燙傷藥水噴霧劑促進(jìn)大鼠燙傷愈合實(shí)驗(yàn)研究 ※

燙傷藥水噴霧劑促進(jìn)大鼠燙傷愈合實(shí)驗(yàn)研究※

張星馬朝群△

(南京中醫(yī)藥大學(xué)2012級(jí)碩士研究生，江蘇南京210023)

【摘要】目的觀(guān)察燙傷藥水噴霧劑對(duì)大鼠燙傷創(chuàng)面愈合的影響。方法將150只淺Ⅱ度燙傷SD大鼠模型隨機(jī)分為5組，即實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組(燙傷藥水噴霧劑)，陽(yáng)性對(duì)照組(磺胺嘧啶銀軟膏)，陰性對(duì)照組(基質(zhì)軟膏)，每組各30只。5組大鼠制備淺Ⅱ度燙傷模型后，陰性對(duì)照組予基質(zhì)軟膏外涂，剩余4組分別予相應(yīng)藥物外涂或外噴。于燙傷后第2、7、14 d隨機(jī)取各組大鼠各10只，計(jì)算創(chuàng)面愈合率；第1、2、3 d隨機(jī)取各組大鼠各10只，截取創(chuàng)面皮膚，計(jì)算組織含水量；第5、10、15 d 8：00取各組剩余10只大鼠，計(jì)算大鼠新生毛細(xì)血管生長(zhǎng)情況。結(jié)果第2、7、14 d實(shí)驗(yàn)中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組創(chuàng)面愈合率高于陰性對(duì)照組同期(P<0.01)，第7、14 d實(shí)驗(yàn)高劑量組創(chuàng)面愈合率高于陰性對(duì)照組同期(P<0.01)，第2、7 d實(shí)驗(yàn)低劑量組創(chuàng)面愈合率高于陰性對(duì)照組同期(P<0.05)；第1、2、3 d實(shí)驗(yàn)中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組創(chuàng)面組織含水量均低于陰性對(duì)照組同期(P<0.01，P<0.05)，第1、2 d實(shí)驗(yàn)高、低劑量組創(chuàng)面組織含水量低于陰性對(duì)照組同期(P<0.05)。第5、10、15 d實(shí)驗(yàn)高、中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)均高于陰性對(duì)照組同期(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論燙傷藥水噴霧劑具有減少燙傷組織水腫，促進(jìn)大鼠創(chuàng)面愈合的良好作用。

【關(guān)鍵詞】大鼠；疾病模型，動(dòng)物；傷口愈合；燒傷；外用藥；中藥療法

doi：10.3969/j.issn.1002-2619.2015.06.026

【中圖分類(lèi)號(hào)】R-332；R64；R644.053.1

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-2619(2015)06-0871-04

通訊作者：△江蘇省中醫(yī)院普外科，江蘇南京210029

作者簡(jiǎn)介：張星(1983—)，男，住院醫(yī)師，碩士研究生在讀，學(xué)士。

Abstract【】ObjectiveTo observe the healing effects of scald lotion spray on scalded wound in rats. Methods150 SD rats (shallow Ⅱ degree scald model) were randomly divided into 5 groups：the experimental high-，middle-，low-dose group (scald lotion spray)，positive control group (sulfadiazine silver ointment) and negative control group (matrix ointment)，30 rats in each group. After shallow Ⅱ degree scald modeling，rats in negative control group were received matrix ointment for external use，and rats in other four groups were received corresponding drugs for external use.10 rats were randomly selected in each group，and the wound healing rate was detected on the second，seventh and fourteenth day after scald. 10 rats were randomly selected in each group that removed skin after anesthesia on the first，second and third day of experiment，and the tissue water content was calculated. The remaining 10 rats in each group were selected，and the growth situations of newly born capillaries on skin tissue were observed on the 5，10，15 d at 8 am in order to evaluated the regenerative capacity of scald lotion spray on scald wound healing. ResultsThe wound healing rate in experimental middle-dose group and positive control group was higher than that in negative control group on 2，7，14 d (P<0.01)，the wound healing rate in experimental high-dose group was higher than that in negative control group on 7，14 d (P<0.01)，as well as the esperimental low-dose group on 2，7 d (P<0.05). The tissue water content in experimental middle-dose group and positive control group was lower than that in positive control group on 1，2，3 d (P<0.01，P<0.05)，as well as the experimental high-，low-dose group(P<0.05).The amounts of newborn blood capillary in experimental high-dose，middle-dose and positive group was higher than that in negative group (P<0.05，P<0.01). ConclusionScald lotion spray has good effects on the promoting wound healing in rats involves reduce scalded tissue edema in rats.

