飼料氧化魚油對草魚（Ctenopharyngodon idellus）腸道谷胱甘肽／谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶通路基因表達(dá)活性的影響

林秀秀 葉元土 蔡春芳 吳 萍 黃雨薇 陳科全 彭 侃 徐登輝 羅其剛

飼料氧化魚油對草魚（Ctenopharyngodon idellus）腸道谷胱甘肽／谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶通路基因表達(dá)活性的影響

林秀秀 葉元土 蔡春芳 吳 萍 黃雨薇 陳科全 彭 侃 徐登輝 羅其剛

（蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，蘇州 215123）

為了研究飼料氧化魚油對草魚腸道抗氧化防御能力的影響，以谷胱甘肽／谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GSH／GSTs）通路為研究對象，以豆油、魚油、氧化魚油為飼料脂肪源分別設(shè)計豆油組（6S）、魚油組（6F）、2%氧化魚油（2OF）、4%氧化魚油（4OF）及6%氧化魚油（6OF）5組等氮、等能半純化飼料，在池塘網(wǎng)箱養(yǎng)殖草魚［平均體重（74.8±1）g］72 d。采用熒光定量PCR（RT-QPCR）的方法，測定了草魚腸道組織中谷氨酸-半胱氨酸連接酶催化亞（GCLC）、谷胱甘肽合成酶（GSS）和谷胱甘肽還原酶（GSR）以及谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的ω1（GSTω1）、PI-谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTPI）和微粒體谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶1（MGSt1）的表達(dá)活性，并測定了腸道中谷胱甘肽GSH的含量。結(jié)果顯示，2OF、4OF和6OF組草魚腸道中GSH／GSTs通路基因表達(dá)均上調(diào)，其中6F組中MSGT1在腸道中表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.05），4OF組中GSR和MGST1在腸道中表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.05），6OF中GCLC和MGST1在草魚腸道中表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.05）；GCLC表達(dá)活性與飼料中MDA含量呈多項式的關(guān)系，MGST1表達(dá)活性與飼料中AV和（EPA＋DHA）呈多項式關(guān)系。結(jié)果表明，氧化魚油使草魚腸道GSH／GSTs通路基因表達(dá)活性上調(diào)，且GSH／GSTs通路基因表達(dá)活性對不同濃度氧化魚油所引起的腸道氧化損傷具有不同的應(yīng)對方式。

草魚 腸道 氧化魚油 谷胱甘肽 基因

脂類在水產(chǎn)動物中具有重要的生理作用［1］。魚油因富含高不飽和脂肪酸是魚類重要的油脂原料［2］。然而，魚油氧化酸敗能產(chǎn)生多種氧化產(chǎn)物，會破壞動物腸道組織細(xì)胞，損害動物生產(chǎn)性能及影響動物抗氧化能力［3］。因此，飼料中的魚油對于養(yǎng)殖動物的作用具有二重性：一方面提供動物所需的高不飽和脂肪酸（必需脂肪酸）的營養(yǎng)作用；另一方面，由于氧化酸敗而提供對魚體健康具有損傷作用的氧化產(chǎn)物，其損傷程度與氧化產(chǎn)物種類、含量有直接的關(guān)系。

GSH／GSTs是動物重要的解毒、抗氧化系統(tǒng)［4］，劉進(jìn)［5］通過還原型GSH結(jié)合三聯(lián)療法治療十二指腸球部潰瘍，提高潰瘍愈合質(zhì)量。已證實了GSH具有調(diào)節(jié)仔豬和黃羽肉雞的抗氧化能力［6］，并且通過在飼料中添加GSH能提高草魚、羅非魚的生長性能以及機(jī)體自身的抗氧化能力［7-9］。GST是啟動GSH結(jié)合反應(yīng)的關(guān)鍵酶［10］，它能夠催化還原谷胱甘肽的硫醇基團(tuán)與各種親電化合物相結(jié)合，增加內(nèi)源和外源有毒物質(zhì)的可溶性而利于其排出體外。然而有關(guān)GSH／GSTs功能系統(tǒng)在水產(chǎn)動物中的報道非常有限。本研究采用熒光定量PCR技術(shù)，測定了草魚攝食含有氧化魚油飼料后腸道中GSH／GSTs通路基因表達(dá)活性，以揭示飼料氧化魚油飼料對草魚腸道免疫防御能力的影響。

