尿RBP、尿mAlb、β2-MG、NAG酶聯(lián)合檢測(cè)在糖尿病早期腎損害診斷中的意義

張碧蓮

(上饒市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西上饒334000)

尿RBP、尿mAlb、β2-MG、NAG酶聯(lián)合檢測(cè)在糖尿病早期腎損害診斷中的意義

張碧蓮

(上饒市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西上饒334000)

目的探討聯(lián)合檢測(cè)尿液視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、微量白蛋白（mAlb)、β2-微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)在糖尿病早期腎損害診斷中的價(jià)值。方法將100例糖尿病早期腎損害患者作為糖尿病組和100例健康人作為正常對(duì)照組的尿液標(biāo)本檢測(cè)RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶的含量，分析檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立病例資料檔案，評(píng)價(jià)各項(xiàng)生物標(biāo)記物的敏感性以及聯(lián)合檢測(cè)的敏感性。結(jié)果尿液RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶在糖尿病早期腎損害中均有不同程度的增高，與正常對(duì)照組比較均有顯著性差異（P＜0.05），聯(lián)合檢測(cè)此四項(xiàng)指標(biāo)可顯著提高糖尿病早期腎損害的診斷率。結(jié)論聯(lián)合檢測(cè)尿液RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶是診斷糖尿病早期腎損害敏感的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。

糖尿?。辉缙谀I損害；尿RBP；尿mAlb；β2-MG；NAG酶；聯(lián)合檢測(cè)

糖尿病腎病是糖尿病全身微血管病變的主要并發(fā)癥，早期無明顯臨床表現(xiàn)，常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目如尿蛋白定性、尿素氮、肌酐等均正常，難以發(fā)現(xiàn)腎臟早期的損傷，一旦出現(xiàn)臨床表現(xiàn)預(yù)后較差。因此，對(duì)糖尿病腎病的早期診斷、治療，阻止或延遲腎病的發(fā)生和發(fā)展，是當(dāng)前臨床研究的重要課題。本研究檢測(cè)100例糖尿病早期腎損傷患者及100例健康人尿液中的RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶，以探討多項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)在糖尿病早期腎損傷診斷中的價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選擇2014年1月-2015年6月期間在我院門診及住院的糖尿病患者100例為糖尿病組，其中男性58例，女性42例，年齡26～72歲，以上患者均根據(jù)臨床癥狀、空腹血糖、糖耐量及胰島素釋放試驗(yàn)確診為糖尿病，所有患者臨床排除各種腎病、尿路感染、高血壓、酸中毒等，Urea、Cr和肝功能均正常，尿蛋白定性陰性，尿白蛋白排泄率在20～200mg/24h具有早期腎損害的指標(biāo)。另選擇100例來我院體檢中心健康體檢者作為正常對(duì)照組，其中男性55例，女性45例，年齡30～70歲，均無腎病、糖尿病、高血壓、血液病及其他嚴(yán)重疾病，近期未服用任何藥物。

1.2 標(biāo)本收集所有入選本組受試者經(jīng)知情同意后，留取新鮮晨尿10ml，3000r/min（離心半徑12cm）離心10min，取上清液約5ml按操作程序上機(jī)檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)質(zhì)控尿液。

1.3 儀器、試劑及檢測(cè)方法尿液RBP、mAlb、β2-MG采用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法，檢測(cè)試劑由德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司提供。NAG采用終點(diǎn)比色法，檢測(cè)試劑由寧波美康生物科技有限公司提供，以上指標(biāo)均在AU-640上檢測(cè)。

1.4 各項(xiàng)指標(biāo)參考區(qū)間⑴尿RBP參考值：< 0.7mg/L；⑵尿mAlb參考值：<25mg/L；⑶尿β2-MG參考值：<0.2mg/L；(4)尿NAG酶參考值：<18.5U/L。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，在方差齊性的情況下進(jìn)行卡方或t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1糖尿病組尿液中的RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶結(jié)果明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），具體數(shù)據(jù)詳見表1。

