內皮型一氧化氮合酶基因G894T多態(tài)性與陰虛體質型缺血性卒中的關系 ※

內皮型一氧化氮合酶基因G894T多態(tài)性與陰虛體質型缺血性卒中的關系※

韓媛媛李雪青△

(河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院普外科，河北唐山063000)

【關鍵詞】卒中；一氧化氮合酶；基因；多態(tài)性，單核苷酸；陰虛；體質學說

doi：10.3969/j.issn.1002-2619.2015.06.018

【中圖分類號】R743.302.5；R394.33；R363.26

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-2619(2015)06-0850-03

通訊作者：△河北聯(lián)合大學中醫(yī)學院針灸推拿教研室，河北唐山063000

作者簡介：韓媛媛(1971—)，女，副主任護師。研究方向：卒中的中醫(yī)體質研究。

收稿日期：(2014-02-08)

※項目來源：河北省中醫(yī)藥管理局2013年度中醫(yī)藥類科研計劃課題(編號：2013073)

腦血管病是中老年人常見病、多發(fā)病、疑難病，以其高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率受到國內外重視，成為中西醫(yī)治療研究的熱點。缺血性卒中約占全部卒中的70%[1]。我國調查顯示，缺血性卒中年發(fā)病率為109.7～217/10萬，患病率為719～745.6/10萬，死亡率116～141.8/10萬[2-3]。流行病學研究表明，體質相關基因在缺血性卒中發(fā)病中具有重要作用[4]。缺血性卒中除少數(shù)人是由于單基因病引起外，大部分是由體質、遺傳等因素共同作用導致的復雜性疾病。

體質因素決定著個體生理反應的特異性及其對某種致病因子的易感性和所產生病變類型的傾向性。因此在很大意義上，糾正體質偏頗是臨床研究的方向[5]。有統(tǒng)計顯示[6]，在168例以60~70歲為主的缺血性卒中患者中，陰虛體質占20.2%。近年來研究表明，內皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多態(tài)性可能與缺血性卒中的發(fā)生密切相關。但是關于eNOS基因多態(tài)性與陰虛體質導致缺血性卒中之間關系，國內外未見報道。陰虛體質、陰虛體質缺血性卒中基因表達的差異研究將有助于從基因水平闡明缺血性卒中的發(fā)病機制，并進行有效的早期干預。

1資料與方法

1.1病例選擇

1.1.1診斷標準陰虛體質依據(jù)王琦《中醫(yī)體質分類判定標準》[7]確診。缺血性卒中依據(jù)第四屆全國腦血管病學術會議修訂的“各類腦血管疾病診斷要點”確診[8]。

1.1.2排除標準排除心源性卒中、動脈炎、腦血管畸形或腦腫瘤等其他病因及不明原因導致的缺血性卒中；年齡<45歲，>70歲；短暫性腦缺血發(fā)作、可逆性神經(jīng)功能缺損；伴有心血管、肝腎、造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾?。毁Y料不全者；非陰虛體質者。

1.2一般資料選取2012-06—2014-06在河北聯(lián)合大學附屬醫(yī)院神經(jīng)內科380例及河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院神經(jīng)內科212例住院患者及體檢人員592例，依據(jù)診斷分為2組，即陰虛體質組290例(符合陰虛體質診斷標準，且無缺血性卒中)及陰虛體質缺血性卒中組302例。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性(P>0.05)(見表1)。

表1　2組一般資料比較

1.3研究方法取2組研究對象外周靜脈血5 mL，根據(jù)血細胞脫氧核糖核酸(DNA)快速提取法提取基因DNA。采用探針熒光定量聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)技術擴增eNOS基因中含有G894T多態(tài)性的核苷酸序列(參照文獻[9]eNOS基因的DNA序列，利用引物設計軟件Primer Premier)。采用兩步法PCR擴增程序：預變性95 ℃ 10 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 32 s，40個循環(huán)。將擴增產物與生物素標記的eNOS基因探針進行雜交，經(jīng)顯色后判斷多態(tài)性結果。

2結果

2組eNOS基因G894T多態(tài)性位點基因型和等位基因分布頻率見表2。

表2　2組eNOS基因G894T多態(tài)性位點基因型和

由表2可見，陰虛體質缺血性卒中組eNOS基因G894T突變位點基因型和等位基因分布頻率與陰虛體質組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3討論

缺血性卒中屬中醫(yī)學“中風”范疇，起病急驟，“如矢石之中的，若暴風之疾速”，與“風”之“善行而數(shù)變”的特征相似，由多種因素長期作用而致?！鹅`樞·刺節(jié)真邪》載：“虛邪偏客于身半，其入深，內居營衛(wèi)，榮衛(wèi)稍衰，則真氣去，邪氣獨留，發(fā)為偏枯?！闭J為邪踞正損是中風發(fā)生的根本?！端貑枴ど鷼馔ㄌ煺摗吩唬骸瓣枤庹?，大怒則形氣絕，而血菀于上，使人薄厥?！弊渲械陌l(fā)生一個量變到質變的過程，我們往往只看到質變，而忽視了最為重要的量變。從長期陰虛體質偏頗到亞健康狀態(tài)，再到二者長期交互作用出現(xiàn)體內陰陽失衡，并逐漸消耗體內正氣，導致正氣虧虛，在某種特殊條件下，“陽氣暴走于上”而突然發(fā)病。體質取決于先天而難以改變，但是可以改變由于體質偏頗導致的對某種疾病發(fā)生的易感性，這是卒中的一個研究方向。

目前，對于多個關于基因變異與心腦血管疾病的關系已有報道，但一氧化氮(NO)為心腦血管發(fā)病機制的探討開辟了新的研究領域。研究發(fā)現(xiàn)，至少有 3 種一氧化氮合酶(NOS) 同功酶，分別為神經(jīng)元型 NOS(nNOS)、誘導型 NOS(iNOS) 和eNOS。人eNOS含有1 203個氨基酸。NOS 3位于內皮細胞的細胞膜上，某些生理活性物質與內皮細胞膜上的相應受體結合后，NOS 3催化L-精氨酸生成內皮細胞衍生性NO。近年來研究較熱的一個多態(tài)性位點是第8號外顯子處的G894T(rs1799983)突變，從而使得298位編碼蛋白的谷氨酸被天冬氨酸取代。此位點是外顯子8上第894位核苷酸存在的G→T變異[10]。Markus等[11]對G894T多態(tài)性與缺血性卒中的關系研究發(fā)現(xiàn)，GG、GT、TT 3種基因型頻率在病例組和對照組G894T等位基因頻率分布均無顯著性差異。法國Elbaz對460病例對照研究發(fā)現(xiàn)[12]，GG基因型在無腦血管病對照組中的分布頻率為35.4%，腦梗死患者為46.1%，而腔隙性腦梗死患者中更高，說明G894T多態(tài)性與缺血性卒中，尤其是腔隙性腦梗死發(fā)病有關。有關eNOS基因G894T多態(tài)性與腦血管疾病之間的關系雖然研究頗多，但尚無定論。

本研究結果發(fā)現(xiàn)，eNOS基因G894T多態(tài)性基因型和等位基因在陰虛體質人群和陰虛體質導致的缺血性卒中患者中分布頻率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明該多態(tài)性與陰虛體質導致缺血性腦卒中發(fā)病無關。

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(本文編輯：曹志娟)

中西醫(yī)結合