1 材料與方法

1.1 飼料的制備

氧化魚油來源及制備：豆油為“福臨門”牌一級大豆油，魚油來源于廣東省良種引進(jìn)服務(wù)公司生產(chǎn)的“高美牌”精煉魚油，氧化魚油為魚油在實驗室條件下氧化制備［11］。分別測定了3種油脂過氧化值（POV）、酸價（AV）和丙二醛（MDA）含量，并計算（飼料中POV、AV、MDA尚無有效監(jiān)測方法），試驗飼料中POV、AV、MDA值分別見表1。

飼料配制：以酪蛋白和秘魯蒸汽魚粉為主要蛋白源，采用等氮、等能方案設(shè)計基礎(chǔ)飼料，設(shè)置了6%豆油組（簡稱6S組）、6%魚油組（6F）、2%氧化魚油＋4%豆油組（2OF）、4%氧化魚油＋2%豆油組（4OF）、6%氧化魚油組（6OF）作為脂肪源配制5組等氮等能的試驗飼料。飼料組成成分見表2。各組蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為29.52%～30.55%，無顯著差異；各組能量為19.943 ～20.860 kJ／g，無顯著差異。

表1 試驗飼料中POV值、AV值和MDA含量

表2 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2 試驗魚與飼養(yǎng)管理

草魚來源于浙江一星飼料有限公司養(yǎng)殖基地，為池塘培育的1冬齡魚種共350尾，平均體重為（74.8±1）g。草魚隨機(jī)分為5組，每組設(shè)3重復(fù)，每重復(fù)20尾。

養(yǎng)殖試驗在浙江一星飼料集團(tuán)試驗基地進(jìn)行，在面積為5×667 m2（平均水深1.8 m）池塘中設(shè)置網(wǎng)箱，網(wǎng)箱規(guī)格為1.0 m×1.5 m×2.0 m。將各組試驗草魚隨機(jī)分配在5組、15個網(wǎng)箱中。

分別用商品飼料訓(xùn)化1周后，開始正式投喂。每天08：00和15：00定時投喂，投飼率為2%～4%。每10 d依據(jù)投飼量估算魚體增重并調(diào)整投喂率，記錄每天投飼量。正式試驗共養(yǎng)殖72 d。

每周用試劑盒測定水質(zhì)1次，試驗期間溶解氧質(zhì)量濃度＞8.0 mg／L，pH 7.08 ～8.4，氨氮質(zhì)量濃度＜0.2 mg／L，亞硝酸鹽質(zhì)量濃度＜0.01 mg／L，硫化物質(zhì)量濃度＜0.05 mg／L。養(yǎng)殖期間水溫25～33℃

1.3 樣本采集與分析

1.3.1 樣本采集

養(yǎng)殖72 d、停食24 h后，每網(wǎng)箱隨機(jī)取3尾、每組共9尾作為基因分析樣本試驗魚。魚體表面經(jīng)75%酒精消毒，常規(guī)解剖，快速取出內(nèi)臟團(tuán)，在冰浴中取出腸道，剪取中腸的前四分之一腸段，用PBS漂洗2～3次，一式2份，迅速裝于EP管中，液氮速凍，于-80℃保存?zhèn)溆?。采樣所用剪刀鑷子均?jīng)滅酶滅菌處理。

按上述方法，每網(wǎng)箱隨機(jī)另取3尾魚腸部分腸段，用于GSH含量測定。

1.3.2 GSH含量測定

腸道組織勻漿后，2 000 r／min離心15 min，取上清液用于GSH含量的測定。GSH測定用GSH試劑盒（南京建成生物工程研究所）測定。

1.3.3 引物設(shè)計

基因序列依據(jù)葉元土等［12］基因測序結(jié)果，定量PCR 中GCLC、GSS、GSR、GSTω1、GSTPI和MGST1 基因及內(nèi)參基因β-actin所使用的Taqman引物由prime5.0軟件設(shè)計，引物序列見表3。

表3 定量PCR引物

1.3.4 總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄CDNA

利用1.3.1所采集的單個網(wǎng)箱3尾草魚腸段樣本，分別取3個腸段樣本各25 mg合并為一個樣本用于總RNA提取，每組共3個平行樣本（共9尾魚、3個測定樣本）。加入液氮，研磨成粉末后，加入1 mL Trizol覆蓋粉末，待Trizol解凍成液體后全部轉(zhuǎn)移到1.5 mL的EP管中，按照Trizol方法提取不同組織的總RNA。按照PrimeScriptTMRT Mastetr Mix（TaKaRa公司）反轉(zhuǎn)錄試劑盒的方法將RNA轉(zhuǎn)錄成CDNA，將反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物稀釋后于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.5 定量PCR

