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    PIWI相互作用RNA:結(jié)直腸癌診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物

    2023-10-29 07:57:34李雪婷李百祥
    關(guān)鍵詞:轉(zhuǎn)座子標(biāo)志物直腸癌

    聞 杰,李雪婷,李百祥

    哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室,黑龍江 哈爾濱 150081

    結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)的數(shù)據(jù)[1]:在2020 年,結(jié)直腸癌成為全球癌癥死亡的第二大原因。其中,結(jié)直腸癌在我國(guó)癌癥死亡原因中位居第5位,新增28萬(wàn)人死亡,每年新發(fā)病例達(dá)55萬(wàn)人,且結(jié)直腸癌發(fā)病年輕化趨勢(shì)明顯。因早期通常無(wú)癥狀且缺乏有效的檢測(cè)手段,60%~70%的結(jié)直腸癌患者確診時(shí)已是晚期。結(jié)直腸癌的早期發(fā)現(xiàn)是決定其預(yù)后的最重要因素。因此,探索結(jié)直腸癌的發(fā)生機(jī)制,識(shí)別新的標(biāo)志物是結(jié)直腸癌早期診斷早期治療的關(guān)鍵。最近研究表明,piRNA在血清/血漿與腫瘤組織中表達(dá)穩(wěn)定且易于檢測(cè)[2],異常表達(dá)的PIWI相互作用RNA(PIWI-interacting RNA,piRNA)與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān),并在惡性腫瘤的分化、轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良中發(fā)揮重要作用。此外,在人類基因組中已經(jīng)鑒定出超過(guò)2 萬(wàn)個(gè)piRNA,遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于miRNA(2 000 個(gè)左右)的數(shù)量[3]。這表明piRNA可能是潛在的、有效的癌癥診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物。文章重點(diǎn)闡述了piRNA 的生物學(xué)功能和在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的新進(jìn)展,以及piRNA 在結(jié)直腸癌診斷和預(yù)后中的新思路。

    1 piRNA的概述

    1.1 piRNA的特征與生物發(fā)生

    人類基因組中估計(jì)含有約2 萬(wàn)個(gè)編碼蛋白質(zhì)的基因,約占基因組序列的2%。僅轉(zhuǎn)錄成RNA(約3 000 個(gè))不編碼蛋白質(zhì)的基因被稱為非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)[4]。這些ncRNA 主要包括小干擾RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)、piRNA等(表1)。piRNA是一種長(zhǎng)度約為26~30個(gè)核苷酸,能與來(lái)自Argonaut蛋白亞家族的PIWI蛋白結(jié)合,參與轉(zhuǎn)座因子沉默與調(diào)節(jié)基因表達(dá)的小RNA[5]。最近,開(kāi)發(fā)了許多生物信息學(xué)方法用于piRNA 鑒定,分析它們的功能,以及尋找同源piRNA 和piRNA 簇(表2)。piRNA 與其他小分子ncRNA 如siRNA 或miRNA相比,長(zhǎng)度更長(zhǎng)。其次,piRNA由少量長(zhǎng)單鏈RNA 前體生成,這些前體通過(guò)RNaseⅢ型酶獨(dú)立機(jī)制從不同的轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)錄而來(lái),稱為“piRNA 簇”[6]。最后,piRNA 在3′-端有2′-O-甲基修飾,在5′端有一個(gè)單磷酸基團(tuán),這表明其在不同物種中功能高度保守,具有抗氧化降解的能力,可作為一組有前景的腫瘤標(biāo)志物[7]。piRNA的生物發(fā)生包括兩種主要途徑:一次擴(kuò)增和二次擴(kuò)增(也稱為乒乓循環(huán))[8]。這兩種途徑是對(duì)抗轉(zhuǎn)座子強(qiáng)大防御功能的關(guān)鍵。在一次擴(kuò)增途徑中,長(zhǎng)piRNA 前體從piRNA 簇中轉(zhuǎn)錄,在細(xì)胞質(zhì)中被復(fù)雜因子切割和修飾,然后與PIWI蛋白復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中,產(chǎn)生的piRNA可能在調(diào)控基因表達(dá)中發(fā)揮作用[9]。次要piRNA在乒乓循環(huán)中形成,以特異性增強(qiáng)piRNA序列[10]。

