飼糧中添加杜仲葉提取物對愛拔益加肉雞生長性能及免疫功能的影響

?陳玉敏 黃 濤 宋小珍許蘭嬌 劉 博 符運斌（江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省動物營養(yǎng)重點實驗室，南昌330045）

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飼糧中添加杜仲葉提取物對愛拔益加肉雞生長性能及免疫功能的影響

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陳玉敏 黃 濤 宋小珍?許蘭嬌 劉 博 符運斌
（江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省動物營養(yǎng)重點實驗室，南昌330045）

摘 要：本試驗旨在研究飼糧中添加不同水平杜仲葉提取物對愛拔益加（AA）肉雞生長性能與免疫功能的影響。選擇健康1日齡AA肉雞275羽，隨機分為5個組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)11羽雞。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0．05%、0．10%、0．15%、0．20%杜仲葉提取物。試驗為期42 d。結(jié)果表明：1）各組平均日采食量差異不顯著（P＞0．05）；與對照組相比，0．15%添加組在8～14 d的平均日增重提高了7．42%（P＜0．05），0．05%、0．10%和0．15%添加組在29～35 d的平均日增重分別提高了26．13%、25．05%和24．94%（P＜0．05）；0．05%和0．15%添加組在29～35 d的料重比分別比對照組降低了21．15%、19．34%（P＜0．05）。2）各組21、42 d肉雞免疫器官指數(shù)、血清免疫球蛋白A含量差異均不顯著（P＞0．05）；0．15%添加組21 d血清免疫球蛋白G含量比對照組提高了23．06%（P＜0．05），0．05%、0．15%和0．20%添加組42 d血清免疫球蛋白M含量分別比對照組提高了118．89%、73．33%和71．11%（P＜0．05）。由此可見，飼糧中添加一定水平的杜仲葉提取物可提高肉雞免疫功能，改善生長性能，其中以0．15%的添加水平效果最好。

關(guān)鍵詞：杜仲葉提取物；AA肉雞；生長性能；免疫功能

近年來，隨著生活水平的日益提高，人們對畜禽產(chǎn)品質(zhì)量的要求也越來越高，由于飼料中添加抗生素和化學(xué)藥物對畜禽產(chǎn)品品質(zhì)的負面影響，尋找抗生素替代品，生產(chǎn)安全可靠的畜禽產(chǎn)品成為關(guān)注的焦點。杜仲是我國傳統(tǒng)中藥材，其皮、葉、果、枝條等部位均含有豐富的天然活性物質(zhì)，是一種多功能的植物［1］。但中醫(yī)僅以杜仲樹皮入藥，據(jù)中醫(yī)藥典記載，杜仲樹皮具有補肝腎、強筋骨、安胎的功效；并能抗高血壓，具有調(diào)脂與保護心血管的功能［2］?，F(xiàn)己發(fā)現(xiàn)杜仲葉含有與杜仲皮相似的醫(yī)藥活性成分與營養(yǎng)物質(zhì)，主要包括綠原酸、黃酮類、鞣質(zhì)、多糖、氨基酸等。其中，杜仲葉中單體綠原酸的含量豐富，甚至高于杜仲皮［3］。

杜仲葉提取物是從杜仲葉中提取而得的一種天然植物性飼料添加劑。與抗生素等化學(xué)合成藥物添加劑相比，杜仲葉提取物無耐藥性、毒副作用小，且資源豐富，功能多樣。研究表明，杜仲葉中綠原酸具有抗菌、抗病毒、增高白血球等作用，可提高機體免疫功能［4］。杜仲作為飼料添加劑可增強動物免疫力，提高畜禽生長性能，改善肉、蛋、奶品質(zhì)等［5］。但是，當(dāng)前有關(guān)杜仲葉提取物的文獻資料主要集中在其功能組成研究，而動物飼養(yǎng)試驗研究報道不多。因此，本試驗研究飼糧添加杜仲葉提取物對肉雞生長性能以及免疫功能的影響，為杜仲葉提取物在肉雞生產(chǎn)上的應(yīng)用提供依據(jù)。

1　材料與方法

1．1 試驗材料

1．1．1 試驗動物與試驗設(shè)計

試驗所用的1日齡健康愛拔益加（AA）肉雞275只雞苗，購自南昌正大，初重45～50 g，隨機分成5個組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)11只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0．05%、0．10%、0．15%、0．20%杜仲葉提取物。試驗為期42 d?；A(chǔ)飼糧參考肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配比，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1　Composition and nutrient levels of basal diets（air?dry basis）　%

