Mcl-1信號通路阻斷劑對H37Rv感染小鼠巨噬細胞凋亡的影響

Mcl-1信號通路阻斷劑對H37Rv感染小鼠巨噬細胞凋亡的影響*

張宇晴1, 4，王新敏5，王嬋2, 4，王飛雨1, 4，王小芳1, 4，趙瑾3,4，吳芳1,4，吳江東1, 4，季榕5，張萬江1, 4，章樂1, 4△

(石河子大學醫(yī)學院1病理生理學教研室,2病原生物學與免疫學教研室,3病理學教研室,4新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點實驗室，5第一附屬醫(yī)院，新疆 石河子832002)

[摘要]目的： 探討Mcl-1信號通路阻斷劑在結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染小鼠模型中對Mcl-1表達、巨噬細胞凋亡情況及結(jié)核分枝桿菌的影響。方法: 小鼠腹腔注射H37Rv菌懸液，建立感染小鼠模型，針對Mcl-1的信號通路選用JAK/STAT信號通路阻斷劑AG490、MAPK信號通路阻斷劑PD98059和PI3K信號通路阻斷劑LY294002用腹腔注射方式作用于各組感染小鼠模型，分為H37Rv感染組、AG490處理組、PD98059處理組、 LY294002處理組和對照組。通過細胞抗酸染色觀察結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬細胞的動物模型是否建立成功；通過免疫細胞化學檢測結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞的Mcl-1表達情況，使用流式細胞技術(shù)檢測各組巨噬細胞的凋亡率，采用結(jié)核分枝桿菌菌落計數(shù)來判斷巨噬細胞凋亡對結(jié)核分枝桿菌的清除效果。結(jié)果: 細胞抗酸染色結(jié)果可見感染的巨噬細胞內(nèi)散在排列的紅色短小抗酸結(jié)核分枝桿菌。免疫細胞化學結(jié)果顯示H37Rv感染組、AG490處理組和LY294002處理組中的Mcl-1蛋白為強陽性表達，PD98059處理組中Mcl-1蛋白為弱陽性表達，對照組Mcl-1蛋白為陰性表達。流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)H37Rv感染組巨噬細胞凋亡率較對照組高，PD98059處理組的凋亡率顯著高于各組，差異顯著(P<0.05)。結(jié)核分枝桿菌菌落計數(shù)結(jié)果顯示PD98059處理組對H37Rv菌株抑菌作用最明顯。結(jié)論: Mcl-1信號通路阻斷劑通過抑制JAK/STAT、MAPK和PI3K信號通路增加結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞的凋亡率，抑制結(jié)核分枝桿菌生長；其中，MAPK信號通路干擾Mcl-1的作用最明顯，感染的巨噬細胞凋亡率最高，抑菌作用最強。

[關(guān)鍵詞]Mcl-1； 細胞凋亡； 結(jié)核分枝桿菌； H37Rv； 巨噬細胞

[中圖分類號]R378.91+1; R363[文獻標志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.11.022

[文章編號]1000-4718(2015)11-2065-05

[收稿日期]2015-03-18[修回日期] 2015-07-14

[基金項目]*國家自然科學基金資助項目(No.81102088; No. 81441101)；天津市自然科學基金資助項目(No.12JCYBJC16600; No.13JCYBJC22000)；武警后勤學院附屬醫(yī)院重點項目(No.FYJ201510)；武警后勤學院附屬醫(yī)院種子基金資助項目(No.FYM201107; No. FYM201538)

通訊作者△姬文婕 Tel: 022-60577283； E-mail: ji_wenjie@hotmail.com； 魏路清 Tel: 022-60578671；E-mail:wei_luqing@hotmail.com

Effect of Mcl-1 signaling pathway blockers on apoptosis of mouse macrophages infected withMycobacteriumtuberculosisH37RvZHANG Yu-qing1，4, WANG Xin-min5, WANG Chan2，4, WANG Fei-yu1，4, WANG Xiao-fang1，4, ZHAO Jin3，4, WU Fang1，4, WU Jiang-dong1，4, JI Rong5, ZHANG Wan-jiang1，4, ZHANG Le1，4

(1DepartmentofPathophysiology,2DepartmentofPathogenBiology&Immunology,3DepartmentofPathology,4LaboratoryofXinjiangEndemicandEthnicDiseases,5TheFirstAffiliatedHospital,MedicalcollegeofShiheziUniversity,Shihezi832002,China.E-mail: 1257067540@qq.com)