    表1 小的ncRNA的分類Table 1 Classification of small non-coding RNA

    表2 piRNA數(shù)據(jù)庫(kù)及其描述Table 2 piRNA database and its description

    1.2 piRNA的生物學(xué)功能與調(diào)控機(jī)制

    以往研究表明,piRNA/PIWI 通路通過(guò)DNA 甲基化參與轉(zhuǎn)錄基因沉默。DNA 甲基化是DNA 化學(xué)修飾的一種類型,是在不改變DNA堿基序列的情況下,由DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的基因表達(dá)調(diào)控[11],它在長(zhǎng)期基因沉默中起著重要作用,特別是在啟動(dòng)子區(qū)域[12]。DNA高甲基化會(huì)抑制基因的表達(dá),DNA低甲基化則會(huì)激活基因的表達(dá)。DNA甲基化異??赡苤苯踊蜷g接導(dǎo)致腫瘤抑制因子失活[13],piRNA 可以通過(guò)調(diào)節(jié)DNA 甲基化參與疾病進(jìn)展[14]。piRNA 與DNA甲基化之間的相互作用對(duì)基因組穩(wěn)定性和基因表達(dá)具有深遠(yuǎn)影響,可能導(dǎo)致細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的畸變,最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生[15]。已有研究證明,piRNA 在水螅和人類等生物中抑制轉(zhuǎn)座子動(dòng)員[5]。轉(zhuǎn)座子,被稱為跳躍基因,它們通過(guò)將自身插入基因組的方式進(jìn)行重排,轉(zhuǎn)座子的不當(dāng)插入可能會(huì)破壞基因組的穩(wěn)定性和完整性,引起染色體易位、反轉(zhuǎn)、復(fù)制和缺失,過(guò)度激活的轉(zhuǎn)座子有很高的致病性[16]。piRNA簇含有很多轉(zhuǎn)座子,piRNA可以和PIWI蛋白結(jié)合形成piRNA/PIWI 復(fù)合物(piRISC)。piRISC 通常被認(rèn)為是“細(xì)胞的免疫系統(tǒng)”,因?yàn)樗谡麄€(gè)基因組中調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)座子的表達(dá)水平[17],參與轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后基因沉默。piRISC功能喪失或表達(dá)減少可通過(guò)轉(zhuǎn)座子的不受限制作用誘導(dǎo)更大的基因組損傷,同時(shí)導(dǎo)致疾病相關(guān)基因的異常表達(dá)[18]。piRNA可以抑制轉(zhuǎn)座子動(dòng)員,通過(guò)表觀遺傳機(jī)制實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄沉默,并通過(guò)形成piRISC參與轉(zhuǎn)錄后抑制,從而調(diào)控癌癥進(jìn)展[7]。

    piRNA 介導(dǎo)的基因調(diào)控是通過(guò)多種方式進(jìn)行的,如表觀遺傳機(jī)制和piRNA 在轉(zhuǎn)錄后水平介導(dǎo)的基因調(diào)控。其中,piRNA通過(guò)與RNA或RNA核酸內(nèi)切裂解的相互作用,以及對(duì)mRNA 穩(wěn)定性或選擇性剪接。同樣重要的是,在生理和病理環(huán)境下,干擾RNA/piRNA 樣(iRNA/piRNA-L)可能通過(guò)與蛋白質(zhì)編碼基因的直接聯(lián)系參與基因表達(dá)的翻譯或翻譯后調(diào)控[19]。此外,piRNA和PIWI蛋白在生殖干細(xì)胞中高度富集,參與生殖細(xì)胞發(fā)育、干細(xì)胞維持、減數(shù)分裂等。癌癥干細(xì)胞處于異常的“干細(xì)胞”狀態(tài),參與癌癥的發(fā)生,并與癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。癌癥干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄信號(hào)、表觀遺傳狀態(tài)和信號(hào)通路與干細(xì)胞中相類似。一些關(guān)鍵的信號(hào)通路,包括Wnt/β-catenin和Hedgehog通路,在癌癥干細(xì)胞中可能被異常調(diào)節(jié)[20]。因此,piRNA 可能是癌癥預(yù)后和診斷的潛在生物標(biāo)志物。