1．1．2 杜仲葉提取物的提取及成分檢測

杜仲葉提取物購自西安某公司，從杜仲葉中提取而得。提取方法為水溶液提取法。

1．1．2．1 高效液相色譜（HPLC）檢測譜的條件

梯度洗脫，10 μL進樣，流速1．0 mL／min，檢測波長250 nm，色譜柱為Waters C18（4．6 mm× 250 mm，5 μL），流動相為0．2%醋酸（A）和甲醇（B），流速：1 mL／min，檢測波長327 nm，柱溫40℃。

1．1．2．2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

精確稱取一定量的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇超聲溶解，制得綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，吸取一定量標(biāo)準(zhǔn)溶液，在9．25～292．50 μg／L內(nèi)配成8個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計算公式為：y＝28．052x－121．54，R2＝0．999［y為峰面積，x為綠原酸含量（μg／mL）］。

1．1．2．3 樣品測定結(jié)果

測得杜仲葉提取物中綠原酸的含量為28．51%，液相色譜圖見圖1。

1．2 飼養(yǎng)管理

試驗于2013年10—11月在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院動物養(yǎng)殖實踐基地進行。各個組的飼養(yǎng)環(huán)境完全相同，試驗前對雞舍及周邊的環(huán)境和試驗用具進行徹底消毒處理。試驗雞采用立體籠養(yǎng)，自由飲水和采食。試驗期內(nèi)控制溫度、濕度、光照和自然通風(fēng)，按正常免疫程序進行免疫。

1．3 樣品采集及測定方法

1．3．1 生長性能的測定

通過飼養(yǎng)試驗，每天以重復(fù)為單位記錄試驗肉雞的采食量，并在7、14、21、28、35、42 d清晨對全部試驗雞空腹稱重，計算試驗肉雞平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F／G）。1．3．2 血清免疫指標(biāo)的測定

在21和42 d，每個重復(fù)隨機選取2只體重相近的健康雞，空腹翅靜脈采血。血液樣品在室溫下靜置1～2 h后3000 r／min離心，分離血清，采用酶聯(lián)免疫技術(shù)測定血清中的免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）的含量。

1．3．3 免疫器官指數(shù)的測定

在21和42 d，每個重復(fù)隨機選取2只體重相近的健康雞，翅靜脈采血后，放血屠宰。仔細分離宰殺后試驗雞的法氏囊、脾臟、胸腺，用濾紙吸干血液后稱重，計算其免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（g／kg）＝器官重量／體重。

1．4 統(tǒng)計分析

基本數(shù)據(jù)處理采用Excel 2003，試驗結(jié)果分析采用SPSS 17．0中的單因素方差分析（one?way ANOVA）程序進行方差、線性和二次型分析，多重比較用Duncan氏法，結(jié)果以平均值表示。

2　結(jié) 果

2．1 杜仲葉提取物對肉雞生長性能的影響

由表2可見，在肉雞的各個生長階段，與對照組比較，飼糧中添加不同水平的杜仲葉提取物對肉雞平均日采食量影響均不顯著（P＞0．05）。

表2　杜仲葉提取物對肉雞平均日采食量的影響Table 2　Effects of Eucommia leaves extract on average daily feed intake of broilers　g／d

由表3可見，與對照組比較，添加各水平杜仲葉提取物后，肉雞平均日增重呈現(xiàn)先提高后下降的二次變化趨勢。其中，在1～7 d、15～21 d和36～42 d，各組肉雞的平均日增重與對照組之間均無顯著差異（P＞0．05）；在8～14 d，0．15%添加組比對照組提高了7．42%（P＜0．05），其他添加組與對照組差異不顯著（P＞0．05）；在22～28 d，0．05%與 0．10%添加組分別比對照組降低了14．65%、14．63%（P＜0．05）；在29～35 d，0．05%、0．10%和0．15%添加組分別比對照組提高了26．13%、25．05%和24．94%（P＜0．05），0．20%添加組與對照組之間無顯著差異（P＞0．05）。從試驗全期看，0．05%添加組肉雞的平均日增重比對照組提高了7．41%（P＜0．05），其他各組與對照組無顯著差異（P＞0．05）。

表3　杜仲葉提取物對肉雞平均日增重的影響Table 3　Effects of Eucommia leaves extract on average daily gain of broilers　g／d