收稿日期：(2014-05-19)

※項(xiàng)目來(lái)源：江蘇省中醫(yī)藥局科技項(xiàng)目(編號(hào)：LZ11023)

研究方向：普外科。

Experimental study of scald lotion spray on the promoting scald wound healing in ratsZHANGXing*，MAChaoqun.*PostgraduateofNanjingTraditionalChineseMedicineUniversity，Classof2012，Jiangsu，Nanjing210023

【Key words】Rat；Disease models；Animal；Wound healing；Burn injury；Traditional Chinese medicine therapy；External application drugs

隨著時(shí)代及經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，燙傷的發(fā)病率逐年增高，在日常生活中，因意外燙傷引起的皮膚損傷非常多見(jiàn)。治療燙傷的中藥使用廣泛，劑型豐富，并且近些年來(lái)在借鑒了西醫(yī)及當(dāng)代生物科技后，中藥治療燙傷制劑有了大幅度發(fā)展[1-2]。燙傷藥水噴霧劑是江蘇省中醫(yī)院外科臨床常年使用的特色外用藥物，治療小面積燙傷效果良好，適用于臨床常見(jiàn)的小面積Ⅰ、Ⅱ度燙傷。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠淺Ⅱ度燙傷模型，外噴燙傷藥水噴霧劑，觀(guān)察其對(duì)促進(jìn)大鼠燙傷愈合的作用，結(jié)果如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠(清潔級(jí))150只，雌雄各半，體質(zhì)量190~220 g，南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(浙)2008-0033。

1.1.2實(shí)驗(yàn)儀器恒溫水浴鍋(HH-1A型，J2082，南京環(huán)科實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)，數(shù)碼相機(jī)(佳能D50)，電子天平(HANG PING牌YP102N型，上海精密儀器有限公司)，冷凍干燥機(jī)(北京松源華興科技發(fā)展有限公司)，50 mL噴霧瓶5只。

1.1.3實(shí)驗(yàn)試劑及藥品燙傷藥水噴霧劑(江蘇省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，蘇藥制字Z0400054)，藥物組成為虎杖、地榆、黃連、忍冬藤、大黃、冰片等，以浸漬法、醇提法及水提法等提取相關(guān)成分，合并濾液，以適量乙醇溶解冰片，再加入95%乙醇，至測(cè)定乙醇濃度為75%，分別制備濃度相當(dāng)于含生藥10、20、30 g的藥水各500 mL；磺胺嘧啶銀軟膏(每支含1%磺胺嘧啶銀 40 g，廣東恒健制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H44020614)；70%酒精 500 mL；10%水合氯醛50 mL；0.9%氯化鈉注射液500 mL 2瓶。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1大鼠燙傷模型建立首先制作動(dòng)物固定板，25 cm×20 cm×1.0 cm的木板1塊，在其中心摳出一長(zhǎng)軸為7.7 cm，短軸為4.3 cm的標(biāo)準(zhǔn)橢圓型孔備用，橢圓面積26 cm2[1]。150只大鼠飼養(yǎng)1周后，稱(chēng)體質(zhì)量，剃毛器脫毛，70%酒精消毒，然后以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，將制作好的木板覆蓋在去毛后的大鼠背部，恒溫水浴箱溫度設(shè)定在75 ℃，將4層無(wú)菌紗布浸泡在水浴箱內(nèi)，10 s后取出，均勻覆蓋在大鼠背部裸露處15 s，用0.9%氯化鈉注射液沖洗，無(wú)菌紗布擦干水分[2]，形成淺Ⅱ度燙傷模型(病理切片證實(shí))。

1.2.2動(dòng)物分組燙傷后30 min將150只大鼠隨機(jī)分為5組，即陰性對(duì)照組(基質(zhì)軟膏組)、陽(yáng)性對(duì)照組(磺胺嘧啶銀軟膏組)、實(shí)驗(yàn)低劑量組(相當(dāng)于含提取液生藥10 g)、實(shí)驗(yàn)中劑量組(相當(dāng)于含提取液生藥20 g)、實(shí)驗(yàn)高劑量組(相當(dāng)于含提取液生藥30 g)，分籠飼養(yǎng)。

1.2.3給藥方法陰性對(duì)照組予基質(zhì)軟膏燙傷部位外涂，陽(yáng)性對(duì)照組予磺胺嘧啶銀軟膏燙傷部位外涂，均每日1次，每次每只大鼠約20 mg。實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組分別予相應(yīng)藥液外噴，3噴，約10 mL，每日1次。

1.3檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1創(chuàng)面面積愈合率于燙傷后第2、7、14 d 8：00隨機(jī)取各組各大鼠10只，固定，裸露燙傷創(chuàng)面，以相同焦距、相同距離，用數(shù)碼相機(jī)拍攝創(chuàng)面，并輔以ImageJ軟件，計(jì)算燙傷創(chuàng)面面積，并予以記錄，然后按公式計(jì)算創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率=[(原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積]×100%。