ABSTRACT[]AIM: To explore the effects of Mcl-1 signal pathway blockers on Mcl-1 expression, macrophage apoptosis and Mycobacterium tuberculosis in the model of mice infected with Mycobacterium tuberculosis H37Rv. METHODS: A mouse infection model was established by intraperitoneal injection of H37Rv suspension. The signaling pathway blockers AG490, PD98059 and LY294002 for JAK/STAT, MAPK and PI3K, respectively, were intraperitoneally injected into the mice infected with H37Rv. Cell acid-fast staining was used to observe whether the mouse peritoneal macrophages infected with H37Rv were successfully established. Immunocytochemical method was employed to detect Mcl-1 expression in the mouse peritoneal macrophages infected with H37Rv. The apoptotic rate in each group was measured by flow cytomerty. The scavenging capacity of apoptotic macrophages against H37Rv was determined by Mycobacterium tuberculosis colony counting. RESULTS: The result of cell acid-fast staining revealed the existence of dispersive arrangement of red short antiacid Mycobacterium tuberculosis within infected macrophages. The result of cell immunocytochemistry showed strongly positive expression of Mcl-1 protein in H37Rv infection group, AG490 treatment group and LY294002 treatment group, weakly positive expression of Mcl-1 protein in PD98059 treatment group, and negative expression of Mcl-1 protein in control group. The result of flow cytometry found that the macrophage apoptotic rate in H37Rv infection group was higher than that in control group, while that in PD98059 treatment group was high than that in other groups with statistically significant differences (P<0.05). The result of Mycobacterium tuberculosis colony counting showed that PD98059 treatment had the most significant inhibitory effect on H37Rv strain. CONCLUSION: Mcl-1 signaling pathway blockers increase the apoptotic rate of macrophages infected with Mycobacterium tuberculosis H37Rv and inhibit the growth of Mycobacterium tuberculosis by inhibiting the signaling pathways of JAK/STAT, MAPK and PI3K, among which the MAPK has the most obvious interfering effect on Mcl-1, and leads to the highest apoptotic rate of infected macrophages and the strongest bacteriostasis.

[KEY WORDS]Mcl-1; Apoptosis;Mycobacteriumtuberculosis; H37Rv; Macrophages

結(jié)核病(tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)感染所引起的一種致殘率、病死率極高的傳染性疾病。髓細胞白血病1(myeloid cell leukemia-1，Mcl-1)屬于Bcl-2家族，正常情況下，Mcl-1通過與Bcl-2家族中的Bax結(jié)合來抑制細胞凋亡[1]，由于 Mcl-1受到正向調(diào)控而表達異常，導致單核巨噬細胞在吞噬結(jié)核分枝桿菌之后不能正常凋亡成為結(jié)核分枝桿菌理想的庇護所，因此，通過抑制Mcl-1的表達促進感染巨噬細胞的凋亡從而殺滅結(jié)核分枝桿菌成為可能。Mcl-1基因的表達主要是通過JAK/STAT、MAPK和PI3K/AKT等胞內(nèi)信號通路的激活進行的[2]，如果通過阻斷信號通路途徑抑制結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細胞中Mcl-1的表達則有可能導致受到感染的巨噬細胞凋亡從而殺死潛伏在其中的結(jié)核分枝桿菌，所以本研究使用JAK/STAT信號通路抑制劑AG490，MAPK信號通路阻斷劑PD98059和PI3K/AKT信號特異性抑制劑LY294002分別作用于感染H37Rv的BALB/c小鼠，通過觀察小鼠模型中結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞中Mcl-1的表達，檢測結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞凋亡率，通過結(jié)核分枝桿菌菌落計數(shù)判斷巨噬細胞凋亡對結(jié)核分枝桿菌的清除效果，探討Mcl-1信號通路阻斷劑在結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染小鼠巨噬細胞凋亡中的調(diào)控作用。

材料和方法

1材料

1.1菌株結(jié)核分枝桿菌國際標準強毒株H37Rv株購自中國藥物生物制品檢定所。

1.2實驗動物6～8周齡SPF級雌性BALB/c小鼠，體重18～20 g，購于石河子大學實驗動物中心。

1.3主要試劑Mcl-1兔多克隆抗體粉型，Mcl-1 多克隆抗體購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司；PV6001 polink-1辣根過氧化物酶檢測試劑盒購于中杉金橋；Annexin V-APC/7-AAD凋亡檢測試劑盒購自聯(lián)科生物技術(shù)有限公司；其余實驗試劑均取自石河子大學病理實驗室。

