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      自擬宣肺定喘湯對咳嗽變異性哮喘模型大鼠血清INF-γ和IL-4水平的影響

      2015-11-25 08:02:40吳尚華沈玉鵬楊志華魏桂梅
      衛(wèi)生職業(yè)教育 2015年18期
      關(guān)鍵詞:宣肺變異性空白對照

      吳尚華,沈玉鵬,楊志華,魏桂梅

      (1.甘肅省中醫(yī)院白銀分院,甘肅 白銀730090;2.甘肅省中醫(yī)院,甘肅 蘭州730050)

      自擬宣肺定喘湯對咳嗽變異性哮喘模型大鼠血清INF-γ和IL-4水平的影響

      吳尚華1,沈玉鵬2,楊志華2,魏桂梅1

      (1.甘肅省中醫(yī)院白銀分院,甘肅 白銀730090;2.甘肅省中醫(yī)院,甘肅 蘭州730050)

      咳嗽變異性哮喘;宣肺定喘湯;免疫調(diào)節(jié);INF-γ和IL-4

      咳嗽變異性哮喘(CVA)又稱隱匿性哮喘,是以氣道過敏高反應(yīng)及慢性氣道炎癥為主要表現(xiàn)的一種特殊類型的哮喘,易因感冒、化學(xué)物質(zhì)刺激、氣候驟變等誘發(fā)或加重[1],臨床上30%的干性咳嗽是由咳嗽變異性哮喘所致,且其發(fā)病率有增高的趨勢[2]。新近研究發(fā)現(xiàn),CVA主要體現(xiàn)為氣道慢性炎癥反應(yīng),表現(xiàn)為氣道高反應(yīng)、高敏感癥狀,二者密切相關(guān)。實驗研究發(fā)現(xiàn),Th1/Th2比值低于正常,或Th2功能亢進、Th1功能低下,均可以引起T淋巴細(xì)胞的含量異常,進而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。本實驗旨在研究自擬宣肺定喘湯對實驗大鼠Th1、Th2型細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-4)水平的影響,以探討其對咳嗽變異性哮喘的免疫調(diào)節(jié)作用。

      1 材料和方法

      1.1 藥物和劑量

      1.1.1 宣肺定喘湯組由蜜麻黃、射干、黃芩、五味子、半夏、僵蠶、蟬蛻等組成。藥材由甘肅省中醫(yī)院藥劑科提供。以0.38 g/ml為等效劑量,依次配置低、中、高劑量組溶液,并將其放置于4℃冰箱保存。

      1.1.2 陽性對照組即小兒肺熱咳喘顆粒(海南新中正制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字號Z20140102),由石膏、連翹、敗醬草等藥物組成,配制成濃度為0.429 g/m l的溶液,放置于4℃冰箱保存。

      1.2 實驗動物

      選用健康的4周齡清潔級Wistar大鼠60只,雌雄各30只,體重(100±20)g,由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供(合格證號2014-11-006)。

      1.3 實驗儀器

      大鼠IFN-γ、IL-4定量夾心ELISA檢測試劑盒,均購自上海西唐生物有限公司。

      1.4 實驗動物分組

      清潔級Wistar實驗幼齡大鼠60只,隨機分為6組,每組10只,分別為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、宣肺定喘湯低劑量組、宣肺定喘湯中劑量組、宣肺定喘湯高劑量組(以上各組分別用A、B、C、D、E、F表示)。

      1.5 模型復(fù)制

      參照咳嗽變異性哮喘豚鼠模型復(fù)制方法[3],采用卵蛋白和氫氧化鋁激發(fā)致敏并用卵蛋白激發(fā)的方法復(fù)制CVA模型大鼠(依次用A、B、C、D、E、F組表示)。正常飼養(yǎng)1周,除空白對照組外,其余各組均在第1、第8天對每只大鼠腹腔注射10%的卵蛋白和A(lOH)3混合溶液1m l致敏。自第2周,將B、C、D、E、F組大鼠置于密閉有機玻璃罩內(nèi),給予含1%OVA溶液的生理鹽水超聲霧化激發(fā)20分鐘,每天一次,共10天。激發(fā)前30分鐘,C、D、E、F組分別灌胃給藥治療。第3周進行咳嗽次數(shù)測定,從腹主動脈采血,用離心機分離血清,測定血清IFN-γ、IL-4含量。

      模型評估:進行激發(fā)實驗時,觀察各組大鼠反應(yīng),癥狀表現(xiàn)有陣發(fā)性咳嗽、嗆咳、毛發(fā)聳立、呼吸困難或憋氣、呼吸頻率增快等,有以上一種癥狀就提示造模成功。