1.3.2創(chuàng)面組織含水量于燙傷后第1、2、3 d 8：00隨機(jī)取各組各大鼠10只，以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，截取1.5 cm×1.5 cm創(chuàng)面皮膚，每次取2塊，電子天平稱(chēng)質(zhì)量，后將其干燥后再稱(chēng)質(zhì)量，計(jì)算組織含水量。

1.3.3新生毛細(xì)血管觀(guān)察于燙傷后第5、10、15 d 8：00取各組剩余10只大鼠，以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，截取1.5 cm×1.5 cm創(chuàng)面皮膚，每次取2塊，固定于4%甲醛溶液，24 h后用酒精逐級(jí)脫水，二甲苯透明2次，石蠟包埋切片，蘇木精—伊紅(HE)染色，病理圖文分析系統(tǒng)計(jì)算各組大鼠新生毛細(xì)血管生長(zhǎng)情況。

2結(jié)果

2.15組大鼠創(chuàng)面愈合率比較見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，第2、7、14 d實(shí)驗(yàn)中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組創(chuàng)面愈合率高于陰性對(duì)照組同期(P<0.01)，第7、14 d實(shí)驗(yàn)高劑量組創(chuàng)面愈合率高于陰性對(duì)照組同期(P<0.01)，第2、7 d實(shí)驗(yàn)低劑量組創(chuàng)面愈合率高于陰性對(duì)照組同期(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面愈合率與陽(yáng)性對(duì)照組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第2 d實(shí)驗(yàn)中劑量組創(chuàng)面愈合率高于實(shí)驗(yàn)高劑量組同期(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)中劑量組與低劑量組同

表1　5組大鼠創(chuàng)面愈合率比較　 ± s

期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)低劑量組創(chuàng)面愈合率與高劑量組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；第7 d實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面愈合率同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；第14 d實(shí)驗(yàn)中劑量組創(chuàng)面愈合率高于實(shí)驗(yàn)高劑量組和低劑量組同期(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)高劑量組與低劑量組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.25組大鼠創(chuàng)面組織含水量比較見(jiàn)表2。

表2　5組大鼠創(chuàng)面組織含水量比較　 ± s

由表2可見(jiàn)，第1、2、3 d實(shí)驗(yàn)中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組創(chuàng)面組織含水量均低于陰性對(duì)照組同期(P<0.01，P<0.05)，第1、2 d實(shí)驗(yàn)高、低劑量組創(chuàng)面組織含水量低于陰性對(duì)照組同期(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面組織含水量與陽(yáng)性對(duì)照組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第1、2、3 d實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面組織含水量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.35組大鼠創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)比較見(jiàn)表3。

表3　5組大鼠創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)比較　條， ± s

由表3可見(jiàn)，第5、10、15 d，實(shí)驗(yàn)高、中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)均高于陰性對(duì)照組同期(P<0.05，P<0.01)，實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)與陽(yáng)性對(duì)照組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第10 d實(shí)驗(yàn)高劑量組及實(shí)驗(yàn)低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)均低于實(shí)驗(yàn)中劑量組(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)高劑量組與實(shí)驗(yàn)低劑量組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；第5、15 d實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

燙傷的原因主要包括火焰、熾熱液體和固體化學(xué)物質(zhì)等致傷因素，屬中醫(yī)學(xué)“不內(nèi)外因”范疇[3-5]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，燙傷乃由火毒傷肌膚，氣滯水阻血瘀，傷處紅腫熱痛，可見(jiàn)水皰[6]。燙傷藥水噴霧劑方中虎杖清熱解毒，散瘀止痛，易收斂，為君藥。地榆涼血止血，解毒斂瘡；忍冬藤清熱疏風(fēng)，通絡(luò)止痛；大黃、黃連清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀活血，均為臣藥。冰片清熱止痛，止癢防腐，為佐使。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，創(chuàng)面愈合是機(jī)體修復(fù)各種損傷造成的組織缺失，通過(guò)再生及修復(fù)等手段，以恢復(fù)機(jī)體組織結(jié)構(gòu)及功能完整性的過(guò)程。順利完成愈合過(guò)程的基礎(chǔ)是多種愈合相關(guān)細(xì)胞生物學(xué)功能的正常發(fā)揮，并依賴(lài)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)及生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子在內(nèi)的可溶性介質(zhì)之間的相互作用[7]。本研究結(jié)果顯示，第2、7、14 d燙傷藥水噴霧劑能顯著提高大鼠創(chuàng)面愈合率，但與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第2 d實(shí)驗(yàn)中劑量組創(chuàng)面愈合率高于實(shí)驗(yàn)高劑量組同期(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)中劑量組與低劑量組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)低劑量組創(chuàng)面愈合率與高劑量組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；第7 d實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面愈合率同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；第14 d實(shí)驗(yàn)中劑量組創(chuàng)面愈合率高于實(shí)驗(yàn)高劑量組和低劑量組同期(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)高劑量組與低劑量組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

