(zhǎng)下均有較好吸收，且干擾較少，故本試驗(yàn)選擇225nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖2 丙環(huán)唑紫外吸收光譜圖

圖3 咪鮮胺紫外吸收光譜圖

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

為了實(shí)現(xiàn)丙環(huán)唑和咪鮮胺的有效分離，根據(jù)丙環(huán)唑和咪鮮胺兩化合物的特點(diǎn)，對(duì)甲醇和水按不同比例，在色譜柱上進(jìn)行選擇比較。當(dāng)甲醇和水的體積比為60∶40、流動(dòng)相流速為1.0mL·min-1時(shí)，丙環(huán)唑和咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品可以有效分離，且基線平穩(wěn)，峰型對(duì)稱，見圖4。但在此條件下分離36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑時(shí)，丙環(huán)唑A和樣品中雜質(zhì)不能完全分離，見圖5。調(diào)整流動(dòng)相比例，甲醇和水體積比為58∶42、流動(dòng)相流速為1.0mL·min-1時(shí)，丙環(huán)唑和咪鮮胺可以和樣品中雜質(zhì)完全分離，獲得滿意結(jié)果，標(biāo)準(zhǔn)品見圖6，樣品分離圖見圖1。由此分析結(jié)果可見，在色譜條件的選擇，可根據(jù)實(shí)際樣品的分析情況，調(diào)整流動(dòng)相比例，節(jié)約分析時(shí)間，減少分析成本。

圖4 甲醇∶水=60∶40(V/V)條件下丙環(huán)唑和咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖

圖5 甲醇∶水=60∶40(V/V)條件下36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑的高效液相色譜圖

圖6 甲醇∶水=58∶42(V/V)條件下丙環(huán)唑和咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖

2.2 方法線性關(guān)系的測(cè)定

用萬(wàn)分之一天平稱取丙環(huán)唑標(biāo)樣0.01g、0.02g、0.03g、0.06g、0.08g(精確至0.0001g)，咪鮮胺標(biāo)樣0.02g、0.04g、0.06g、0.08g、0.10g(精確至0.0001g)，分別至50mL容量瓶中，加入一定量的甲醇超聲溶解，再冷卻至室溫，定容到刻度搖勻。得到丙環(huán)唑和咪鮮胺的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按上述操作條件進(jìn)行測(cè)定。丙環(huán)唑在0.00022～0.00159g·mL-1、咪鮮胺在0.00040～0.00201g·mL-1有良好線性關(guān)系，分別以丙環(huán)唑和咪鮮胺的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)做圖，得到丙環(huán)唑線性方程為y=7621173.8080x+1830.1918，R2為0.9994，見圖7；咪鮮胺線性方程為y=23183046.58x-501.221，R2為0.9992，見圖8。結(jié)果表明，該方法條件下，檢測(cè)丙環(huán)唑和咪鮮胺的線性關(guān)系結(jié)果滿意。

圖7 丙環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液線性圖

圖8 咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)溶液線性圖

2.3 方法精密度測(cè)定

用萬(wàn)分之一天平分別稱取同一批次36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑6個(gè)樣品，用1.4.2過(guò)程處理樣品，按2.1色譜操作條件下進(jìn)行分析獲得結(jié)果，丙環(huán)唑和咪鮮胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.048、0.141，變異系數(shù)分別為0.47%、0.55%，見表1。數(shù)據(jù)表明，該方法條件下的精密度和重現(xiàn)性都很好。

表1 方法的精密度實(shí)驗(yàn)

2.4 方法準(zhǔn)確度測(cè)定

用萬(wàn)分之一天平分別稱取已知含量的36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑(丙環(huán)唑含量10.10%、咪鮮胺含量25.66%)樣品5份，并在稱取的5份樣品中分別添加一定數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)品。在上述操作條件下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得丙環(huán)唑的加標(biāo)回收率為98.52%～100.83%，平均加標(biāo)回收率為99.56%；咪鮮胺的加標(biāo)回收率為98.01%～101.20%，平均加標(biāo)回收率為99.41%，見表2。數(shù)據(jù)表明，該方法條件下的回收率和準(zhǔn)確度都很高。

表2 方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

3 結(jié)論

本方法的試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，在該操作條件下同時(shí)測(cè)定36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑的丙環(huán)唑和咪鮮胺，精密度高、準(zhǔn)確度高，分離效果都很好，并且經(jīng)濟(jì)環(huán)保。該方法是產(chǎn)品日常檢驗(yàn)較為理想的分析方法。本方法可以用于農(nóng)藥企業(yè)對(duì)于該類農(nóng)藥生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制，為農(nóng)藥質(zhì)量安全提供技術(shù)保障。