由表4可見，在肉雞的各個階段，各組之間料重比的差異主要表現(xiàn)29～35 d時，添加杜仲葉提取物后，肉雞料重比在29～35 d呈現(xiàn)二次顯著下降（P＜0．05），其余階段差異不顯著（P＞0．05）。其中，在29～35 d，0．05%、0．10%、0．15%和0．20%添加組料重比與對照組相比分別降低了21．15%（P＜0．05）、17．53%（P＞0．05）、19．34%（P＜0．05）和7．73%（P＞0．05）。從試驗全期看，0．05%添加組料重比比對照組顯著降低（P＜0．05），其他各組與對照組均無顯著差異（P＞0．05）。

表4　杜仲葉提取物對肉雞料重比的影響Table 4　Effects of Eucommia leaves extract on feed to gain of broilers

2．2 杜仲葉提取物對肉雞免疫功能的影響

由表5可見，與對照組比較，添加不同水平杜仲葉提取物后各組血清IgA含量均沒有顯著差異（P＞0．05）。血清IgG含量在21 d時以0．15%添加組最高，比對照組提高了23．06%（P＜0．05），其他添加組與對照組無顯著差異（P＞0．05）；在42 d時，0．05%添加組比對照組提高了4．61%（P＞0．05），但0．20%添加組血清IgG含量下降了13．52%（P＜0．05），其余添加組與對照組無顯著差異（P＞0．05）。各添加組21 d的血清IgM含量與對照組相比均有提高趨勢，但差異不顯著（P＞0．05），在42 d時，0．05%、0．15%和0．20%添加組血清IgM含量分別比對照組提高了118．89%、73．33%和71．11%（P＜0．05）。

由表6可見，在21和42 d，隨著杜仲葉提取物的添加水平的提高，肉雞胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)呈現(xiàn)先增加后下降的變化趨勢，但與對照組均無顯著差異（P＞0．05）。其中，在21 d時，0．05%和0．10%添加組法氏囊指數(shù)比對照組分別提高了15．42%和14．98%（P＞0．05），在42 d時，0．10%和0．20%添加組法氏囊指數(shù)分別比對照組提高了12．21%和16．03%（P＞0．05）。各個杜仲葉提取物添加組的脾臟指數(shù)與對照組相比有下降趨勢，但是均沒有顯著差異（P＞0．05）。

表5　杜仲葉提取物對肉雞血清免疫球蛋白含量的影響Table 5　Effects of Eucommia leaves extract on serum immune globulin content of broilers　mg／mL

表6　杜仲葉提取物對肉雞免疫器官指數(shù)的影響Table 6　Effects of Eucommia leaves extract on immune organs index of broilers　g／kg

3　討 論

3．1 杜仲葉提取物對肉雞生長性能的影響

本試驗結(jié)果表明，添加杜仲葉提取物對AA肉雞平均日采食量影響不顯著，但提高了肉雞在29～35 d的平均日增重，降低了其料重比。有研究表明，杜仲作為飼料添加劑可增強動物免疫力，提高畜禽生長性能，改善畜產(chǎn)品質(zhì)量［6－7］。王華朗等［8］報道，在肉雞飼糧中添加0．30%的杜仲粉可顯著提高肉雞平均日增重，改善其生長性能，分析可能是杜仲葉粉中綠原酸成分對機體免疫功能改善有關(guān)。但是，本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在22～28 d，添加0．05%與0．10%的杜仲葉提取物降低了肉雞的平均日增重，料重比與對照組無差異。這提示杜仲葉提取物添加后可改善肉雞生長性能，但其作用與添加劑量和使用階段有關(guān)。歐愛明等［9］在基礎(chǔ)飼糧中添加杜仲葉粉飼喂雪峰烏骨雞的試驗中發(fā)現(xiàn)，隨杜仲添加量的增加，雞的平均日增重、平均日采食量均下降。

3．2 杜仲葉提取物提取物對肉雞免疫功能的影響

血清免疫球蛋白主要存在于動物血清中，其含量的高低是反映機體免疫系統(tǒng)狀況的重要指標(biāo)。IgG是哺乳動物血清中含量最高的免疫球蛋白，約占總量的80%，是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，該抗體能夠抵抗外來抗原，有效地保護機體不受感染。IgM是機體初次接觸抗原物質(zhì)時最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，在抗感染中起著關(guān)鍵作用。在機體受到病原菌和病毒感染時，IgM能與體內(nèi)補體結(jié)合，清除病原體［10］。本試驗結(jié)果表明，添加杜仲葉提取物可顯著提高血清中IgG和IgM的含量，這說明在飼糧中添加一定水平的杜仲葉提取物可改善肉雞的體液免疫。

