疏肝和胃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

毛和平+鄒干朋+劉光斌

【摘 要】 目的：建立疏肝和胃顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜對元胡、大黃、香附進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜測定制劑中高良姜素的含量，色譜柱為inertsil C18（150mm×4-6mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-0-2%磷酸溶液（60∶ 40）；檢測波長為266nm；柱溫31℃，理論塔板數(shù)按高良姜素計(jì)算應(yīng)不低于6000。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度良好，陰性無干擾，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性良好；高良姜素在0-081～1-62μg/ml（r=0-9999）區(qū)間內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為97-93%，RSD為1-18%。結(jié)論：本方法方便、可靠、準(zhǔn)確，可用于疏肝和胃顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 疏肝和胃顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高良姜素；薄層色譜；高效液相色譜

【中圖分類號】R286-0 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2015）18-0014-03

Research on the Quality Standard of Shugan Hewei Granules

MAO Heping ZOU Ganpeng LIU Guangbin*

Department of Pharmacy，jiugang Hospital，Jiayuguan 735100，China

Abstract：ObjectiveTo formulate the quality standard for Shugan Hewei granules.MethodsThe qualities of Yuanhu（Rhizoma Corydalis yanhusuo W.T.Wang），Dahuang（Radix et Rhizoma Rhei）and Xiangfu（Rhizoma Cyperus rotundus I）in the granules were identified by microscopic examination；Thenatures of Yuanhu， Dahuang and xiangfu were detected by layer chromatography（TLC）and the contents of it measured by HPLC were inertsil C18 column，（15mm×4-6mm，5μm）、methanol-0-2% H3PO4=60/40，v/v， as mobile phase，0-8ml/min as flow speed and wavelength 266nm. Results The result objectived by microscopy were obvious；The TLC spots developed were clear with efficient separating ability，which were negative noninterferencs with the characterstics of high specificity and satisfactory reproducibility；The linear relation between psoralen among 0-081μg/ml-1-62μg/ml（r=0-9999）was excellent；The average recoveries of psoralen and isopsoralen were 97-93% （RSD=1-18%，n=6）respectively。ConclusionTLC and HPLC are handy，safe and accurate for Shugan Hewei granules todetermine the quality。

Keywords：Shugan Hewei Granules；Quality Standard；Galangin；TLC；HPLC

疏肝和胃顆粒是酒鋼醫(yī)院的醫(yī)院制劑，由高良姜、香附、白芍等7味藥物組成，具有疏肝理氣、溫中和胃、控酸止痛之功效，臨床常用于治療肝胃失和所致的胃脘痛。研究采用薄層色譜法對元胡、大黃、香附進(jìn)行鑒別，采用高效液相法（HPLC）測定高良姜素的含量，為全面有效控制疏肝和胃顆粒的質(zhì)量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1-1 儀器 島津LC-15C高效液相色譜儀（SPD-15C紫外檢測器，LC solution15C色譜工作站）；分析天平（Sartorious）。

1-2 材料 高良姜素對照品（批號：111699-200501）、延胡索乙素對照品（批號：0726-200107）、大黃酸對照品（批號：110757-200206）、香附對照藥材（批號121059-200706）均購于中國食品藥品檢定研究院；硅膠GF254薄層板、硅膠G薄層板、硅膠H薄層板均購于青島海洋化工有限公司；自制疏肝和胃顆粒（批號：20120201、20120202、20120203、20120204、20120205、20120206）和陰性樣品（酒鋼醫(yī)院制）；甲醇、磷酸為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2-1 TLC鑒別

2-1-1 元胡TLC鑒別[1]22 取疏肝和胃顆粒30g，加甲醇50ml，超聲處理30min，0-45μm濾膜濾過，蒸干濾液；殘?jiān)铀?0ml溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性；用乙醚振搖提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，做為供試品。取陰性供試品（缺元胡）30g，同法制備陰性溶液。取延胡索乙素對照品5-1mg置于10ml容量瓶中，用甲醇定容，做為對照品溶液。按照薄層色譜法，取硅膠G薄層板用3%NaOH溶液浸泡3秒，105℃活化30min，置干燥器備用。吸取上述三種溶液各4～6μl，分別點(diǎn)于處理好的同一薄層板上，以甲苯-丙酮（9∶ 2）為展開劑展開，取出，晾干；然后置碘缸中約3min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈365nm下檢視。結(jié)果供試品在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品在此位置無干擾。見圖1。

2-1-2 大黃TLC鑒別[1]130，[2-3] 取疏肝和胃顆粒3g，加甲醇20ml，超聲處理30min，靜置1h，0-45μm濾膜濾過，取濾液5ml蒸干；殘?jiān)铀?0ml使溶解，加鹽酸1ml，加熱回流30min，立即冷卻；用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干；殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，做為供試品。取陰性供試品（缺大黃）3g，同法制備陰性溶液。取大黃酸對照品5mg于5ml容量瓶中，用甲醇定容，做為對照品。按照薄層色譜法，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶ 6∶ 1）為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。結(jié)果供試品在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品在此位置無干擾。見圖2。