燙傷早期滲出，凝固性壞死組織周?chē)氖軗p皮膚組織局部血管擴(kuò)張、血流增加、流速減慢，同時(shí)在炎癥介質(zhì)作用下血管通透性增高，血液成分外滲。燒傷創(chuàng)面滲出的一個(gè)特點(diǎn)是受熱力損壞的變性膠原還可吸附滲出的鈉及水分，使?jié)B出進(jìn)一步加重，臨床表現(xiàn)為創(chuàng)面腫脹和體液外滲。所以在燙傷早期控制水腫很關(guān)鍵，測(cè)定組織含水量是評(píng)定療效的一個(gè)方面。本研究結(jié)果顯示，第1、2、3 d燙傷藥水噴霧劑能顯著降低創(chuàng)面組織含水量，減少燙傷創(chuàng)面早期水腫及滲出。第1、2、3 d實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面組織含水量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

機(jī)體血管系統(tǒng)的生成可分為血管發(fā)生和血管新生2種不同過(guò)程。血管新生是指內(nèi)皮前體細(xì)胞，即成血管細(xì)胞分化成內(nèi)皮細(xì)胞，形成原始血管網(wǎng)的過(guò)程。血管生成是指從已存在的血管以生芽方式長(zhǎng)出新毛細(xì)血管的過(guò)程。過(guò)去人們認(rèn)為成人血管僅由血管新生來(lái)維持和修復(fù)，然而循環(huán)中內(nèi)皮祖細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)提示出生后也可能存在血管發(fā)生[8]。故測(cè)定創(chuàng)面新生毛細(xì)血管數(shù)是檢測(cè)燙傷修復(fù)的一個(gè)重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，第5、10、15 d 燙傷藥水噴霧劑能顯著增加創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。第10 d實(shí)驗(yàn)高劑量組及實(shí)驗(yàn)低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)均低于實(shí)驗(yàn)中劑量組(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)高劑量組與實(shí)驗(yàn)低劑量組同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，第5、15 d實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管數(shù)同期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

現(xiàn)代藥理研究表明，燙傷藥水噴霧劑方中地榆具有良好的止血，抗炎，促進(jìn)傷口愈合的作用，其中含有的鞣質(zhì)，可以促進(jìn)凝血[9]；虎杖對(duì)金黃色葡萄球菌等多種細(xì)菌均有抑制作用，能促使創(chuàng)面局部收縮型血管轉(zhuǎn)變?yōu)閿U(kuò)張型，促進(jìn)新生毛細(xì)血管生成，改善微循環(huán)及周?chē)M織血供，促進(jìn)創(chuàng)面愈合[9]。黃連能減輕早期創(chuàng)面炎性滲出[10]；大黃有較強(qiáng)的抗菌作用，抗菌譜廣，其中以大黃酸、大黃素和蘆薈大黃素抗菌作用最強(qiáng)；冰片有良好的揮發(fā)作用，使創(chuàng)面干燥，并具良好的透皮吸收功效，從而減輕燙傷創(chuàng)面早期水腫，用其外敷還可降低體溫，預(yù)防毒血癥的發(fā)生[10]。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)中劑量組在創(chuàng)面愈合率及新生毛細(xì)血管、組織含水量方面療效均優(yōu)于低劑量組及高劑量組。低劑量組可能為藥物濃度偏低，未達(dá)到最佳治療濃度，而高劑量組濃度偏高，不良反應(yīng)系數(shù)增高，如刺激創(chuàng)面，造成滲出過(guò)多等。因此,實(shí)驗(yàn)中劑量組最佳。在組織含水量的指標(biāo)中，隨著時(shí)間的推移，2個(gè)指標(biāo)數(shù)值均降低，但實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組的數(shù)值降低更為明顯，以實(shí)驗(yàn)中劑量組為最優(yōu)。新生毛細(xì)血管指標(biāo)中，隨時(shí)間推移，數(shù)值均降低，但實(shí)驗(yàn)高、中、低劑量組隨時(shí)間推移數(shù)值降低較對(duì)照組緩慢，15 d時(shí)，數(shù)值仍較高。燙傷藥水噴霧劑可通過(guò)減輕燙傷創(chuàng)面早期的水腫及滲出，促進(jìn)創(chuàng)面組織新生毛細(xì)血管生成，從而發(fā)揮其促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合、提高愈合率的功效。

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(本文編輯：董軍杰)

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