可逆性輸卵管節(jié)育器干預(yù)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的實(shí)驗(yàn)研究

王哲，路芳，陳佃紅，張平

·論著·

可逆性輸卵管節(jié)育器干預(yù)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的實(shí)驗(yàn)研究

王哲，路芳，陳佃紅，張平

目的：逆流法建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）模型，觀察可逆性輸卵管節(jié)育器對(duì)大鼠EMs的預(yù)防作用。方法：30只大鼠隨機(jī)分為3組，每組各10只，實(shí)驗(yàn)組逆流造模同時(shí)放置可逆性輸卵管節(jié)育器，陰性對(duì)照組逆流造模，空白對(duì)照組不做處理。術(shù)后8周檢測(cè)血清中抗子宮內(nèi)膜抗體（EmAb）和CA125，觀察組織形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)8周后3組大鼠血EmAb、CA125濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。陰性對(duì)照組血EmAb、CA125濃度高于空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組（均P＜0.05）?？瞻讓?duì)照組無1例發(fā)病，陰性對(duì)照組8例發(fā)病，異位病灶體積（74.20±6.32）mm3，實(shí)驗(yàn)組1例發(fā)病，異位病灶體積為1.50mm3。結(jié)論：可逆性輸卵管節(jié)育器可預(yù)防大鼠EMs的發(fā)生。

子宮內(nèi)膜異位癥；避孕器械；輸卵管；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；大鼠，Wistar；CA-125抗原Corresponding author：WANG Zhe，E-mail：jnwz63_@126.com；ZHANG Ping，E-mail:761298071@qq.com

【Abstract】Objective:To build the rat model of endometriosis by reflux method，observed the preventive effect of reversible oviduct synthetic on endometriosis in rats.Methods:The rats were divided into three groups randomly，experimental group（molding by reflux method and placement reversible oviduct synthetic），negative control group（molding by reflux method），blank control group（no processing）.Then tested EmAb and CA125 in serum，and observed the tissue morphological variations in eight weeks after operation.Results:There were difference in EmAb and CA125 in serum between three group（P＜0.05），and the negative control group was significantly higher than the experimental group and blank control group（P＜0.05）.There were also no obvious difference in histomorphology between the experimental group and the blank group.Neither of them developed endometriosis.In histomorphology observation，there is none in blank control group，8 cases in negative control group，ectopic lesions volume（74.20±6.30）mm3，1 case in experimental group，volume for the onset of ectopic lesions 1.50mm3.Conclusions: The reversible oviduct synthetic could prevent endometriosis in rats.

【Keywords】Endometriosis；Contraceptive devices；Fallopian tubes；Animal experimentation；Rats，Wistar；CA-125 antigen

（J Int Obstet Gynecol，2015，42：54-56）

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）是常見多發(fā)的婦科良性疾病，以痛經(jīng)、不孕為主要表現(xiàn)，具有周期性發(fā)作、進(jìn)行性加重、久治不愈等特點(diǎn)，是婦科疑難病癥。該病多發(fā)生于生育期婦女，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響婦女的身心及生殖健康，目前尚無有效的預(yù)防方法。EMs發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣而又深?yuàn)W，確切病因不明，既需宏觀綜合又需細(xì)致深入研究，目前較公認(rèn)的學(xué)說為經(jīng)血逆流學(xué)說。臨床中常有引起子宮內(nèi)膜逆流的操作，如液體膨?qū)m下子宮內(nèi)膜電切、縱隔切除、內(nèi)膜息肉摘除、異物取出、輸卵管插管等宮腔操作，腹腔鏡下輸卵管通液等，是否因此導(dǎo)致盆腔EMs有待商榷。本研究根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究樣本量要求設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將可逆性輸卵管節(jié)育器置于大鼠輸卵管，阻止大鼠子宮內(nèi)膜組織逆行進(jìn)入盆腔，達(dá)到干預(yù)EMs的目的，為臨床進(jìn)一步研究EMs的發(fā)病機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)，對(duì)指導(dǎo)臨床規(guī)范操作，預(yù)防醫(yī)源性疾病，探尋預(yù)防EMs的方法提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康性成熟雌性未交配Wistar大鼠，體質(zhì)量160～190 g，由山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。許可證號(hào)：SCXK（魯）20090001。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑水合氯醛，實(shí)驗(yàn)室自備；注射用青霉素鈉，山東魯抗醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：S130401；戊酸雌二醇，拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司，批號(hào)：202A2。

1.2方法

1.2.1分組30只大鼠隨機(jī)分為3組，每組各10只，實(shí)驗(yàn)組逆流造模同時(shí)放置可逆性輸卵管節(jié)育器，陰性對(duì)照組逆流造模，空白對(duì)照組不作處理。3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

表1　3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量比較 （g，?s）

表1　3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量比較 （g，?s）

組別　n　實(shí)驗(yàn)前體質(zhì)量　解剖前體質(zhì)量空白對(duì)照組　10　170.70±10.05　350.22±10.11陰性對(duì)照組　10　172.40±10.95　353.21±10.42實(shí)驗(yàn)組　10　174.10±13.56　354.50±13.63 F（P）　0.214（0.809）　0.365（0.698）