使用CFX96熒光定量PCR儀和SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（TaKaRa公司）熒光染料對草魚谷胱甘肽通路的相關(guān)基因（GCLC、GSS、GSR、GSTω1、GSTPI和MGST1）及β-actin進(jìn)行熒光定量分析。反應(yīng)體系為20 μL：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ （TaKaRa）10μL，上下游引物各1 μL，cDNA 2 μL，滅菌水6 μL。PCR反應(yīng)采用兩步法，反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30 s、95℃變性5 s、60℃ 退火30 s，共40個循環(huán)，最后進(jìn)行溶解曲線（Melting Curve）分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理

公式：2-△△CT＝ 2-（Ct目的基因-Ct管家基因），以β -actin為內(nèi)參基因根據(jù)計算公式得到相對表達(dá)量。用SPSS 18.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行分析，組間差異顯著性用One-way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SD）表示。

2 結(jié)果

2.1 飼料氧化魚油使腸道谷胱甘肽含量顯著增加

養(yǎng)殖72 d后，采用試劑盒測定了不同試驗組草魚腸道組織中谷胱甘肽含量，結(jié)果如圖1所示。與6S相比，其他試驗組腸道組織中谷胱甘肽含量均顯著上升（P ＜0.05）。

圖1 草魚腸道組織GSH的含量

2.2 飼料氧化魚油影響了草魚腸道谷胱甘肽合成酶基因表達(dá)活性

采用熒光定量RT-PCR的方法檢測了催化以谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）為原料合成谷胱甘肽的GCLC、GSS基因，以及催化GSSG還原為GSH的GSR基因的表達(dá)活性，結(jié)果如圖2所示。

圖2 不同飼料組中草魚腸道谷胱甘肽合成酶基因的表達(dá)量

與6S組比較，GCLC除在6F組草魚腸道中表達(dá)有所下調(diào)外，在2OF、4OF和6OF組中表達(dá)均上調(diào)，其中在6OF組中顯著上調(diào)（P＜0.05）。GSS除在6F組草魚腸道中表達(dá)有所下調(diào)外，在2OF、4OF和6OF組中表達(dá)均上調(diào)，但均無顯著差異。GSR除在2OF組草魚腸道中表達(dá)有所下調(diào)外，在6F、4OF和6OF組中表達(dá)均上調(diào)，其中4OF組中顯著上調(diào)（P＜0.05）。

隨著飼料中氧化魚油添加量的逐漸增加，GCLC在2OF與4OF組腸道中表達(dá)無顯著差異，但6OF組腸道中顯著上調(diào)（P＜0.05）。GSS在2OF、4OF和6OF組腸道中表達(dá)均無顯著差。GSR在2OF和4OF組在腸道中無明顯差異，但在4OF組腸道中顯著上調(diào)（P ＜0.05）。

2.3 飼料氧化魚油影響了草魚腸道谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)活性

采用熒光定量RT-QPCR的方法檢測了GSTω1、GSTPI及MGST1 3種谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)活性，結(jié)果如圖3所示。

圖3 不同飼料組中草魚腸道GSTs的表達(dá)量

以6S組為對照，GSTω1除在6F組草魚腸道中表達(dá)有所下調(diào)外，在2OF、4OF和6OF組中表達(dá)均上調(diào)，但無顯著差異。GSTPI在6F、2OF、4OF和6OF組草魚腸道中表達(dá)均上調(diào)，但無顯著差異。MGST1在6F、2OF、4OF和6OF組草魚腸道中表達(dá)均顯著上調(diào)（P＜0.05）。

隨著飼料中氧化魚油添加量的逐漸增加，GSTω1及GSTPI基因表達(dá)量隨之下調(diào)，但均無顯著差；MGST基因表達(dá)量隨之上調(diào)，但均無顯著差異。

