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    枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚(yú)免疫功能和生長(zhǎng)性能的影響

    2016-11-22 10:13:19張可齊遵利
    河北漁業(yè) 2016年10期
    關(guān)鍵詞:枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)性能羅非魚(yú)

    張可+齊遵利

    摘要:通過(guò)在養(yǎng)殖羅非魚(yú)的水體里添加不同濃度的枯草芽孢桿菌,分別測(cè)定羅非魚(yú)酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、溶菌酶五種免疫酶活性指標(biāo)及生長(zhǎng)性能指標(biāo),探討在養(yǎng)殖水體中添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚(yú)的免疫酶活性及生長(zhǎng)性能的影響,目的為評(píng)價(jià)枯草芽孢桿菌在羅非魚(yú)養(yǎng)殖過(guò)程中使用效果的生物學(xué)指標(biāo),以及為了推廣枯草芽孢桿菌在羅非魚(yú)養(yǎng)殖過(guò)程中提高羅非魚(yú)免疫功能提供理論依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:枯草芽孢桿菌;羅非魚(yú);免疫酶活性;生長(zhǎng)性能

    1材料及方法

    1.1試驗(yàn)動(dòng)物

    本試驗(yàn)以羅非魚(yú)為試驗(yàn)對(duì)象,挑選體質(zhì)健壯、體表無(wú)傷的羅非魚(yú),平均每條羅非魚(yú)的重量為15 g左右。

    1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    本試驗(yàn)于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)渤海校區(qū)實(shí)驗(yàn)育苗室內(nèi)進(jìn)行,水族箱規(guī)格為100 cm×60 cm×50 cm,試驗(yàn)前將水族箱和實(shí)驗(yàn)所用器具用高錳酸鉀浸泡消毒24 h。水體體積為100 cm×60 cm×35 cm,并充分曝氣24 h后將魚(yú)放入水族箱中。共16個(gè)水族箱,每個(gè)水族箱里放25尾魚(yú)。待魚(yú)適應(yīng)環(huán)境以后開(kāi)始投喂飼料并正式試驗(yàn)。

    試驗(yàn)分為5個(gè)處理組,每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)3個(gè)平行,分別添加濃度為102、103、104、105、106 cfu/mL的枯草芽孢桿菌,對(duì)照組不添加枯草芽孢桿菌。每個(gè)水族箱中飼養(yǎng)25尾羅非魚(yú)。

    1.3日常管理

    每天投食兩次,上午8:30、下午2:30各投喂一次,投喂量以多數(shù)魚(yú)不攝食為準(zhǔn)。試驗(yàn)期間不換水,每天上午清洗過(guò)濾棉。試驗(yàn)期間定時(shí)觀察羅非魚(yú)的生長(zhǎng)及健康狀況,定期往水體里添加菌粉以保持水體菌的濃度。

    1.4試驗(yàn)處理

    實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后,在實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)的第30 d采樣,采樣時(shí)取其血液,用肝素鈉潤(rùn)洗注射器后抽取2~3 mL的血液,放置冰箱冷凍條件下12 h,然后在離心機(jī)里離心,3 500 r/min離心15 min,取上清液待測(cè)。

    生長(zhǎng)性能的測(cè)定為羅非魚(yú)的特定生長(zhǎng)率及成活率,特定生長(zhǎng)率的計(jì)算公式為SGR=100×(lnW末-lnW初)/t(養(yǎng)殖天數(shù)),成活率的計(jì)算公式為成活率=成活的數(shù)量÷總數(shù)量×100%。

    免疫指標(biāo)的測(cè)定為酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、溶菌酶(LZM),均為南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定,具體操作按其說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。采用SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,運(yùn)用ANOVA單因素進(jìn)行方差分析及Duncans多重比較對(duì)實(shí)驗(yàn)所得出的結(jié)果進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),顯著水平為P<0.05。

    2試驗(yàn)結(jié)果

    2.1水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚(yú)血清中酸性磷酸酶(ACP)活性的影響

    添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚(yú)血清的ACP活性顯著高于其他組(P<0.05),且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

    2.2水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚(yú)血清中堿性磷酸酶(AKP)活性的影響

    添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚(yú)血清的AKP活性顯著高于其他組(P<0.05),且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

    2.3水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚(yú)血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性的影響

    添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚(yú)血清AST活性顯著高于其他組(P<0.05),且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

    2.4水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚(yú)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性的影響

    添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL和105cfu/mL添加組的魚(yú)血清ALT活性顯著高于其他組(P<0.05),且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

