RP-H PLC測(cè)定酚酞片的含量

逯小萌

（濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南濮陽(yáng)457000）

RP-H PLC測(cè)定酚酞片的含量

逯小萌

（濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南濮陽(yáng)457000）

目的：建立酚酞片含量測(cè)定的反相高效液相色譜法。方法：色譜柱為Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45），流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm。結(jié)果：酚酞進(jìn)樣量在0.150 7～1.506 6 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.999 8，平均回收率為99.36%，RSD= 0.35%（n=9）。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確度、靈敏度及重復(fù)性均較好，可作為酚酞片的含量測(cè)定方法。

酚酞片；反相高效液相色譜法；含量測(cè)定

酚酞片為白色或微黃色片，藥品別名輕瀉片，用于治療習(xí)慣性頑固性便秘，收載于《中國(guó)藥典》2010年版二部［1］，標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)使用紫外分光光度分析方法進(jìn)行測(cè)定。本研究建立反相高效液相色譜法測(cè)定酚酞片的含量，該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可以更好地控制酚酞片的質(zhì)量。

1　儀器和試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；G1314B型Agilent 1200可變波長(zhǎng)檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫公司）；H4033A型色譜工作站（美國(guó)安捷倫公司）；Precisa92SM--202A型電子天平（瑞士普利賽斯公司）；UVIKON XL型雙光束掃描紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)（法國(guó)賽克曼公司）；KS-500E11型超聲儀（寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司）；0.45 μm微孔濾膜（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；酚酞對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100091-199601，供含量測(cè)定用）；酚酞片（山西亨瑞達(dá)制藥有限公司：批號(hào)141107，140103，141205，規(guī)格均為50 mg）；甲醇、乙醇、乙腈為色譜純；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：275 nm；進(jìn)樣量：20 μL。理論板數(shù)＞5 000。按此色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2溶液的制備

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于酚酞50 mg），置100 mL量瓶中，加乙醇適量，超聲使酚酞片溶解，放冷，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液［2-5］。精密稱取酚酞對(duì)照品25.11 mg，加乙醇適量，超聲使其溶解，放冷，用流動(dòng)相稀釋至濃度為50 μg/mL的溶液作為對(duì)照品溶液；按供試品溶液制備方法制備不含酚酞的溶液，即得陰性對(duì)照溶液［2-5］。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1專屬性試驗(yàn)分別精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)的對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由圖1可見(jiàn)，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾，證明方法可行。

2.3.2線性關(guān)系考察精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)的對(duì)照品溶液3，5，10，15，20，25，30 μL注入液相色譜儀，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：

Y=38.066X-0.835 4，

r=0.999 8（n=7）。結(jié)果表明，酚酞在0.150 7～1.506 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1　酚酞高效液相色譜圖

2.3.3精密度試驗(yàn)精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)的同一供試品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，重復(fù)6次。結(jié)果峰面積平均值為768.66，RSD= 0.25%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h進(jìn)樣20 μL，結(jié)果峰面積的平均值為771.22，RSD=0.27%（n=8）。表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按擬定方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果得RSD=0.29%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6加樣回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的同一批號(hào)的樣品（山西亨瑞達(dá)制藥有限公司，批號(hào)：141107，規(guī)格：50 mg，平均片重0.111 1 g）9份，加入適量對(duì)照品依“2.2.2”項(xiàng)下擬定的方法配成高（120%）、中（100%）、低（80%）3個(gè)量級(jí)的樣品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率和RSD值，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　酚酞加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.4樣品含量測(cè)定

分別精密量取3批樣品適量，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算酚酞片的含量，并與《中國(guó)藥典》2010年版二部方法進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果（%）

3　討論

在試驗(yàn)波長(zhǎng)的選擇上，取對(duì)照品溶液在UVIKON XL型雙光束掃描紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)200～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，測(cè)得在229 nm與275 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。因?yàn)榇蠖鄶?shù)溶劑都在短波長(zhǎng)處有最大吸收，為了減少干擾和得到準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)［3］，故選擇275 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

在流動(dòng)相及其比例的選擇上分別選擇了甲醇∶水、乙腈∶水、甲醇∶乙腈∶水及甲醇-0.1%磷酸二氫鉀等進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果用甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）作為流動(dòng)相，樣品主成分峰型良好，峰型尖銳，保留時(shí)間合理，且陰性對(duì)照溶液峰對(duì)其無(wú)干擾，分離效果滿意，故選擇甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）為流動(dòng)相。

采用RP-HPLC測(cè)定酚酞片的含量，操作簡(jiǎn)單易行，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，線性關(guān)系良好，提高了含量測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度，與《中國(guó)藥典》2010年版二部紫外分光光度法的測(cè)定結(jié)果比較基本一致，可用于酚酞片含量的測(cè)定。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：882.

［2］王玫，曹霞.HPLC法測(cè)定酚酞片的含量探討［J］.黑龍江醫(yī)藥，2009，22（3）：260-261.

［3］孫銀華.HPLC法測(cè)定酚酞片中酚酞的含量［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2011，6（25）：15-16.

［4］萬(wàn)慶，錢世兵.RP-HPLC法測(cè)定酚酞片的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2006，10（12）：922-923.

［5］胡丹.RP-HPLC法測(cè)定酚酞片中酚酞的含量［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51（23）：81-82.

Content Determination of Phenolphthalein Tablets by RP-HPLC

Lu Xiaomeng
（Puyang Municipal Institute for Food and Drug Control，Henan Puyang 457000，China）

Objective：To establish a method to determine the content of phenolphthalein tablets by reversed phase high-performance liquid chromatography（RP-HPLC）.Methods:The chromatographic column was Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）with a mobile phase of methanol-acetonitrile-water（25∶30∶45），the flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was at 30℃，and the detection wavelength was at 275 nm.Results:A good linear relationship was showed between the peak area and phenolphthalein sample volume of 0.150 7～1.506 6 μg，r=0.999 8.The average recovery rate was 99.36%，RSD=0.35%（n=9）.Conclusion:The method is accurate，sensitive and repeatable，and can be used for the content determination of phenolphthalein tablets.

Phenolphthalein Tablets；RP-HPLC；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.10.003

2015-06-10）

逯小萌，男，主管藥師。研究方向：藥品檢驗(yàn)。E-mail：lumeng911@163.com