1.2.2術(shù)前準(zhǔn)備術(shù)前1 d給予造模大鼠灌服戊酸雌二醇，劑量為0.5 mg/kg，使手術(shù)時(shí)大鼠統(tǒng)一處于動(dòng)情期。

1.2.3手術(shù)步驟以10％水合氯醛（300 mg/kg，腹腔注射）麻醉，將大鼠固定于手術(shù)板上，腹部剪毛，常規(guī)消毒，在尿道口上約1 cm處切長(zhǎng)1.5～2 cm的縱形切口進(jìn)腹。暴露雙側(cè)子宮、輸卵管、卵巢，于子宮近輸卵管1 cm處行5mm縱向切口，實(shí)驗(yàn)組沿子宮切口將可逆性輸卵管節(jié)育器置于輸卵管內(nèi)阻塞管腔；陰性對(duì)照組不放置。然后以特制毛刷搔刮子宮內(nèi)膜數(shù)周，6-0腸線縫合切口，用眼科無齒平鉗夾閉子宮下段，經(jīng)子宮輸卵管注射2 mL生理鹽水，使搔刮脫落的子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞逆行入盆腔，逐層縫合皮膚和皮下組織。術(shù)后讓其自然蘇醒，分籠單放，常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2.4術(shù)后用藥術(shù)后實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組連續(xù)5 d灌服戊酸雌二醇0.1 mg/kg，腹腔注射青霉素16×104U/kg。

1.3觀察指標(biāo)及方法

1.3.1生化指標(biāo)術(shù)后8周，抽取大鼠腹主動(dòng)脈血2 mL，用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)血清中抗子宮內(nèi)膜抗體（EmAb）及CA125。

1.3.2組織形態(tài)學(xué)觀察術(shù)后8周，抽血后處死大鼠，立即解剖，觀察子宮、輸卵管、卵巢、腹膜EMs包塊情況，統(tǒng)計(jì)盆腔EMs病灶數(shù)目并測(cè)量最大EMs病灶體積，取下EMs病灶組織，測(cè)量EMs病灶的長(zhǎng)度（L）與寬度（W），按公式V（mm3）=L× W2×0.5計(jì)算體積［1］。取EMs病灶組織，甲醛固定，常規(guī)制片，HE染色，在光鏡下觀察各部位標(biāo)本組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)及差異。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用最小顯著性差異法（LSD法）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1生化指標(biāo)比較實(shí)驗(yàn)8周后3組大鼠血EmAb、CA125濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。陰性對(duì)照組血EmAb、CA125濃度高于空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組（均P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表2。

表2　實(shí)驗(yàn)8周后各組大鼠EmAb，CA125比較 （±s）

表2　實(shí)驗(yàn)8周后各組大鼠EmAb，CA125比較 （±s）

組別　n　EmAb（pg/mL）　CA125（U/mL）空白對(duì)照組①　10　1 051.00±27.36　76.98±1.36陰性對(duì)照組②　10　1 175.63±26.95　86.25±1.86實(shí)驗(yàn)組③　10　1 051.11±33.43　77.51±2.20 F（P）　60.291（0.000）　80.133（0.000）組間比t（P）①：②　125.529（0.000）　9.276（0.000）①：③　1.012（0.939）　0.538（0.519）②：③　124.517（0.000）　8.738（0.000）

2.2組織形態(tài)學(xué)觀察術(shù)后第8周，空白對(duì)照組無一例發(fā)生EMs；陰性對(duì)照組8例發(fā)病，異位病灶體積（74.20±6.32）mm3，病灶多位于卵巢、輸卵管、腹膜；實(shí)驗(yàn)組1例發(fā)病，病灶1.50mm3，位于卵巢、輸卵管。

2.3病理變化空白對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞排列完整，肌層較厚，結(jié)構(gòu)完整，腺體和血管豐富。陰性對(duì)照組異位內(nèi)膜的上皮細(xì)胞扁平，呈長(zhǎng)柱狀或增生呈假?gòu)?fù)層結(jié)構(gòu)，大部分有分泌現(xiàn)象，少數(shù)可見腺體分布，肌層較薄，結(jié)構(gòu)不清。見圖1～3（見后插一）。

3　討論

EMs指具有生長(zhǎng)功能的子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔被覆內(nèi)膜及宮體肌層以外部位，以增生、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等惡性行為造成痛經(jīng)、慢性盆腔痛、性交痛、月經(jīng)異常、不孕等癥狀的疾病，是一種常見、多發(fā)、難治性婦科疾病，嚴(yán)重影響育齡婦女的生活、工作和生殖健康。對(duì)EMs的發(fā)病機(jī)制及中西醫(yī)治療報(bào)道甚多，是婦科學(xué)研究的熱點(diǎn)，如何有效預(yù)防亟待深入研究。