    2.5水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚(yú)血清中溶菌酶(LZM)活性的影響

    添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚(yú)血清的LZM活性顯著高于其他組(P<0.05),且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

    2.6對(duì)羅非魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

    添加枯草芽孢桿菌濃度分別為102cfu/mL、103cfu/mL、104cfu/mL、105cfu/mL、106cfu/mL及對(duì)照組的特定生長(zhǎng)率分別為2.628、2.918、3877、3.510、3.587、2.197,成活率分別為88%、92%、96%、92%、80%、80%。添加組的特定生長(zhǎng)率顯著高于空白組,添加濃度為104cfu/mL的生長(zhǎng)性能表現(xiàn)最好。

    3結(jié)論

    酸性磷酸酶(ACP)是動(dòng)物體內(nèi)重要的調(diào)控酶,它可以直接參與血細(xì)胞的包囊作用和吞噬作用,并能幫助殺死及吞噬病原體。

    在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,104cfu/mL添加組中ACP的活性最高,且添加組明顯高于對(duì)照組,因此ACP可以作為評(píng)價(jià)動(dòng)物免疫功能的指標(biāo)。

    堿性磷酸酶(AKP)普遍存在于動(dòng)植物體內(nèi),是重要的調(diào)控酶,可直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移與磷酸脂的代謝,可為ADP磷酸轉(zhuǎn)化形成ATP提供更多的必需無(wú)機(jī)磷酸,也是動(dòng)物體內(nèi)重要的解毒體系,可作為評(píng)價(jià)羅非魚(yú)免疫功能的指標(biāo)。

    實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,104cfu/mL添加組中AKP的活性最高,且添加效果最為明顯,因此AKP可以作為評(píng)價(jià)羅非魚(yú)的免疫功能指標(biāo)。

    谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是一種重要的氨基轉(zhuǎn)移酶,廣泛存在于動(dòng)物組織細(xì)胞中。當(dāng)血清中AST的活性升高或組織內(nèi)AST的活性降低時(shí),即表明動(dòng)物機(jī)體的肝臟、心臟等內(nèi)臟器官發(fā)生損傷。AST 活性變化也是反映肝細(xì)胞受到損傷的主要敏感指標(biāo)。

    在本試驗(yàn)階段,104cfu/mL添加組的羅非魚(yú)血清中AST活性最高,顯著高于其他組(P<005),且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

    谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉(zhuǎn)氨作用,在肝臟內(nèi)的活力最大的一種酶。存在于很多器官中,對(duì)肝臟的蛋白質(zhì)代謝起到樞紐的作用,攝入的糖類(lèi)、脂肪及其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)由轉(zhuǎn)氨基作用轉(zhuǎn)變?yōu)樗璧鞍踪|(zhì),而轉(zhuǎn)氨基作用最重要的就是需要谷丙轉(zhuǎn)氨酶的催化作用。

    在本試驗(yàn)階段,104cfu/mL和105cfu/mL添加組的魚(yú)血清ALT活性顯著高于其他組(P<005),這兩個(gè)添加組無(wú)明顯差異(P>0.05),試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。

    溶菌酶(LZM)是一種堿性蛋白酶,廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)的某些淋巴組織和體液中。LZM活性的高低,可作為衡量水產(chǎn)動(dòng)物免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)之一,在一定程度上也能反映出動(dòng)物機(jī)體的非特異性體液免疫的狀態(tài)。當(dāng)血清中LZM活性提高時(shí),機(jī)體的免疫能力也會(huì)相應(yīng)提高。

    在本試驗(yàn)中,104cfu/mL添加組魚(yú)血清的LZM活性最高,且試驗(yàn)組的溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組。

    特定生長(zhǎng)率是指生長(zhǎng)率與生長(zhǎng)天數(shù)的比,是衡量生長(zhǎng)狀況的一個(gè)常用指標(biāo),特定生長(zhǎng)率越大,代表每天體重增長(zhǎng)越快。成活率表示成活的數(shù)量占總量的百分比,成活率越高,反映枯草芽孢桿菌對(duì)魚(yú)的生長(zhǎng)性能的影響越高。本試驗(yàn)中,104cfu/mL添加組羅非魚(yú)的特定生長(zhǎng)率和成活率都是最高的,且試驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組。

    在養(yǎng)殖水體中添加枯草芽孢桿菌對(duì)養(yǎng)殖羅非魚(yú)的免疫酶活性及生長(zhǎng)性能都能起到一定的作用,且明顯高于空白對(duì)照組,其中添加濃度為104cfu/mL的所起到的作用最為明顯。

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