      1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

      2 結(jié)果

      2.1 體征觀察

      空白對照組的大鼠體重穩(wěn)定增長,毛色光亮,反應(yīng)靈敏,行動敏捷,呼吸頻率正常,節(jié)律規(guī)則。各實驗組大鼠在激發(fā)實驗前呼吸平穩(wěn),飲食正常,無特殊異常癥狀;激發(fā)實驗后出現(xiàn)陣發(fā)性咳嗽、嗆咳、打噴嚏、流清涕、呼吸急促、煩躁多動等癥狀。

      2.2 各組大鼠血清IFN-γ檢測結(jié)果比較(見表1)

      表1提示,與空白對照組比較,模型對照組血清IFN-γ值明顯降低(P<0.05);與模型對照組比較,陽性對照組,宣肺定喘湯高劑量組、中劑量組、低劑量組血清IFN-γ明顯升高(P<0.01)。

      2.3 各組大鼠血清IL-4檢測結(jié)果比較(見表2)

      表2結(jié)果顯示,與空白對照組比較,模型對照組血清IL-4值明顯升高(P<0.01);與模型對照組相比,陽性對照組,宣肺定喘湯高劑量組、中劑量組、低劑量組血清IL-4明顯降低(P<0.05),且宣肺定喘湯低劑量組、中劑量組與高劑量組相比,具有顯著性差異(P<0.05)。

      3 討論

      3.1 本病發(fā)病源于痰,解于痰

      本病歸屬于中醫(yī)的“咳嗽”、“喘證”、“哮病”等疾病范疇。古醫(yī)籍中有關(guān)咳嗽的論述較多,《內(nèi)經(jīng)》云:“五臟六腑皆令人咳,非獨肺也?!睆娬{(diào)肺受外感因素影響,尤其以風(fēng)邪為主,使臟腑功能失調(diào),均可致咳嗽。本病的癥狀以慢性咳嗽反復(fù)發(fā)作為主。在病因上,外因為外感六淫之邪,其中以風(fēng)為主;內(nèi)因以飲食不節(jié)、肺脾氣虛為主。在病機上,肺為嬌臟,易受內(nèi)外之邪侵襲而為病,肺氣不宣、閉塞,肺管不利,氣道攣急[4],其宣發(fā)肅降功能失調(diào),肺管的組織形態(tài)也隨之發(fā)生改變,導(dǎo)致氣管痙攣[5]。經(jīng)研究表明:CVA的轉(zhuǎn)歸與平素正氣虛弱、病位深淺、病情輕重、診治是否得當(dāng)有關(guān)。風(fēng)邪外犯,引動宿痰,反復(fù)感冒,誘發(fā)伏痰,故而本病多喘息、喉中痰鳴、氣急,且病情纏綿,病程較長。《癥因脈治》說:“哮病之因,痰飲留伏,結(jié)成巢臼,潛伏于內(nèi),偶有七情之犯,飲食之傷……則哮喘之癥作矣?!闭f明本病因痰飲內(nèi)伏,遇飲食、情志及外感可誘發(fā)。肺為水之上源,脾胃乃水谷之海,肺、脾、腎三臟功能失調(diào),津液代謝障礙,痰濕內(nèi)盛是本病內(nèi)在因素。治法多以宣肺化痰、清熱化痰、健脾化痰、溫肺化痰等為主。

      3.2 中藥復(fù)方宣肺定喘湯與小兒肺熱咳喘顆粒藥效學(xué)評估

      本實驗選用自擬宣肺定喘湯以宣肺止咳、祛風(fēng)解痙為基本治法。麻黃性辛散,疏風(fēng)宣肺,散寒平喘,以驅(qū)邪外出。杏仁、前胡降氣止咳,宣降結(jié)合,適合肺臟特征,通調(diào)上焦氣機。五味子性酸斂,麻黃性辛散,一收一散,調(diào)節(jié)氣機,預(yù)防肺氣宣發(fā)太過。地龍、蟬蛻屬蟲類藥,解痙散風(fēng)之力強,且地龍能緩急平喘,蟬蛻能解表。諸藥相合,不寒不熱,藥性平和?,F(xiàn)代藥理研究認(rèn)為,麻黃堿可松弛支氣管平滑肌,且作用持久,可解除支氣管平滑肌痙攣,起到鎮(zhèn)咳、抗過敏作用[6]。杏仁為肺經(jīng)之要藥,可肅降肺氣,止咳平喘,苦杏仁所產(chǎn)生的氰氫酸、苯甲酸能抑制呼吸中樞,使得呼吸加深,減少咳嗽頻次,下氣除喘,達(dá)到鎮(zhèn)咳平喘的效果。小兒肺熱咳喘顆粒具有清熱化痰、宣肺化痰的作用,其主要由杏仁、石膏、金銀花等11味中藥組成,主要用于熱邪所致的咳嗽、惡風(fēng)、痰黃、喘息等癥狀,具有一定的局限性。而宣肺定喘湯除具有清熱宣肺之基本功效外,還多用蟲藥,如僵蠶、蟬蛻、地龍等,具有息風(fēng)止痙的作用,可緩解氣道痙攣的癥狀,用于風(fēng)邪引起的各種喘息發(fā)作性呼吸道疾病。