表1 糖尿病組與正常對(duì)照組四項(xiàng)指標(biāo)水平（）

表1 糖尿病組與正常對(duì)照組四項(xiàng)指標(biāo)水平（）

組別糖尿病組正常對(duì)照組n 100 100 RBP（mg/L）mAlb（mg/L）β2-MG（mg/L）NAG(U/L) 1.18±0.62 0.25±0.14 45.3±25.5 8.5±2.1 0.30±0.13 0.10±0.02 52.4±37.6 6.4±2.3

2.2 糖尿病患者尿液RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶超過正常上限（x±2s）的陽性例數(shù)及百分率的比較，詳見表2。

表2 糖尿病患者尿液RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶超過正常上限（x±2s）的陽性例數(shù)及百分率

3 討論

糖尿病腎?。―iabetic Nephropathy，DN）是糖尿病引起的嚴(yán)重和危害性最大的一種慢性并發(fā)癥，主要特點(diǎn)是糖尿病所引起的微血管病變而導(dǎo)致的腎小球硬化。隨著糖尿病治療手段及技術(shù)的不斷進(jìn)步，死于糖尿病急性并發(fā)癥如酮癥酸中毒的患者越來越少，但是糖尿病并發(fā)的心血管疾病和腎臟疾病卻成為近年來糖尿病患者的主要致死、致殘?jiān)颉Ｌ悄虿∧I病不僅出現(xiàn)在Ⅰ型糖尿病，近年來發(fā)現(xiàn)2型糖尿病也會(huì)發(fā)展為糖尿病腎病。有學(xué)者研究表明，在腎病初期可實(shí)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)，但一旦病人出現(xiàn)持續(xù)蛋白尿，病情將無法得到有效控制甚至死亡。因此，對(duì)糖尿病早期腎損害的診斷顯得尤為重要。檢測(cè)尿中的RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶具有取材容易、無損傷、靈敏、特異性高等特點(diǎn)，可作為診斷糖尿病早期腎損害的靈敏指標(biāo)。

早期糖尿病腎病由于持續(xù)高血糖使腎小球基底膜增厚和細(xì)胞外基質(zhì)增生以及系膜擴(kuò)張，而導(dǎo)致腎小球高濾過和蛋白尿，在DN的早期，在腎小球?yàn)V過膜受損時(shí)它表面的電荷屏障遭到破壞，白蛋白的濾出量大于近曲小管重吸收量時(shí)將會(huì)出現(xiàn)在尿中，表現(xiàn)為微量蛋白尿[1]。近年的研究認(rèn)為，糖尿病早期已伴有腎小管和腎間質(zhì)病變，因此患者尿液中的RBP、mAlb、β2-MG、NAG酶的排泄均有不同程度的增加，且與正常對(duì)照組相比較差異顯著。

RBP是肝臟分泌的一種低分子量蛋白，主要功能是將視黃醇從肝細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)到上皮細(xì)胞，血漿中的RBP約有90%與甲狀腺素結(jié)合前蛋白結(jié)合，形成高分子蛋白復(fù)合物[2]，因此不被腎小球?yàn)V過膜濾過，當(dāng)視黃醇被轉(zhuǎn)運(yùn)到靶細(xì)胞后，RBP便游離到血漿中，迅速被腎小球?yàn)V過，幾乎全部被腎近曲小管重吸收而分解。正常情況下，RBP在尿中穩(wěn)定性強(qiáng)，不易分解，不受PH和血壓干擾，RBP排量很少，但在腎近曲小管損傷時(shí)，尿排量明顯增加，所以RBP排量可作為腎近曲小管損傷的標(biāo)志物[3]。mAlb生理?xiàng)l件下出現(xiàn)于尿液中的量極微，是反映腎小球?yàn)V過膜受損的早期敏感指標(biāo)[4]。正常人體內(nèi)的β2-MG的生成和釋放速度是非常恒定的，且能自由通過腎小球?yàn)V過膜，原尿中的99.9%的β2-MG可被腎小管上皮細(xì)胞重吸收和降解，當(dāng)腎近曲小管輕微受損時(shí)，對(duì)β2-MG重吸收下降，使尿中β2-MG含量增加[5]。NAG酶是大分子糖蛋白，其主要合成和貯存器官是腎臟，以近曲小管上皮細(xì)胞含量最高，可反映近曲小管功能的改變[6]。

