三酸散的制備及苯甲酸和水楊酸的含量測(cè)定

高 丹，程麗萍，郇 瑜，趙洪雨，初 旭，苑振亭

(中國(guó)人民解放軍第二三零醫(yī)院藥劑科，遼寧丹東 118000)

三酸散是《軍隊(duì)制劑規(guī)范》2002年版收載的含有硼酸、水楊酸及苯甲酸(硼酸∶水楊酸∶苯甲酸為4∶2∶1)組成的復(fù)方制劑，水楊酸及苯甲酸具有抗菌作用和溶解皮膚角質(zhì)的作用，臨床用于治療足癬［1-2］?！盾婈?duì)制劑規(guī)范》中該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)苯甲酸和水楊酸的含量做出限定，有關(guān)苯甲酸和水楊酸的含量測(cè)定有很多研究［3-9］，但未見三酸散中苯甲酸和水楊酸的含量測(cè)定報(bào)道。為此，我們采用HPLC法測(cè)定了三酸散中苯甲酸和水楊酸的含量，同時(shí)對(duì)其制備工藝進(jìn)行了改進(jìn)，現(xiàn)介紹如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(HTTACHI L-7110);紫外分光光度計(jì)(上海棱光技術(shù)有限公司，Gold S54T)。

1.2 試藥 苯甲酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110822-200305);水楊酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110501);三酸散(醫(yī)院自制制劑，批號(hào):20130711-1，20130711-2，20130711-3;20130713-1，20130713-1，20130713-1)。

2 方法與結(jié)果

2.1 三酸散制備 分別取處方比例的硼酸、水楊酸及苯甲酸研成最細(xì)粉(全部通過六號(hào)篩，并含能通過七號(hào)篩不少于95%的粉末)，采用等量遞加法先將硼酸和水楊酸混勻，然后再采用等量遞加法將其加入苯甲酸中混勻，即得。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的確定 精密稱取苯甲酸和水楊酸對(duì)照品適量(按照三酸散中苯甲酸和水楊酸的處方比例精密稱取)，分別用流動(dòng)相溶解制成適宜濃度的溶液，分別在波長(zhǎng)200～400 nm間進(jìn)行掃描，確定苯甲酸和水楊酸的測(cè)定波長(zhǎng)為232 nm，見圖1。

2.2.2 色譜條件 色譜柱:Eclipcy plus C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇—0.05 mol·mL-1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0)(1∶1);檢測(cè)波長(zhǎng):232 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:室溫。進(jìn)樣量:20 μL。

2.2.3 溶液制備 (1)對(duì)照品儲(chǔ)備液:分別取苯甲酸、水楊酸對(duì)照品適量，精密稱定，置同一容量瓶中，用流動(dòng)相溶解制成每1 mL約含苯甲酸0.5 mg和水楊酸1 mg的對(duì)照品儲(chǔ)備液;(2)對(duì)照品溶液:精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.5 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得;(3)供試品儲(chǔ)備液:取三酸散約0.1 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得;(4)供試品溶液:再精密量取供試品儲(chǔ)備液1.5 mL，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得;(5)陰性樣品溶液:按處方配制缺苯甲酸和水楊酸的陰性樣品。

2.2.4 專屬性試驗(yàn) 分別吸取2.2.3項(xiàng)下溶液制備(2)對(duì)照品溶液、(4)供試品溶液、(5)陰性樣品溶液，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定，記錄色譜圖，理論板數(shù)按水楊酸峰計(jì)算不低于2 000，苯甲酸峰與水楊酸峰的分離度應(yīng)符合要求，見圖2。

2.2.5 最低檢出量 分別精密量取2.2.3項(xiàng)下(2)制備的苯甲酸和水楊酸對(duì)照品溶液適量，分別用流動(dòng)相稀釋制成適宜的濃度，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定，記錄色譜圖，使S/N=3，測(cè)得苯甲酸和水楊酸的最低檢出濃度分別為0.39 mg·L-1和0.13 mg·L-1。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.2.3項(xiàng)下(4)制備的供試品溶液樣品1 份，于室溫放置8 h，分別在0、1、2、4、8 h取樣，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定，記錄色譜圖，苯甲酸和水楊酸平均峰面積的 RSD分別為0.15%和 0.41%。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 取2.2.3項(xiàng)下(4)制備的供試品溶液樣品1份，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，記錄色譜圖，苯甲酸和水楊酸平均峰面積的RSD分別為1.43%和1.76%。

2.2.8 線性關(guān)系試驗(yàn) 分別精密量取2.2.3項(xiàng)下(1)制備的苯甲酸和水楊酸對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1、1.5、2、3 mL，置 50 mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻(苯甲酸系列濃度為 5、10、15、20、30 mg·L-1，水楊酸系列濃度為 10、20、30、40、60 mg·L-1)，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定，記錄色譜圖，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積值(A)為縱坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸。其回歸方程為:苯甲酸:A=109 287C+37 431，r=0.994 3，結(jié)果表明苯甲酸在 5 ～30 mg·L-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;水楊酸:A=63 894C+4 890.2，r=0.995 6，結(jié)果表明水楊酸在 10 ～60 mg·L-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)2.2.3項(xiàng)下溶液制備(4)供試品溶液 6份，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件各進(jìn)樣3次測(cè)定，測(cè)得苯甲酸和水楊酸峰面積的RSD分別為0.96%和0.83%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已測(cè)得含量三酸散(含苯甲酸和水楊酸相當(dāng)于標(biāo)示量的99.21%和100.5%)適量，按照 2.2.3 溶液制備(3)制備供試品儲(chǔ)備液，精密量取制備供試品儲(chǔ)備液0.75 mL，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備液 0.25、0.4、0.6 mL 置25 mL 量瓶中，加流動(dòng)相適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定，記錄色譜圖，測(cè)定其含量，均按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率=(測(cè)定量-已知含量)/加入量×100%，結(jié)果見表1。

2.2.11 樣品含量測(cè)定 精密量取2.2.3項(xiàng)下溶液制備(4)供試品溶液，按2.2.2項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定，記錄色譜圖，同法測(cè)定對(duì)照品溶液，苯甲酸和水楊酸均按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算其含量，結(jié)果見表2。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

表2 三酸散中苯甲酸和水楊酸的含量測(cè)定結(jié)果(標(biāo)示百分含量)

3 討論

三酸散是由硼酸、水楊酸及苯甲酸組成的復(fù)方制劑，原工藝是分別將硼酸、水楊酸及苯甲酸研成細(xì)分混勻后分裝，但我們?cè)趯?duì)水楊酸及苯甲酸含量測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)，含量很不穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，硼酸和水楊酸的比重相近，而苯甲酸的比重較小，在混勻時(shí)因比重和質(zhì)量不同，易導(dǎo)致混合不均勻。因此，制備時(shí)采用等量遞加法首先將硼酸和水楊酸最細(xì)粉混勻，然后再采用等量遞加法將其加入苯甲酸最細(xì)粉中混勻，以保證制劑的均勻度。

采用HPLC法測(cè)定三酸散中苯甲酸和水楊酸的含量，方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，可有效排除可能存在的其他雜質(zhì)的干擾，可用于三酸散中的苯甲酸和水楊酸含量測(cè)定。

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