    2 piRNA與腫瘤

    許多研究表明,piRNA參與了多種癌癥的發(fā)生,并在癌組織和非癌組織中差異表達(dá),包括胃癌、乳腺癌和結(jié)直腸癌等[21]。然而,piRNA 在不同類型癌癥中的作用可能是復(fù)雜的(抑癌或促癌)。piR-823是最重要的piRNA之一,其在肝細(xì)胞癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等[21]幾種癌癥中顯著上調(diào)并促進(jìn)癌癥進(jìn)展。然而,piR-823在胃癌組織中表達(dá)下調(diào),piR-823高表達(dá)模型中胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制,這表明piR-823抑制胃癌的發(fā)展[22]。同時(shí),它被發(fā)現(xiàn)在腎細(xì)胞癌組織中下調(diào),但矛盾的是它與較差的預(yù)后呈正相關(guān),這表明piR-823 在腎細(xì)胞癌中發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性[23]。除此之外,piR-651 也是研究較多的piRNA 之一。它在經(jīng)典霍奇金淋巴瘤[24]、胃癌、肺癌、肝細(xì)胞癌、乳腺癌和結(jié)直腸癌等幾種癌癥中都顯著上調(diào)[21]。與piR-823不同的是,piR-651在胃癌的發(fā)展中具有促進(jìn)作用。piR-651 抑制劑(拮抗劑)可以抑制胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期[25]。值得注意的是,雖然piR-651在經(jīng)典霍奇金淋巴瘤患者樣本中過(guò)表達(dá),但低水平的piR-651與患者預(yù)后差有關(guān)。綜上,piRNA在不同類型癌癥中的作用可能具有特異性?,F(xiàn)已發(fā)現(xiàn),piRNA可能通過(guò)PI3K/PTEN/Akt/mTOR和Ras/Raf/MEK/ERK 這兩條通路參與癌癥的進(jìn)展[26]。piRNA 的異常表達(dá)很可能導(dǎo)致癌細(xì)胞機(jī)制失衡,從而引起細(xì)胞凋亡減少、增殖增加以及侵襲和轉(zhuǎn)移增加,導(dǎo)致癌癥發(fā)展。因此,探索癌癥發(fā)生中相關(guān)的piRNA 及其分子機(jī)制,可以為癌癥診斷與預(yù)后研究提供新的手段。

    3 piRNA 作為結(jié)直腸癌診斷與預(yù)后生物標(biāo)志物的價(jià)值

    目前,在結(jié)直腸癌中發(fā)現(xiàn)了一些異常表達(dá)的piRNA,如piR-823、piR-1245和piR-54265等(圖1)。這些異常表達(dá)的piRNA 與結(jié)直腸癌診斷與預(yù)后密切相關(guān)。越來(lái)越多的研究表明在診斷結(jié)直腸癌方面,piRNA 比常用的結(jié)直腸癌生物標(biāo)志物,如CEA和CA19-9更敏感[27-28],且在反復(fù)凍融或長(zhǎng)期室溫環(huán)境下,有些piRNA 在血清和血漿樣本中表現(xiàn)出高穩(wěn)定性[2]。此外,piR-017724和piR-1245等少數(shù)piRNA表達(dá)異常與結(jié)直腸癌晚期和整體臨床表現(xiàn)不佳相關(guān)[2,29]。因此,piRNA有成為結(jié)直腸癌診斷與預(yù)后生物標(biāo)志物的潛力,甚至成為結(jié)直腸癌的治療靶點(diǎn)。

    圖1 結(jié)直腸癌中異常表達(dá)的piRNAFigure 1 Abnormal expression of piRNA in colorectal cancer

    3.1 piRNA作為結(jié)直腸癌診斷生物標(biāo)志物的價(jià)值

    3.1.1 piR-020619和piR-020450

    結(jié)直腸癌患者血清中piR-020619和piR-020450的表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組[28],piRNA 的激活可能參與了結(jié)直腸癌發(fā)病。聯(lián)合使用這兩種piRNA的診斷性能較好。靈敏度高于常用的結(jié)直腸癌生物標(biāo)志物(CEA 和CA19-9)。最后,在胃癌、肺癌和乳腺癌患者的血清中發(fā)現(xiàn)piR-020619和piR-020450的表達(dá)水平與正常對(duì)照組相似,證明這兩種piRNA對(duì)結(jié)直腸癌診斷具有一定特異性[28]。