2方法

2.1實驗菌株及菌懸液的制備取生物安全柜內(nèi)改良羅氏培養(yǎng)基上生長2～3周狀態(tài)良好的結(jié)核分枝桿菌H37Rv菌落置滅菌研菌器中，加少量含0.05% Tween-20的生理鹽水溶液充分研磨，使其成均勻渾濁的菌懸液。麥氏比濁法調(diào)細菌濃度約1.0×1010CFU/L。

2.2動物模型的建立及分組實驗動物隨機分為5組，即H37Rv感染組、AG490處理組、PD98059處理組、 LY294002處理組和對照組，每組10只。

2.3小鼠感染模型的建立小鼠腹腔注射H37Rv結(jié)核分枝桿菌造模，注射量約為0.3 mL，AG490、PD98059和LY294002各100 μg經(jīng)腹腔注射方式作用于各組感染小鼠模型，對照組小鼠僅注射滅菌生理鹽水溶液0.3 mL，感染小鼠置生物安全三級實驗室內(nèi)，IVC籠具中飼養(yǎng)。在各組感染小鼠的動物模型復制注射后第5天剖殺小鼠，提取小鼠腹腔巨噬細胞。

2.4小鼠腹腔巨噬細胞的收集將小鼠脫頸處死，仰臥固定于操作臺，腹腔注入無血清DMEM培養(yǎng)液5 mL，靜置5 min，注射器抽取腹腔液約4 mL，離心洗滌后顯微鏡下計數(shù)，調(diào)整至所需濃度，接種于放有無菌蓋玻片的6孔板內(nèi)，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.5抗酸染色方法滴加復紅染色劑，染色 5 min，水洗。加3%鹽酸乙醇脫色1 min，水洗。加亞甲蘭復染劑，染色1 min，水洗待干?？顾崛旧Y(jié)核桿菌陽性菌體染后呈鮮紅色，胞核呈藍色。

2.6細胞免疫化學觀察I抗兔抗鼠Mcl-1(37 °C，1 h)，陰性對照以PBS代替I抗，PBS洗3次，每次5 min， II 抗為PV6001山羊抗兔IgG/HRP聚合物，PBS洗3次，每次5 min，DAB顯色，蘇木素復染2 min，中性樹脂封片。染色以細胞核或細胞漿中出現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞，高倍鏡視野下綜合細胞染色強度和陽性細胞所占比例進行評分，每張切片隨機觀察5個視野，計數(shù)500個細胞中陽性細胞所占比例進行評分。按染色百分數(shù)及強弱分成(-)～ (+++)進行定性判定：陽性細胞數(shù)<10%為(-)，10%～40% (+)，41%～70% (++)，>70% (+++)[3]。

2.7流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率按照Annexin V-APC/7-AAD凋亡檢測試劑盒說明書操作，取出細胞培養(yǎng)板，離心去除上清液，加入100 μL 1×binding buffer重懸細胞，輕輕混勻后，再加入5 μL Annexin V-APC和10 μL 7-AAD，避光孵育15 min，最后加入380 μL 1×binding buffer，30 min內(nèi)用流式細胞儀檢測。

2.8結(jié)核分枝桿菌菌落計數(shù)將取出的腹腔液放入離心機中，6 000 r/min離心20 min，去上清液，加入1 mL 1% Triton X-100對巨噬細胞進行裂解，鏡下觀察，待巨噬細胞全部裂解后(約10 min)，加入1 mL DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)終止裂解，微型振蕩器上振蕩混勻5 min，分別做10-2、10-3和10-4倍稀釋，接種于羅氏培養(yǎng)基，每個稀釋度涂布3個平板，置于37 ℃溫箱中培養(yǎng)，21 d后進行菌落計數(shù)。

3統(tǒng)計學處理

應(yīng)用SPSS 17.0軟件處理，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，組間比較用t檢驗或方差分析，方差分析后組間兩樣本均數(shù)的比較行q檢驗，計數(shù)資料或計量資料不服從正態(tài)性且方差不齊時采用非參數(shù)檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

1細胞抗酸染色

100倍物鏡明視野下，陽性病例可見感染的巨噬細胞內(nèi)散在排列的紅色短小抗酸桿菌，對照組均為陰性，見圖1。

Figure 1.Cell acid-fast staining.

