高效液相色譜法測(cè)定染發(fā)化妝品中2-氨基-3-羥基吡啶

洪麗

（1.福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院；(2.國(guó)家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心， 福建 福州 350002）

高效液相色譜法測(cè)定染發(fā)化妝品中2-氨基-3-羥基吡啶

洪麗1，2

（1.福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院；(2.國(guó)家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心， 福建 福州 350002）

建立了測(cè)定染發(fā)劑中2-氨基-3-羥基吡啶的高效液相色譜(HPLC)分析方法。以甲醇為提取劑進(jìn)行超聲提取，中性氧化鋁柱凈化樣品，用XB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)分離，以0.02 mol .L-1的乙酸銨和甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。目標(biāo)分析物在相應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)(R2)為0.9994，檢出限為1.1 mg .kg-1，回收率為90.2%～98.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%～3.3%。該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，方法精密度、準(zhǔn)確度和回收率均符合染發(fā)劑樣品測(cè)定的要求。

高效液相色譜；染發(fā)劑；2-氨基-3-羥基吡啶

我國(guó)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》2007版[1]暫時(shí)允許使用的染發(fā)劑原料為93種，2-氨基-3-羥基吡啶為其中氧化型染發(fā)劑中的一種，衛(wèi)生規(guī)范規(guī)定了其在染發(fā)劑中最大允許使用濃度為0.6%。氧化型染料成分多屬于芳香胺類(lèi)化合物，因其多具致敏性或致癌性，使用會(huì)對(duì)人體健康造成多種急性或慢性的傷害[2,3]。

目前文獻(xiàn)報(bào)道的相關(guān)染發(fā)劑原料的檢測(cè)方法有氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）[4]、毛細(xì)管電泳-間接化學(xué)發(fā)光法（CE-CL）[5]、高效液相色譜（HPLC）[6]和超高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS）[7]等。報(bào)道的染發(fā)劑中2-氨基-3-羥基吡啶的檢測(cè)方法有高效液相色譜法[8]和氣質(zhì)聯(lián)用法[9]。文章在樣品提取過(guò)程中利用中性氧化鋁固相萃取柱去除染發(fā)劑中復(fù)雜的基質(zhì)干擾，建立了快速準(zhǔn)確的2-氨基-3-羥基吡啶的高效液相色譜檢測(cè)方法，為染發(fā)劑中原料2-氨基-3-羥基吡啶的定量檢測(cè)提供了一種穩(wěn)定可靠的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Waters2998高效液相色譜儀配二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）；Milli-Q超純水純化系統(tǒng)（美國(guó)Millipore公司）；渦旋混合器（江蘇健康醫(yī)藥公司）；分析天平（賽多力科（北京）科學(xué)有限公司，感量為0.1 mg）；超聲波清洗器(上海生析超聲儀器有限公司)。

水為超純水；乙酸銨(優(yōu)級(jí)純，上海生工生物工程有限公司)；甲醇（色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司）中性氧化鋁(200～300目，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

染發(fā)劑標(biāo)準(zhǔn)品：2-氨基-3-羥基吡啶(CAS號(hào)：16867-03-1，2-amino-3-hydroxypyridine，AHP) ，純度≥97%，上海晶純生化科技股份有限公司。

中性氧化鋁固相萃取柱：稱(chēng)取0.6 g中性氧化鋁，干法填柱，使用時(shí)前用2 mL甲醇活化。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

AHP單標(biāo)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取AHP染料對(duì)照品，置于50 mL比色管中，用甲醇配成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度為1 mg .mL-1于4 ℃冰箱儲(chǔ)存。使用時(shí)，用甲醇稀釋。

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：用甲醇配制濃度為0.2、1.0、5.0、20.0、50.0μg .mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.2.2 流動(dòng)相的配制

流動(dòng)相溶液（0.02 mol .L-1乙酸銨）：稱(chēng)取1.54 g乙酸銨，加水至1000 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，作為流動(dòng)相備用。

1.2.3 樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣1.0 g（精確至1 mg）于50mL比色管中，加入1g無(wú)水硫酸鈉，20mL甲醇，旋渦混勻器上渦旋1 min，超聲提取10 min，混勻，冷凍高速10000 r .min-1離心5 min。取3 mL上清液過(guò)甲醇活化后的中性氧化鋁柱，用2 mL甲醇淋洗，抽干，最后用2.5 mL 50% 甲醇洗脫，用甲醇定容至3 mL，過(guò)0.2μmPTEF濾膜，儀器進(jìn)樣分析。