在對(duì)DN患者的研究發(fā)現(xiàn)混合性蛋白尿同腎小球和腎小管的損傷密切相關(guān)，聯(lián)合監(jiān)測(cè)尿微量白蛋白和RBP對(duì)于診斷更有意義[7]。如表二所示，兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)中，RBP和mAlb的聯(lián)合檢測(cè)陽性率可達(dá)65%，比其他的兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)陽性率要高。因此多項(xiàng)目檢測(cè)相對(duì)于單個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)，能夠涵蓋腎小球損傷、腎小管損傷、感染及氧化應(yīng)激等多個(gè)方面，對(duì)于DN患者早期腎損傷的診斷和治療有積極意義。有研究顯示，在對(duì)年輕糖尿病患者尤其是有微血管病變的患者進(jìn)行尿的NAG分泌速率測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)，患者的前天夜間和第二天上午的尿NAG和肌酐比值測(cè)定的結(jié)果顯示，糖尿病患者第二天上午的尿NAG和肌酐比值顯著高于前天夜間的比值，并且有并發(fā)癥的患者其第二天上午的尿NAG和肌酐比值也顯著高于前天夜間的比值，但是比值本身同血壓、性別、疾病進(jìn)展、胰島素依賴及尿糖無關(guān)[8]。在DN患者的早期尿液標(biāo)志物中研究發(fā)現(xiàn)對(duì)NAG和尿白蛋白的排泄率進(jìn)行聯(lián)合監(jiān)測(cè)能夠鑒別DN患者的易感性，聯(lián)合監(jiān)測(cè)比起單個(gè)項(xiàng)目監(jiān)測(cè)能夠得出一個(gè)更好的預(yù)測(cè)模型[9]。在對(duì)糖尿病患者尿液進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在經(jīng)過硫胺素治療后，發(fā)現(xiàn)只有34%患者中尿白蛋白含量降低，但其他尿液蛋白質(zhì)標(biāo)志物沒有顯著變化[10]，證實(shí)多項(xiàng)目檢測(cè)對(duì)于DN患者早期腎損傷的診斷和治療有一定意義。從表2可看出單項(xiàng)檢測(cè)這四項(xiàng)指標(biāo)的陽性率較低，兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)陽性率提高不明顯，三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)陽性率較高，四項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)陽性率最高，可達(dá)89%。

因此糖尿病腎病患者的早期腎損傷的生物標(biāo)記指標(biāo)多，采用單個(gè)指標(biāo)檢測(cè)容易受到運(yùn)動(dòng)、尿路感染、晝夜排泄量、高血壓、心功能不全和急性發(fā)熱等影響，各個(gè)指標(biāo)的影響因素眾多，單個(gè)指標(biāo)的應(yīng)用不能起到應(yīng)有的作用，我們課題組希望通過對(duì)患者和正常人群的尿中視黃醇結(jié)合蛋白、尿微量白蛋白、β2微球蛋白、NAG酶聯(lián)合檢測(cè)，確定糖尿病腎病患者早期腎損傷的危險(xiǎn)因素，并進(jìn)一步建立糖尿病腎病患者早期腎損傷的診斷模型，從而在糖尿病腎病早期診斷、療效評(píng)估及預(yù)后等方面發(fā)揮作用。

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A

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江西省上饒市衛(wèi)生計(jì)生委資助課題（20151CZD10）