2.4 GSH／GSTs通路相關(guān)基因表達(dá)活性與飼料油脂氧化產(chǎn)物和EPA、DHA含量的相關(guān)性

將各組飼料中的MDA、POV、AV和（EPA＋DHA）的含量與GSH／GSTs通路中的相關(guān)基因GCLC、GSS、GSR、GSTω1、GSTPI和MGST1 在腸道中的相對表達(dá)量做Pearson相關(guān)性分析，檢驗雙側(cè)顯著性，結(jié)果見表4。

表4 GSH／GSTs通路相關(guān)基因表達(dá)活性與飼料中MDA、POV、AV和（EPA＋DHA）相關(guān)性

由表4可知，飼料魚油氧化產(chǎn)物中MDA含量對GCLC在腸道中的相對表達(dá)量影響最大，相關(guān)系數(shù)為0.77；而營養(yǎng)物質(zhì)EPA＋DHA的含量對其表達(dá)量影響很小，相關(guān)系數(shù)為0.07。MGST1在腸道中的相對表達(dá)量主要受到飼料AV及（EPA＋DHA）的共同影響。AV與MGST1的相關(guān)系數(shù)為0.92，且表現(xiàn)極顯著（P＜0.01）。EPA＋DHA與MGST1的相關(guān)系數(shù)為0.97，且表現(xiàn)極顯著（P ＜0.01）。

再對相關(guān)系數(shù)R2＞0.70的因子作回歸分析如圖4所示，GCLC的相對表達(dá)量與MDA值呈二項式關(guān)系，隨著飼料中MDA含量的增加，草魚腸道中GCLC的相對表達(dá)量先降低后增加。且GCLC相比6S組的表達(dá)量變化率為-11.9%～59%。當(dāng)MDA為10 mg／kg時，GCLC在腸道中的表達(dá)量最小。AV值與MGST1的相對表達(dá)量呈多項式關(guān)系，隨著飼料中的AV含量的增加，草魚腸道中MGST1的相對表達(dá)量先增加后下降。當(dāng)AV為1.28 g／kg時，MGST1在腸道中的表達(dá)量達(dá)到了最大值。（EPA＋DHA）值與MGST1的相對表達(dá)量呈二項式關(guān)系，隨著飼料中（EPA＋DHA）含量增加，草魚腸道中MGST1的相對表達(dá)量先增加后下降。當(dāng)（EPA＋DHA）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.3%時，MGST1在腸道中的表達(dá)量達(dá)到了最大值。且MGST1相比6S組的表達(dá)量上升率為74.7%～149.6%。

圖4 MDA、POV、AV 和（EPA ＋DHA）與GSH／GSTs通路相關(guān)基因表達(dá)量關(guān)系

3 討論

3.1 飼料氧化魚油對草魚腸道GSH含量、GSH合成酶基因表達(dá)活性有顯著性的影響

飼料氧化魚油促使草魚腸道組織GSH含量顯著增加，以應(yīng)對油脂氧化中間產(chǎn)物所產(chǎn)生的氧化應(yīng)激作用。GSH分子中的半胱氨酸殘端有疏基-SH，它是一種強(qiáng)親核性物質(zhì)，可以通過親核取代和加成作用使有毒親電物質(zhì)鈍化［13］，這是一種自我損傷修復(fù)與保護(hù)作用。