1.2.4 色譜參考條件

色譜柱：XB-C18柱，150 mm×4.6 mm（內(nèi)徑），5μm。流動(dòng)相：A相(甲醇)+B相(0.02mol .L-1乙酸銨)，洗脫梯度程序：0 ~ 6 min，2% A；6.1 ~ 10 min，2%～60% A； 10.1～12 min，2% A。流速：1.0 mL .min-1。柱溫：35 ℃。進(jìn)樣量：10 μL。檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器。檢測(cè)波長(zhǎng)：314 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件優(yōu)化

2.1.1 色譜條件的選擇

圖1 不同流動(dòng)相和色譜柱對(duì)目標(biāo)染料的分離效果比較

實(shí)驗(yàn)使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨和甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨(含0.2%甲酸)2種流動(dòng)相體系，比較了RP Amide C16 (250 mm×4.6 mm，5 μm)和XB-C18 (150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱對(duì)目標(biāo)染料的分離效果及峰形。使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨流動(dòng)相時(shí)，XB-C18和RP Amide C16 色譜柱分離效果分別如圖1中a1和a2所示；使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨(含0.02%甲酸)流動(dòng)相時(shí)，XB-C18和RP Amide C16色譜柱分離效果分別如圖1中a3和a4所示。由圖可以看出，使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨作為流動(dòng)相時(shí)，XB-C18和RP Amide C16 色譜柱對(duì)目標(biāo)染料分離效果均令人滿意，由于XB-C18為常用色譜柱，因此本實(shí)驗(yàn)選用此柱為分離色譜柱，流動(dòng)相選用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸銨。

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

用二極管陣列檢測(cè)器在200～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，對(duì)目標(biāo)染料進(jìn)行吸收光譜掃描，掃描光譜圖如圖2所示。由圖可知，目標(biāo)染料的最佳檢測(cè)波長(zhǎng)可設(shè)定為314 nm。

圖2 目標(biāo)染料掃描光譜圖

2.2 樣品處理方法優(yōu)化

2.2.1 固相萃取條件優(yōu)化

利用加標(biāo)樣品，選擇了中性氧化鋁柱和聚酰銨柱對(duì)目標(biāo)分析物進(jìn)行凈化處理。回收率結(jié)果表明，樣品經(jīng)中性氧化鋁柱凈化后，回收率大于90%，而聚酰銨柱對(duì)目標(biāo)分析物不保留，因此實(shí)驗(yàn)選用中性氧化鋁柱作為預(yù)處理小柱，中性氧化鋁凈化樣品效果如圖3所示。

使用中性氧化鋁柱時(shí)，用甲醇溶液作為洗脫液，對(duì)目標(biāo)分析物的洗脫回收率結(jié)果如圖4所示，當(dāng)甲醇溶液中水含量大于30%即甲醇溶液中甲醇含量小于70%時(shí)，回收率基本穩(wěn)定且接近100%，因此實(shí)驗(yàn)使用50%甲醇作為洗脫液。

圖3 樣品未凈化前(a1)，凈化后(a2)及樣品加標(biāo)凈化后(a3)

圖4 甲醇溶液對(duì)固相萃取回收率的影響

2.3 方法學(xué)實(shí)驗(yàn)

2.3.1 方法的線性范圍、檢出限及定量下限

AHP染料的線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限(信噪比S/N=3)及定量下限(S/N=10)見(jiàn)表1。結(jié)果表明，AHP染料在相應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，R≥0.998符合標(biāo)準(zhǔn)定量要求。

表1 線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)、檢出限與定量限

表2 樣品(染發(fā)膏)加標(biāo)回收率 (n=6)

2.3.2 方法回收率和精密度

以空白染發(fā)膏樣品作為空白基質(zhì)樣品，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。分別加入如表2所示的3個(gè)水平的質(zhì)量濃度，每個(gè)水平平行測(cè)定6次，AHP染料的平均加標(biāo)回收率為90.2%～96.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.4%～3.3%，表明，該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度。

3 結(jié)論

染發(fā)化妝品中組分較多，對(duì)目標(biāo)分析物會(huì)存在背景干擾，利用中性氧化鋁固相萃取柱能有效去除樣品中的雜質(zhì)，凈化樣品，實(shí)現(xiàn)對(duì)染發(fā)劑中2-氨基-3-羥基吡啶染料的準(zhǔn)確定量分析。文章建立了染發(fā)劑中2-氨基-3-羥基吡啶染料的高效液相色譜分析測(cè)定方法，該方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高和重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。

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O657.7

A

1007-550X（2015）05-0031-04

10.3969/j.issn.1007-550X.2015.05.001

2015-04-19

洪麗，女，福建福州人，助理工程師，主要從事食品及相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量分析研究。