圖1細胞抗酸染色

3檢測各組巨噬細胞凋亡率結(jié)果

流式細胞術(shù)分析結(jié)果顯示，H37Rv感染組細胞凋亡率較對照組高(P<0.05)，AG490處理組細胞凋亡率高于H37Rv感染組，LY294002處理組細胞凋亡率高于AG490處理組，PD98059處理組細胞凋亡率顯著高于各組細胞凋亡率(P<0.05)，見圖3、表1。

4結(jié)核分枝桿菌菌落計數(shù)

結(jié)核分枝桿菌菌落計數(shù)結(jié)果顯示，H37Rv感染組菌落數(shù)最高，各處理組菌落數(shù)均較H37Rv感染組低，H37Rv感染組與對照組之間差異顯著(P<0.05)，其中，PD98059處理組菌落數(shù)最低(P<0.05)，見圖4。

2小鼠腹腔巨噬細胞中Mcl-1的表達

Mcl-1主要在細胞漿表達，部分呈核質(zhì)型，陽性細胞胞漿或胞核呈淡黃色、黃色或棕黃色顆粒，50例5種不同組小鼠Mcl-1的陽性表達率分別如下：H37Rv感染組表達率為100%(10/10)，AG490處理組表達率為100%(10/10)，PD98059處理組為20%(2/10)， LY294002處理組為100%(10/ 10)。H37Rv感染組、AG490處理組和LY294002處理組中的Mcl-1蛋白為強陽性表達，PD98059處理組中Mcl-1蛋白為弱陽性表達，對照組Mcl-1蛋白為陰性表達，Mcl-1蛋白在H37Rv感染組與對照組之間差異顯著(P<0.05)，見圖2、表1。

討論

有研究發(fā)現(xiàn)，用活菌 H37Ra 或滅活菌H37Rv 感染小鼠腹腔巨噬細胞 10 h 后抗酸染色即可計數(shù)、觀察巨噬細胞吞噬活菌的情況[4]，實驗中細胞抗酸染色技術(shù)發(fā)現(xiàn)巨噬細胞內(nèi)吞噬的結(jié)核分枝桿菌，抗酸染色技術(shù)特異性高，可以明確診斷結(jié)核疾病[5]，是結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬細胞造模成功的保證。

Figure 2.The expression of Mcl-1 in infected macrophages.

圖2各組感染巨噬細胞中Mcl-1的表達

Figure 3.The apoptotic rate ofMycobacteriumtuberculosin-infected macrophages detected by flow cytometry.

圖3流式細胞術(shù)檢測感染結(jié)核分枝桿菌巨噬細胞的凋亡率

表1　Mcl-1在感染巨噬細胞中的表達和各組感染巨噬細胞的凋亡率

*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsH37Rv;△P<0.05vsAG490;▲P<0.05vsPD98059.

Figure 4.Colony-forming unit counting ofMycobacteriumtuberculosisin the mouse peritoneal macrophages (log10CFU). Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsH37Rv group;△P<0.05vsAG490 group;▲P<0.05vsPD98059 group.

圖4各組巨噬細胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌菌落計數(shù)

另有研究發(fā)現(xiàn)Mcl-1在感染的巨噬細胞中高表達，Mcl-1的過表達可以抑制細胞凋亡，在感染的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[6]。同時，Mcl-1也可參與細胞凋亡和細胞周期的調(diào)節(jié)及細胞對藥物敏感性等[7]。結(jié)核分枝桿菌是一種典型的胞內(nèi)致病菌，結(jié)核免疫主要是細胞免疫，結(jié)核分枝桿菌侵入機體，既可被巨噬細胞吞噬和殺滅，也可通過多種特殊受體逃避殺傷機制而在巨噬細胞中存活、繁殖。Sly等[8]證實結(jié)核分枝桿菌通過上調(diào)Mcl-1等抗凋亡基因的表達，抑制或下調(diào)巨噬細胞的凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞后，巨噬細胞中Mcl-1的表達水平在感染4 h后開始升高，24 h達到高峰，一直維持到感染的48 h，有文獻報道[9]在小鼠感染模型復制成功后第9天巨噬細胞凋亡率最高，9 d之后逐漸降低，為了研究Mcl-1與細胞凋亡率的關(guān)系，本實驗選在小鼠感染結(jié)核分枝桿菌H37Rv的第3天注射信號通路阻斷劑，以小鼠感染注射模型的第5天(即感染結(jié)核分枝桿菌H37Rv的第9天)作為時間節(jié)點，實驗發(fā)現(xiàn)H37Rv感染組中Mcl-1呈強陽性表達，結(jié)核分枝桿菌誘導巨噬細胞凋亡率較低，實驗結(jié)果證實結(jié)核分枝桿菌H37Rv通過上調(diào)Mcl-1的表達來抑制巨噬細胞的凋亡。提示Mcl-1過表達可抵抗結(jié)核分枝桿菌感染中的巨噬細胞凋亡，導致結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細胞中的凋亡平衡受到異常調(diào)控，巨噬細胞凋亡量減少。