還原型GSH在機(jī)體內(nèi)的來源有2條途徑：①合成途徑，以Glu、Cys和Gly等3種氨基酸作為底物在GCLC和GSS的催化下完成。其中，γ-GCL是GSH的合成的限速步驟，而催化該反應(yīng)的GCLC酶是限制酶；②還原途徑，GSSG在GSR作用及還原性輔酶Ⅱ提供H＋下還原成GSH。小腸可通過是吸收其他器官組織產(chǎn)生的GSH，是主要吸收部位［14］。Vincenzini等［15］、Linder 等［16］分別在兔子、豬的腸道均發(fā)現(xiàn)存在GSH的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，它們通過吸收其他器官組織產(chǎn)生的GSH而使之成為自身的組成部分。本試驗中，6F與2OF組在GSH／GSTs通路中的各個基因表達(dá)均無明顯差異。然而，測定草魚腸道中GSH含量時，6F與2OF組草魚腸道的GSH含量卻顯著上升，且6F組的含量高于2OF組。可能是因為這2組魚油氧化產(chǎn)物含量較低，腸道可通過GSH運(yùn)轉(zhuǎn)載體吸收從魚體其他器官組織所產(chǎn)生的GSH以應(yīng)對體內(nèi)的氧化應(yīng)激作用。另一方面，4OF組草魚腸道中將GSSG還原為GSH的GSR表達(dá)量顯著上調(diào)（P＜0.05）。這可能是由于草魚腸道吸收從其他器官中產(chǎn)生的GSH與自由基反應(yīng)，而形成過多的氧化性GSH（GSSG），促進(jìn)了GSSG向GSH的轉(zhuǎn)化。當(dāng)受到氧化魚油的刺激后，通過上調(diào)草魚腸道中GSR的表達(dá)量將GSSG還原成GSH，發(fā)揮保護(hù)腸道的作用。當(dāng)飼料中脂肪酸氧化產(chǎn)物AV、POV、MDA含量達(dá)到一定數(shù)量之后（如6OF組），才會刺激GSH的生物合成酶基因的上調(diào)表達(dá)，以滿足對GSH的需要。如圖4a所示，GCLC的表達(dá)與飼料中的MDA呈二項式關(guān)系，其表達(dá)量隨MDA含量的上升而呈現(xiàn)升高的趨勢。MDA是脂質(zhì)過氧化物的最終分解產(chǎn)物之一，其含量能直接反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度［17］。因而，常作為脂類過氧化的測定指標(biāo)之一。當(dāng)MDA含量較低時，脂質(zhì)過氧化程度較低，腸道可通過吸收其他器官的GSH使機(jī)體免受氧化損傷。當(dāng)MDA含量較高、外界GSH不足以滿足魚體應(yīng)對腸道的氧化損傷，因而促使草魚腸道GCLC表達(dá)上調(diào)，以3種氨基酸結(jié)合生成GSH的方式來提高GSH含量，以抵抗腸道氧化損傷作用，因此GCLC在草魚腸道中與MDA呈二項式關(guān)系。

3.2 飼料氧化魚油對草魚腸道谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)有顯著性的影響

本研究涉及GSTs的3種類型，分別為胞液的GSTω1、GSTPi，膜結(jié)合酶的MGST1。GSTs 作為一個屬于Ⅱ相代謝解毒酶的同工酶家族，具有清除體內(nèi)自由基和解毒的雙重功能：一方面，可催化GSH與親電子物質(zhì)結(jié)合而起到解毒作用，最后形成硫醇尿酸經(jīng)腎臟排出體外；另一方面，具有谷胱甘肽過氧化物酶活力，能防止脂質(zhì)過氧化損傷［18-19］。但無論哪種作用機(jī)制，GST的作用都需要有GSH的參與、是一種依賴GSH發(fā)揮解毒、抗氧化作用的酶系，GST在抗氧化系統(tǒng)和解毒代謝中起著十分重要的作用［20］。攝食飼料氧化魚油72 d后，各組草魚腸道GSTs 3種酶的表達(dá)都受到了一定的影響。其中腸中MGST1的表達(dá)量相比GSTω1、GSTPI上調(diào)幅度更大，且MGST1在6F、4OF和6OF組中均顯著上調(diào)（P＜0.05）。MGST1作為一種Ⅱ相藥物代謝酶在體內(nèi)具有上述的雙重功能，MGST1還擔(dān)當(dāng)“感受器”的角色，其具有的半朧氨酸（Cys49）可感受親電子劑等而被修飾并行使對機(jī)體的保護(hù)作用［21］?？赡芤驗镸GST1作為“感受器”的原因，使其比胞漿GSTs更快、更有效的發(fā)揮作用，氧化魚油產(chǎn)生多種初級與次級的氧化產(chǎn)物，而這些氧化產(chǎn)物能夠刺激MGST1的“感受器”使其快速反應(yīng)并且提高自身的催化活性，發(fā)揮清除體內(nèi)自由基和解毒的功能。