    3.1.2 piR-823

    在血漿和癌細(xì)胞系中已經(jīng)鑒定出piR-823,其被認(rèn)為是調(diào)節(jié)惡性腫瘤相關(guān)的piRNA 之一[30]。高表達(dá)的血清piR-823 與結(jié)直腸癌晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化較差有關(guān)[30]。piR-823在結(jié)直腸癌發(fā)展中有多種機(jī)制。第一種機(jī)制是piRNA/PIWI 復(fù)合物2 磷酸化STAT3,通過(guò)STAT3/BCLx1/cyclinD1信號(hào)通路,可能使細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑(CDKI)表達(dá),從而控制G1 期的進(jìn)展。另一種是通過(guò)“翻譯后機(jī)制”,使熱休克蛋白表達(dá)增加,從而抑制細(xì)胞凋亡和促進(jìn)增殖,發(fā)揮促瘤作用[30]。piR-823的診斷性能較好[30],受試者工作特征曲線(ROC 曲線)顯示,piR-823診斷結(jié)直腸癌的特異度為89.3%,靈敏度為83.3%,曲線下面積為0.933(P<0.001),結(jié)直腸癌患者血清中piR-823的表達(dá)與癌變組織表達(dá)呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為0.929,P<0.001)。這些研究支持piR-823作為結(jié)直腸癌診斷的無(wú)創(chuàng)生物標(biāo)志物。

    3.1.3 piR-54265

    piR-54265 在結(jié)直腸癌中表達(dá)上調(diào),其表達(dá)水平與患者耐藥和預(yù)后不良有關(guān),是結(jié)直腸癌的致癌piRNA[31]。功 能研究表明,piR-54265 可以結(jié)合PIWIL2 蛋白,并通過(guò)激活STAT3 信號(hào)通路起作用,促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[31]。此外,血清piR-54265比臨床常用的結(jié)直腸癌生物標(biāo)志物CEA、CA19-9 和CA125 對(duì)結(jié)直腸癌的檢測(cè)更敏感,該piRNA穩(wěn)定存在于患者血清中[27]。與對(duì)照組和其他類型癌癥患者相比,發(fā)現(xiàn)只有結(jié)直腸癌患者血清piR-54265 的水平升高[27],表明血清piR-54265 在結(jié)直腸癌診斷中具有一定特異性。這些發(fā)現(xiàn)支持血清piR-54265作為結(jié)直腸癌早期診斷的生物標(biāo)志物。

    3.1.4 piR-24000

    與鄰近正常組織相比,piR-24000 在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯升高,為結(jié)直腸癌中的致癌基因[32]。piR-24000 過(guò)表達(dá)與侵襲性結(jié)直腸癌表型有很大相關(guān)性。piR-24000診斷的ROC曲線下面積為0.818(95%CI 為0.752~0.883,靈敏度為93.1%,特異度為68.97%,P<0.001)[32]。數(shù)據(jù)顯示,piR-24000可以作為結(jié)直腸癌潛在的診斷標(biāo)志物。但是,這種piRNA 的特異性相對(duì)較低,與其他相關(guān)的生物標(biāo)志物聯(lián)合使用為宜。

    3.1.5 piR-5937和piR-28876

    piR-5937 和piR-28876 在結(jié)腸癌患者的血清樣本中顯著下調(diào),與目前使用的生物標(biāo)志物CEA 和CA19-9相比,它們?cè)跈z測(cè)結(jié)腸癌方面具有更高的靈敏度[33]。此外,術(shù)后1 個(gè)月患者血清樣本中兩種piRNA 的表達(dá)水平均顯著升高。提示piR-5937 和piR-28876 可作為早期結(jié)腸癌檢測(cè)的非侵入性生物標(biāo)志物,也可以作為手術(shù)治療后監(jiān)測(cè)患者的潛在手段。

    3.1.6 piR-18

    piR-18 在結(jié)直腸癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)低于鄰近組織和正常腸黏膜上皮細(xì)胞,這表明,piR-18 可能在結(jié)直腸癌中發(fā)揮抑制作用[34]。實(shí)驗(yàn)證明,piR-18 過(guò)表達(dá)可以抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞系(SW480、LOVO)的增殖、侵襲以及遷移。上調(diào)piR-18表達(dá)是結(jié)直腸癌治療的新思路,piR-18 有望成為新的診斷和治療結(jié)直腸癌的生物標(biāo)志物。