2-1-3 香附的TLC鑒別[1]241 取疏肝和胃顆粒12g，加乙醚5ml，超聲處理60min，濾紙濾過，濾液蒸干；殘?jiān)靡宜嵋阴?ml溶解，做為供試品。取陰性供試品（缺香附）12g，同法制備陰性溶液。取香附對照藥材0-2568g，加乙醚20ml，超聲處理60min，濾紙濾過，濾液揮干，加乙酸乙酯0-125ml溶解，做為對照藥材溶液。按照薄層色譜法，取經(jīng)105℃活化30min的硅膠GF254薄層板，吸取上述三種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一薄層板上，展開時(shí)薄層板與展開缸底部接近90°，以二氯甲烷為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視。結(jié)果供試品在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的深藍(lán)色斑點(diǎn)，陰性樣品在此位置無干擾。見圖3。

2-2 高良姜素的含量測定[1]附錄34，[4]

2-2-1 色譜條件 色譜柱：Theromo BDS Hypersil C18 柱（250mm×4-6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0-2%磷酸溶液（60∶ 40，V/V）；檢測波長：266nm；柱溫：31℃，理論塔板數(shù)按高良姜素計(jì)算應(yīng)不低于6000。

2-2-2 對照品溶液的制備 精密稱取高良姜素對照品4-05mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到0-405mg/ml對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液1ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，得40-5μg/ml對照品溶液。

2-2-3 供試品溶液的制備 取疏肝和胃顆粒研細(xì)（過80目篩），精密稱取粉末6-0g，置于250ml錐形瓶中，加甲醇溶液100ml，稱定重量，回流提取60min，放至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的甲醇，搖勻，用微孔濾膜（0-45μm）濾過，取續(xù)濾液即得。

2-2-4 陰性對照品溶液的制備 取缺高良姜素的陰性對照樣品6-0g，同供試品溶液制備方法制備陰性對照樣品溶液。

2-2-5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液在上述色譜條件下各進(jìn)樣20μl，測HPLC圖譜。結(jié)果表明陰性樣品在與對照品色譜相同位置處無干擾。見圖4。

2-2-6 線性關(guān)系考察 分別吸取上述對照品溶液0-081、0-202、0-405、0-810、1-215、1-620μg注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（Y）對濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=4254346X-9001（r=0-9999），表明高良姜素在0-081～1-62μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。回歸曲線見圖5。

2-2-7 精密度試驗(yàn) 取同一對照品溶液依法重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20μl，測定峰面積。峰面積的RSD為1-12%，表明儀器的精密度良好。

2-2-8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0-5、2、4、8、12、24h進(jìn)樣20μl，測定峰面積并計(jì)算延胡索乙素的RSD。結(jié)果RSD為1-93%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2-2-9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品共5份，按供試品溶液的制備方法制備溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果延胡索乙素平均含量為0-2727 mg/g，RSD為0-45%，表明重復(fù)性良好。

2-2-10 最低檢測限 精密吸取上述對照品溶液適量，加流動(dòng)相逐步稀釋至色譜圖中高良姜素的峰高為噪音的3倍（信噪比S/N≥3）。高良姜素的最低檢測限為0-23 μg/ml。

2-2-11 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量（0-2694 mg/g）的疏肝和胃顆粒樣品各6g，分別精密加入高良姜素對照品溶液（0-405mg/ml）4ml，照供試品溶液制備方法制備并依法測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2-2-12 樣品測定 精密稱取5批不同批號的疏肝和胃顆粒樣品，按供試品溶液的制備方法制備溶液，測定含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

元胡的薄層色譜鑒別時(shí)，采用3%NaOH浸泡3秒，普通硅膠G薄層板，使元胡中的元胡索乙素以游離態(tài)展開，有效防止了斑點(diǎn)拖尾，提高了分離效果[5]。

元胡和大黃TCL鑒別，分別從溫度（15、25、35℃）及薄板型號等方面考察了方法耐用性。結(jié)果斑點(diǎn)清晰，分離度良好，分離無明顯差異，表明方法耐用性良好。

取高良姜素對照品溶液用紫外可見分光光度計(jì)于200～400nm處進(jìn)行掃描，從紫外圖譜中可見在266nm處有比較強(qiáng)的最大吸收，與有關(guān)參考文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，故選擇266nm為檢測波長。

2010版《中華人民共和國藥典》中高良姜素測定流動(dòng)相比例為甲醇-0-2%磷酸溶液（55∶ 45）[1]270，但結(jié)果不理想，研究將流動(dòng)相比例調(diào)至甲醇-0-2%磷酸溶液（60∶ 40），高良姜素達(dá)到基線分離。

經(jīng)過5批樣品高良姜素含量測定，高良姜素含量最低為0-2678mg/g，考慮到原料藥材的含量差異及工藝穩(wěn)定性，將高良姜素含量低限以樣品最低值的65%作為含量低限，則疏肝和胃顆粒中高良姜素含量不得低于0-17mg/g。參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：22，130，241，270，附錄34.

[2]劉光斌，李懷彪.大黃通氣口服液的穩(wěn)定性研究[J].西部中醫(yī)藥，2013，26（11）：25-29.

[3]劉光斌，李懷彪，謝六生，等.大黃通氣口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2011，18（7）：47-49.

[4]司馬義江·阿布都熱西提，阿依努爾·阿木提. HPLC法測定維藥羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量[J].中國民族民間醫(yī)藥，2014，23（23）：8-9.

[5]肖環(huán)賢，陳映良.和胃止痛膠囊中延胡索、吳茱萸的鑒別方法研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2010，19（5）：20-21.

[6]李智勇，孫冬梅.HPLC法測定高良姜中高良姜素和山奈素的含量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2010，25（9）：1368-1370.

（收稿日期：2015-06-18）