胸腺是免疫系統(tǒng)的重要器官，參與機體的非特異性免疫功能，對細胞免疫及體液免疫具有重要調(diào)節(jié)作用。法氏囊是禽類特有的中樞免疫器官，可促進B細胞的誘導(dǎo)分化和成熟，促進機體的體液免疫。脾臟是體內(nèi)產(chǎn)生抗體的重要器官，對機體細胞免疫過程中致敏T細胞的產(chǎn)生和抗體的形成有促進作用。一般認(rèn)為，免疫器官重量降低為免疫抑制所致，而免疫器官重量增加則為免疫增強的表現(xiàn)［11］。本研究中，添加杜仲葉提取物在一定程度上提高了肉雞的法氏囊指數(shù)，這可能與綠原酸促進機體免疫器官的發(fā)育有關(guān)。前期報道顯示，杜仲能促進免疫器官的發(fā)育，增強機體的免疫應(yīng)答能力，從而提高了機體的抵抗力［12］。呂錦芳等［13］研究也顯示，在肉雞飼糧中添加復(fù)方杜仲口服液可提高肉雞的法氏囊指數(shù)及脾臟指數(shù)。

4　結(jié) 論

在肉雞飼糧中添加一定水平的杜仲葉提取物可提高AA肉雞平均日增重，降低料重比，并可提高肉雞的免疫功能，其中以0．15%的添加水平效果較好。

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?Corresponding author，associate professor，E?mail：songxz1234＠163．com

（責(zé)任編輯 武海龍）

Effects of Dietary Eucommia Leaves Extract on Growth Performance and Immune Function of Broilers

CHEN Yumin HUANG Tao SONG Xiaozhen

?

XU Lanjiao LIU Bo FU Yunbin

（Key Laboratory of Animal Nutrition，Jiangxi Province，Jiangxi Agricultural University，Nanchang 330045，China）

Abstract：This experiment was conducted to investigate the effects of different Eucommia leaves extract level on growth performance and immune function of Arbor Acre（AA）broilers．A total of 275 one?day?old AA broilers were randomly divided into 5 groups with 5 replicates per group and 11 chickens per replicate．Broilers in the control group were fed a basal diet，and the other were fed the basal diets supplemented with 0．05%，0．10%，0．15%and 0．20%Eucommia leaves extract，respectively．The feeding trial lasted for 42 days．The re?sults showed as follows：1）there was no significant difference on the average daily feed intake among all groups（P＞0．05）．Compared with the control group，0．15%supplemental group increased average daily gain （ADG）by 7．42%during 8 to 14 days（P＜0．05），and 0．05%，0．10%and 0．15%supplemental groups in?creased ADG by 26．13%，25．05%and 24．94%during 29 to 35 days（P＜0．05），and the feed to gain ratio of 0．05%and 0．15%supplemental groups decreased by 21．15%and 19．34%during 29 to 35 days（P＜0．05）．2）There was no significant difference on immune organs index and serum immunoglobulin A content among all groups at 21 and 42 days（P＞0．05）．Compared with the control group，the serum immunoglobulin G content in 0．15%supplemental group increased by 23．06%at 21 days（P＜0．05），and the serum immunoglobulin M content in 0．05%，0．15%and 0．20%supplemental groups increased by 118．89%，73．33%and 71．11%at 42 days（P＜0．05）．In conclusion，dietary supplemented with Eucommia leaves extract can improved growth per?formance and immune function of broilers，and the suitable supplemental level is 0．15%．［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（7）：2224?2230］

Key words：Eucommia leaves extract；AA broilers；growth performance；immune function

通信作者：?宋小珍，副教授，碩士生導(dǎo)師，E?mail：songxz1234＠163．com

作者簡介：陳玉敏（1988—），女，山東淄博人，碩士研究生，從事動物營養(yǎng)與中藥添加劑研究。E?mail：1039817579＠qq．com

基金項目：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃（863計劃，2013BDA10B04?3）；江西省高等學(xué)?？萍悸涞赜媱潱↘JLD12021）

收稿日期：2015－01－29

doi：10．3969／j．issn．1006?267x．2015．07．029

文章編號：1006?267X（2015）07?2224?07

文獻標(biāo)識碼：A

中圖分類號：S831