    3.2 piRNA作為結(jié)直腸癌預(yù)后生物標(biāo)志物的價(jià)值

    3.2.1 piR-823

    過(guò)表達(dá)的piR-823與結(jié)直腸癌患者較差的總生存率有關(guān),抑制piR-823 可以顯著抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖[35]。機(jī)制研究表明,piR-823 通過(guò)G6PD/HIF-α通路調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和凋亡,為有前景的結(jié)直腸癌預(yù)后生物標(biāo)志物。

    3.2.2 piR-001311、piR-004153、piR-017723、piR-017724和piR-020365

    研究發(fā)現(xiàn),診斷結(jié)直腸癌的5個(gè)piRNA組合(包括piR-001311、piR-004153、piR-017723、piR-017724和piR-020365)在腫瘤患者中差異表達(dá)[2]。此外,組合piRNA 的診斷潛力優(yōu)于CEA 和CA19-9,血清piRNA的穩(wěn)定性較好。低水平血清piR-017724與患者生存期較差有關(guān),可能是結(jié)直腸癌的獨(dú)立預(yù)后因素,有作為結(jié)直腸癌預(yù)后生物標(biāo)志物的潛力[2]。

    3.2.3 piR-18849、piR-19521和piR-17724

    與鄰近非腫瘤組織相比,結(jié)直腸癌組織中piR-18849、piR-19521 和piR-17724 的表達(dá)水平升高[36]。高表達(dá)piR-18849 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。此外,piR-18849 和piR-19521 的表達(dá)上調(diào)與腫瘤分化程度較差有關(guān)[36],提示這兩種piRNA 在結(jié)直腸癌發(fā)生中起調(diào)控作用,piR-18849 和piR-19521 可能成為結(jié)直腸癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。

    3.2.4 piR-1245

    在結(jié)直腸癌中,piR-1245的表達(dá)上調(diào),起促癌作用[29]。piR-1245的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖率呈正相關(guān)。在結(jié)直腸癌細(xì)胞中,抑制piR-1245可以激活p53 通路,從而抑制細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞壞死和凋亡。piR-1245 影響癌癥相關(guān)基因,通過(guò)抑制幾種腫瘤抑制基因的RNA水平發(fā)揮致癌作用,包括B-細(xì)胞易位基因1(BTG1)、人尿苷磷酸化酶1(UPP1)、激活轉(zhuǎn)錄因子3(ATF3)等在內(nèi)的9個(gè)功能相關(guān)的癌癥基因[29]。結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良與piR-1245 表達(dá)上調(diào)有關(guān),piR-1245 高表達(dá)患者的總生存期較短。由此表明,piR-1245 是結(jié)直腸癌患者可靠的預(yù)后生物標(biāo)志物。

    4 結(jié)語(yǔ)

    綜上所述,piRNA 在結(jié)直腸癌組織與血清中異常表達(dá),提示piRNA 可能調(diào)控了結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展。此外,piRNA 診斷性能優(yōu)于常用生物標(biāo)志物,piRNA 高表達(dá)患者的總生存期較短。由此我們認(rèn)為piRNA 為結(jié)直腸癌診斷與預(yù)后提供了新的可能。但總的來(lái)說(shuō),目前對(duì)這些piRNA 在結(jié)直腸癌中的研究仍處于起步階段,在臨床實(shí)踐中,建立新的基于piRNA 的預(yù)后或診斷程序仍存在大量障礙。未來(lái)對(duì)piRNA 在結(jié)直腸癌中的研究,需要關(guān)注以下幾方面:①深入對(duì)piRNA 在結(jié)直腸癌發(fā)病調(diào)控機(jī)制的研究;②確定結(jié)直腸癌中piRNA 的整體表達(dá)譜;③增加實(shí)驗(yàn)所用結(jié)直腸癌臨床監(jiān)測(cè)樣本量;④盡可能增加結(jié)直腸癌樣本深度測(cè)序的數(shù)量。相信隨著多組學(xué)、測(cè)序等技術(shù)的進(jìn)步,piRNA作為結(jié)直腸癌診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物的價(jià)值會(huì)得到全面和更深入的評(píng)估。

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