結(jié)核分枝桿菌感染宿主細胞后，所涉及的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導通路較為肯定的有JAK/STAT、MAPK、PI3K/AKT等。這些信號轉(zhuǎn)導通路的持續(xù)激活導致Mcl-1的表達上調(diào)，Tsutsui等[10]研究證實在NK/T細胞淋巴瘤細胞株中，AG490通過阻斷JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導通路抑制STAT3的活化來下調(diào)Mcl-1表達，從而促進腫瘤細胞的凋亡，在人巨細胞病毒中，抑制ERK-MAPK 依賴的通路中蛋白的轉(zhuǎn)錄，Mc1-1蛋白的水平下調(diào)[11]，ERK 1/2的特異性抑制劑PD98059常作為MAPK傳遞途徑的生物阻斷劑來研究細胞的凋亡，通過抑制MEK的活性來抑制ERK的磷酸化，起到阻斷MAPK信號通路的作用[12]，Gao等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在人白血病細胞系中，LY294002可通過抑制AKT的活性來下調(diào)Mcl-1蛋白的表達，增加抗腫瘤劑的殺傷力。本研究應(yīng)用JAK酶抑制劑AG490、MAPK抑制劑PD98059和PI3K蛋白激酶抑制劑LY294002作用于感染H37Rv的小鼠模型，觀察結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞凋亡中Mcl-1的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AG490處理組和LY294002處理組中的Mcl-1表達水平較感染組無變化，PD98059處理組中Mcl-1的表達水平明顯受到抑制，流式細胞技術(shù)檢測各處理組的巨噬細胞凋亡率，結(jié)果顯示各組巨噬細胞凋亡率較對照組均升高。結(jié)核桿菌菌落數(shù)結(jié)果顯示，H37Rv感染組菌落數(shù)較高，各處理組菌落數(shù)較H37Rv感染組低，實驗結(jié)果說明，Mcl-1信號通路阻斷劑AG490、PD98059和LY294002可以通過阻斷JAK/STAT、MAPK和PI3K信號通路來增加結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞凋亡率，從而殺死潛伏其中的結(jié)核分枝桿菌。

研究發(fā)現(xiàn)，RAS-RAF-MEK-ERK信號通路可導致PI3K/AKT通路的活化[14]，巨噬細胞感染結(jié)核分枝桿菌后，可能通過激活酪氨酸蛋白激酶、使JAK2/STAT1-α磷酸化，STAT1-α受到活化誘導細胞生成大量TNF-α[15]，caspase酶系的活性增強，從而啟動凋亡。Caspase酶系對Mcl-1的分解作用可能是Mcl-1表達下調(diào)的主要原因，由此推測，AG490、PD98059和LY294002阻斷JAK/STAT、MAPK和PI3K信號通路后，TNF-α作用受到抑制，caspase酶系活性降低，Mcl-1表達水平上調(diào)，TNF-α受到抑制致使Mcl-1上調(diào)的這種作用可能拮抗了信號通路阻斷劑所致的Mcl-1下調(diào)的作用，導致AG490處理組和LY294002處理組中Mcl-1的表達水平無明顯變化，在MAPK信號通路中，TNF-α受p38 MAPK和ERK兩條支路調(diào)控，實驗中，PD98059處理組干擾Mcl-1的作用最明顯，巨噬細胞凋亡率最高，這種現(xiàn)象可能是由于ERK支路被阻斷后，p38 MAPK通路活化生成大量TNF-α，caspase酶系活性增加，Mcl-1的表達下調(diào)。結(jié)核桿菌菌落數(shù)結(jié)果顯示，各處理組中PD98059處理組菌落數(shù)最低，實驗結(jié)果說明PD98059通過抑制結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞中Mcl-1明顯增加巨噬細胞的凋亡從而殺滅結(jié)核分枝桿菌，實驗結(jié)果提示MAPK信號通路在結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞中起著重要的作用。