如圖4b、圖4c所示，飼料中AV值和（EPA＋DHA）的含量同腸道的MGST1的表達(dá)量呈多項式關(guān)系，均隨著AV、（EPA＋DHA）含量的增加而呈現(xiàn)出先增加后減少的趨勢。研究發(fā)現(xiàn)MGST1的表達(dá)量在2OF組中相比于6S組中無顯著差異。這可能是由于飼料中（EPA＋DHA）的營養(yǎng)作用與AV的損傷作用共同影響的結(jié)果，2OF的AV增加、但與此同時2OF的（EPA＋DHA）也有所增加。2種共同作用使得腸道中MGST1的表達(dá)量與只添加豆油的6S組并無顯著差異。這也顯示了魚油的營養(yǎng)作用、氧化產(chǎn)物損傷作用的雙重性。當(dāng)AV含量從較少的0.4 g／kg升高到0.77、0.8、1.14 g／kg，（EPA ＋DHA）也從質(zhì)量分?jǐn)?shù)較少的4.7%升高到6.6%、8.2%、8.5%時腸道中MGST1的表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）。這可能是由于當(dāng)飼料中AV值不斷增加即使（EPA＋DHA）也不斷增加，氧化魚油對魚體的損害作用將大于（EPA＋DHA）對魚體的營養(yǎng)作用，導(dǎo)致最后MGST1的表達(dá)量不斷增加以應(yīng)對氧化產(chǎn)物對魚體的氧化損傷。當(dāng)AV增加1.28 g／kg時，可能出現(xiàn)超出MGST1的作用范圍，其表達(dá)量會出現(xiàn)下降，使草魚腸道受到進(jìn)一步的氧化損傷。因此，飼料中的（EPA＋DHA）的含量對于魚體抗氧化損傷具有一定抵消作用，然而當(dāng)氧化魚油導(dǎo)致的氧化損傷超出（EPA＋DHA）營養(yǎng)物質(zhì)的作用范圍，草魚腸道GSH／GSTs基因通路就會發(fā)生作用，使魚體免受氧化損傷，但魚油中有害物質(zhì)過高，魚體自身的抗氧化系統(tǒng)也無法修復(fù)，導(dǎo)致魚體健康受到嚴(yán)重的損傷。

4 結(jié)論

飼料中氧化魚油影響草魚腸道以GSH／GSTs為標(biāo)志的抗氧化能力，引起GSH／GSTs通路基因的表達(dá)活性上調(diào)。當(dāng)飼料中含有較低濃度氧化魚油，草魚腸道通過吸收其他組織的GSH，以及通過還原反應(yīng)獲得GSH以應(yīng)對氧化損傷。當(dāng)飼料中氧化魚油的濃度較高，草魚腸道主要通過以Glu、Cys及Gly為原料合成GSH的方式獲得GSH。MGST1為草魚腸道谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶中主要的作用類型，受到AV與（EPA＋DHA）共同作用。

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The Effect of Glutathione／Glutathione Transferase Gene Pathway in Intestinal of Grass Carp （Ctenopharyngodon idellus）by Feeding Oxidized Fish Oil

Lin Xiuxiu Ye Yuantu Cai Chunfang Wu Ping Huang Yuwei Chen Kequan Peng Kan Xu Denghui Luo Qigang
（School of Biology＆Basic Medical Science，Soochow University，Suzhou 215123）

The effect of dietary oxidized fish oil on oxidative stress pathway was studied by measuring the intestinal of grass carp GSH／GSTs pathway gene expression.The fish，with an initial weight of（74.8 ±1）g，was fed 72 d with a basal diet and 5 diets added with soybean oil（6S），fish oil（6F），2%oxidized fish oil（2OF），4%oxidized fish oil（4OF）and 6%oxidized fish oil（6OF）.Using RT-QPCR method，determinethe GSH／GSTs pathway gene expression and the GSH content in grass carp intestinal.The results showed that，2OF，4OF and 6OF grass carp intestinal GSH／GSTs gene pathway genes were increased，which 6F group MSGT1 expression was significantly increased （P ＜0.05）in the intestinal，4OF group GSR and MGST1 expression significantly increased （P ＜0.05）in the intestinal，6OF group GCLC and MGST1 expression was significantly increased （P ＜ 0.05）in the intestinal；MDA content in dietary with the relative expression of GCLC was polynomial relations，AV and（EPA＋DHA）content in dietary with the relative expression of GCLC was polynomial relations.In conclusion，oxidized fish oil had an influence on GSH／GSTs gene pathway had the intestinal and when oxidized fish oil different concentrations，GSH／GSTs gene pathway in different ways to deal with.

Grass carp （ctenopharyngodon idellus），intestinal，oxidized fish oil，GSH，gene

S965

A

1003-0174（2016）09-0106-08

國家自然科學(xué)基金（31172417）

2015-01-13

林秀秀，女，1990年出生，碩士，水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料

葉元土，男，1964年出生，教授，水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料