1860年Von Rokitansky首次描述EMs的病名，1899年Russell最早提出子宮內(nèi)膜的腺體可以由卵巢中殘余的副中腎細(xì)胞產(chǎn)生這一體腔上皮化生學(xué)說，后來又出現(xiàn)了子宮內(nèi)膜種植學(xué)說、免疫學(xué)說、干細(xì)胞分化學(xué)說、遺傳學(xué)說及子宮內(nèi)膜在位學(xué)說等各種假說。目前較認(rèn)同的EMs發(fā)病機(jī)制包括種植學(xué)說（經(jīng)血逆流、醫(yī)源性種植、淋巴及靜脈傳播）、體腔上皮化生學(xué)說、誘導(dǎo)學(xué)說。

EmAb是以子宮內(nèi)膜為靶抗原，并引起一系列免疫病理效應(yīng)的自身抗體［2］，是臨床診斷常用的生化指標(biāo)，被認(rèn)為是EMs標(biāo)志性抗體。EMs患者中EmAb的檢出率可達(dá)70％～80％［3］。CA125是腫瘤標(biāo)記物之一，是一種高分子質(zhì)量的糖蛋白抗原，主要來自分泌期子宮內(nèi)膜，內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生CA125的量代表細(xì)胞的活性。EMs患者在位內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生的CA125是正常人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的2～4倍［4］。血清CA125測(cè)定對(duì)EMs有較理想的診斷價(jià)值［4-6］。CA125測(cè)定可用于監(jiān)測(cè)EMs病變活動(dòng)情況，若藥物或手術(shù)治療有效時(shí)CA125下降，復(fù)發(fā)時(shí)又升高［7］。檢測(cè)CA125對(duì)評(píng)價(jià)EMs治療療效具有一定意義，CA125可作為發(fā)現(xiàn)EMs復(fù)發(fā)的檢測(cè)指標(biāo)［8］。血清CA125診斷EMs的敏感度為66.04％，特異度為 90％；EmAb診斷 EMs的敏感度為69.81％，特異度為88％；兩項(xiàng)均為陽性的敏感度為58.49％，特異度為100.00％［9］。曾有學(xué)者經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證經(jīng)血逆流學(xué)說［10］，本實(shí)驗(yàn)將動(dòng)物在體子宮內(nèi)膜逆行入盆腔制作EMs動(dòng)物模型，陰性對(duì)照組的血EmAb、CA125濃度均高于空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組（均P＜0.05），與上述研究相符。本實(shí)驗(yàn)鏡下病理觀察3組亦有差異，經(jīng)組織病理學(xué)及生化指標(biāo)顯示造模成功，表明輸卵管節(jié)育器阻塞輸卵管可阻止子宮內(nèi)膜逆行，再次驗(yàn)證了經(jīng)血逆流種植學(xué)說。

可逆性輸卵管節(jié)育器對(duì)子宮內(nèi)膜病理學(xué)改變不明顯，具有可復(fù)性［11］；可適時(shí)放置和取出；對(duì)子宮內(nèi)膜的組織病理結(jié)構(gòu)無影響，放置后相對(duì)穩(wěn)定，脫落率低［12］，適用范圍廣；可阻止炎性因子經(jīng)輸卵管上行感染引起盆腔腹膜炎癥［13］，減輕放置后并發(fā)癥。是兼具避孕、預(yù)防盆腔腹膜炎、預(yù)防EMs等多功能為一體的器械，本研究用該器械阻塞動(dòng)物輸卵管達(dá)到預(yù)防盆腔EMs的作用，經(jīng)生化及組織病理學(xué)觀察顯示獲得成功。因EMs發(fā)病機(jī)制具有多樣性，該器具未能阻斷淋巴、血液等途徑，免疫因素及其他相關(guān)因素尚需進(jìn)一步研究。但該器具用于生育期婦女，市場(chǎng)需求量大，具有廣闊的應(yīng)用前景，將來人體研究，利用臨床上具有宮腔操作史可致內(nèi)膜損傷流入腹腔致病風(fēng)險(xiǎn)的人群做定期隨訪深入研究其發(fā)病及病因的內(nèi)在聯(lián)系，無需二次損傷試驗(yàn)；調(diào)查有臨床表現(xiàn)的患者經(jīng)超聲、腹腔鏡檢查即可確診，獲得研究結(jié)果及結(jié)論，對(duì)提高女性生殖健康、生活質(zhì)量具有重大的臨床意義。本研究探索主動(dòng)預(yù)防EMs的醫(yī)學(xué)方法，具有重要的臨床意義。為進(jìn)一步的臨床研究開闊了思路，奠定了理論基礎(chǔ)。

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Experimental Research about Reversible Oviduct Synthetic Therapy for Endometriosis in Rats

WANG Zhe，LU Fang，CHEN Tian-hong，ZHANG Ping.
Shandong University Hospital of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China（WANG Zhe，ZHANG Ping）；Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250014，China（LU Fang，CHEN Tian-hong）

2014-07-07）

［本文編輯王琳］

山東省中醫(yī)藥科學(xué)研究項(xiàng)目（2010-093）

250011濟(jì)南，山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院（王哲，張平）；山東中醫(yī)藥大學(xué)（路芳，陳佃紅）

王哲，E-mail：jnwz63_@126.com；張平，E-mail:761298071@qq.com