細胞凋亡受多種因子及信號途徑的調(diào)節(jié)，結(jié)核的發(fā)生發(fā)展也是多途徑共同作用的結(jié)果，在結(jié)核分枝桿菌感染中，巨噬細胞的凋亡、結(jié)核分枝桿菌的清除是通過 Mcl-1信號通路途徑JAK/STAT、MAPK和 PI3K/AKT轉(zhuǎn)導的，我們通過應(yīng)用信號通路阻斷劑AG490、PD98059和LY294002來抑制Mcl-1的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PD98059明顯抑制結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞中Mcl-1的表達，結(jié)核分枝桿菌的清除作用增加，由于多種生存和分化信號參與了Mcl-1表達的調(diào)節(jié)，JAK/STAT、MAPK、 PI3K/AKT、Mcl-1與其它凋亡調(diào)節(jié)基因及信號分子之間的相互作用尤其復雜，下一步實驗將進一步研究Mcl-1與其它信號通路間的相互作用，希望信號通路阻斷劑在結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染巨噬細胞凋亡中對Mcl-1的抑制作用可以為結(jié)核疾病開辟一條新的治療途徑。

[參考文獻]

[1]Kodama T, Hikita H, Kawaguchi T, et al. Mc1-1 and Bcl-xL regulate Bak/Bax-dependent apoptosis of the megakaryocytic lineage at multistages[J]. Cell Death Differ, 2012, 19(11):1856-l869.

[2]Thomas LW, Lam C, Edwards SW. Mcl-1; the molecular regulation of protein function[J]. FEBS Lett， 2010, 584(14):2981-2989.

[3]楊威，胡虞乾，楊紅杰，等. Mcl-1在肝硬化和肝癌組織中的表達及臨床意義[J].華夏醫(yī)學, 2013, 26(6):1052-1056.

[4]何宗林，杜先智. 活菌H37Ra與滅活菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬細胞的實驗研究[J]. 中國免疫學雜志, 2011, 27(8):675-680.

[5]Kohli R, Punia RS, Kaushik R, et al. Relative value of immunohistochemistry in detection of mycobacterial antigen in suspected cases of tuberculosis in tissue sections[J]. Indian J Pathol Microbiol, 2014, 57(4):574-578.

[6]王嬋，王新敏，王飛雨，等. Mcl-1短發(fā)夾RNA在Raw264.7細胞內(nèi)特異性的篩選 [J]. 中國免疫學雜志, 2015, 31(2):151-155.

[7]Karami H, Baradaran B, Esfehani A, et al. Down-regulation of Mcl-1 by small interference RNA induces apoptosis and sensitizes HL-60 leukemia cells to etoposide[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2014, 15(2):629-635.

[8]Sly LM, Hingley-Wilson SM, Reiner NE, et al. Survival ofMycobacteriumtuberculosisin host macrophages involves resistance to apoptosis dependent upon induction of antiapoptotic Bcl-2 family member Mcl-1[J].J Immunol, 2003, 170(1):430-437.

[9]董江濤，徐芳，田璽擇，等. 不同毒力結(jié)核分枝桿菌感染小鼠對肺泡巨噬細胞的凋亡率及其 時相性變化的影響[J]. 中國免疫學雜志, 2012, 28(5):389-392.

[10]Tsutsui M, Yasuda H, Suto H, et al. Frequent STAT3 activation is associated with Mcl-1 expression in nasal NK-cell lymphoma[J]. Int J Lab Hematol, 2010, 32(4):419-426.

[11]Reeve MB, Breidenstein A, Compton T. Human cytomegalovirus activation of ERK and myeloid cell leukemia-1 protein correlates with survival of latently infected cells [J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2012, 109(2):588-593.

[12]Mazzon E, Impellizzeri D, Di paola R, et al. Effects of mitogen-activated protein kinase signaling pathway inhibition on the development of cerulein-induced acute pancreatitis in mice[J]. Pancreas, 2012, 41(4):560-570.

[13]Gao N, Cheng S, BudHraja A, et al. 3, 3’-Diindolylmethane exhibits antileukemic activityinvitroandinvivothrough a Akt-dependent process[J]. PLoS One, 2012, 7(2):1-10.

[14]Yajima I, Kumasaka MY, Thang ND, et al. RAS/RAF/MEK/ERK and PI3K/PTEN/AKT signaling in malignant melanoma progression and therapy[J]. Dermatol Res Pract, 2012, 2012:354191.

[15]Subbian S, O’Brien P, Kushner NL, et al. Molecular immunologic correlates of spontaneous latency in a rabbit model of pulmonary tuberculosis[J]. Cell Commun Signal, 2013, 11(1):16.

(責任編輯： 陳妙玲， 羅森)

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