      3.3 本病發(fā)病機制的探究

      現(xiàn)代醫(yī)學(xué)免疫學(xué)對于CVA發(fā)病機制的研究多集中于氣道重塑及免疫因子調(diào)節(jié)兩個方面。研究認(rèn)為,T淋巴細(xì)胞為主要的免疫反應(yīng)輔助細(xì)胞,按其功能主要分為Th1、Th2兩種,前者具有調(diào)節(jié)免疫、抗感染的功能,后者可調(diào)控機體免疫變態(tài)反應(yīng),二者相互抑制,保持機體免疫的平衡狀態(tài),若機體發(fā)生變態(tài)反應(yīng),則免疫調(diào)節(jié)作用失常(Th1功能不足,Th2功能亢進,Th1/Th2的比值低于正常),故CVA氣道的慢性炎癥與高反應(yīng)性有密切的聯(lián)系[7]。Th1細(xì)胞又稱炎癥性T細(xì)胞,主要分泌INF-γ等,可促進Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞轉(zhuǎn)化,具有較強的抗感染作用,同時亦可加強宿主自身免疫功能,從而提高自身抵抗力。Th2主要分泌IL-4、IL-5等,可刺激B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生、分泌特異性抗體IgE,使其參與體液免疫??乖吞禺愋缘腎gE交聯(lián)可導(dǎo)致炎性介質(zhì)釋放的鏈?zhǔn)椒磻?yīng),通過INF-γ抑制IL-4的活性來減少體內(nèi)IgE的生成,從而抑制喘息性疾病發(fā)作的早期過程。

      據(jù)藥物現(xiàn)代藥理研究,組方中麻黃、半夏、蟬蛻、僵蠶、地龍諸藥合用,可松弛支氣管平滑肌,緩解支氣管痙攣,抑制免疫炎癥反應(yīng),從而達(dá)到免疫調(diào)節(jié)作用。因此,自擬宣肺定喘湯能借助抑制細(xì)胞因子INF-γ、IL-4的水平、降低機體抗原和特異性抗體交聯(lián),從而抑制或阻斷咳嗽變異性哮喘的早期發(fā)病過程,這可能是中藥復(fù)方治療CVA的機制之一。

      表1 各組大鼠血清IFN-γ含量(±s)

      表1 各組大鼠血清IFN-γ含量(±s)

      注:與空白對照組比較,▲P<0.05;與模型對照組比較,#P<0.01

      組別例數(shù)IFN-γ(pg/ml)空白對照組10120.20±19.31模型對照組1082.46±12.24▲陽性對照組1092.86±11.16#宣肺定喘湯高劑量組10114.32±16.73#宣肺定喘湯中劑量組10101.67±10.36#宣肺定喘湯低劑量組1094.15±12.44#

      表2 各組大鼠血清IL-4含量(±s)

      表2 各組大鼠血清IL-4含量(±s)

      注:與空白對照組比較,▲P<0.01;與模型對照組比較,#P<0.05;與宣肺定喘湯高劑量組比較,★P<0.05

      組別例數(shù)IL-4(pg/ml)空白對照組1012.36±2.13模型對照組1020.12±2.67▲陽性對照組1016.62±1.16#宣肺定喘湯高劑量組1015.96±2.53#宣肺定喘湯中劑量組1016.65±1.36#★宣肺定喘湯低劑量組1017.15±2.44#★

      [1]中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組.咳嗽的診斷與治療指南(草案)[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2005,28(11):738-743.

      [2]侯春光.二陳雙龍湯治療咳嗽變異性哮喘60例[J].實用中醫(yī)藥雜志,2002,2(5):23.

      [3]Nishitsuji M,F(xiàn)ujimura M,Oribe Y,et al.A guinea pig model for cough variant asthma and role of tachykinins[J].Exp Lung Res JT-Experimental lung research,2004,30(8):723-737.

      [4]譚婉君.辨證治療咳嗽變異型哮喘[J].江西中醫(yī)藥,2008,39(1):39.

      [5]李珊.風(fēng)咳方治療咳嗽變異性哮喘的臨床觀察[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2012.

      [6]張的鳳,張金蓮,呂宇虹,等.麻黃相關(guān)藥物應(yīng)用現(xiàn)狀[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2006,18(5):76-77.

      [7]Haczku A,Macary P,Haddad E B,et al.Expression of Th2-cytokines IL-4 and IL-5 and Thl-cytokines IFN-γ in ovalbumin-exposed sensitized Brown-norway rats[J].Immunology,1996(88):247-251.

      G424.31

      B

      1671-1246(2015)18-0158-02

      甘肅省中醫(yī)藥管理局資助項目(GZK-2014-30)

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