不同培養(yǎng)基對鐵皮石斛壯苗生根的影響及移栽條件優(yōu)化

許奕　宋順　王安邦等

摘要： 以鐵皮石斛的無菌組培苗 為材料，探討不同培養(yǎng)基、激素對組培苗壯苗生根的影響，同時篩選出最適合移栽組培苗的基質。結果表明：最適合鐵皮石斛壯苗生根的培養(yǎng)基為MS+0 5 mg/L NAA+0 5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+ 8 g/L瓊脂+1 g/L活性炭；移栽基質以泥炭土+樹皮+碎磚+活苔蘚組合效果最佳。

關鍵詞： 鐵皮石斛；壯苗生根；移栽；基質

中圖分類號： S567 23+9 04 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）08-0247-03

鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草” “藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內障等方面均有良好療效 [1-4]。鐵皮石斛大多生長在炎熱潮濕的熱帶、亞熱帶的巖石縫隙中，繁殖率很低，自然野生狀態(tài)下繁殖率只有10%～17%；果實為蒴果，種子小而多，種內胚發(fā)育不全或不成熟，胚胎少胚乳，自然結實率低于5%，在自然條件下須與蘭菌共生才能萌發(fā) [5-7]，因此無法在大田或苗床上播種，很難生產足夠的實生苗用于栽培。鐵皮石斛對生長環(huán)境要求苛刻，成苗困難，采用傳統(tǒng)的分株、扦插等人工繁殖方法進行繁殖，增殖速度非常低，目前組織培養(yǎng)是鐵皮石斛增殖擴繁的主要方法。關于鐵皮石斛的組織培養(yǎng)已有相關報道，但還存在試管苗質量難以保證、移栽成活率低等問題，極大地制約了鐵皮石斛生產規(guī)模的擴大 [2]。壯苗生根是鐵皮石斛組織培養(yǎng)的關鍵。本試驗對鐵皮石斛的組培苗壯苗生根培養(yǎng)基進行優(yōu)化，篩選出能夠獲得鐵皮石斛優(yōu)質移栽組培苗的培養(yǎng)基，以期為實現鐵皮石斛產業(yè)化生產提供依據。

1 材料與方法

1 1 材料

選取長1～2 cm未長根的無菌試管苗進行試驗。

1 2 方法

1 2 1 壯苗生根培養(yǎng)基的篩選 壯苗生根培養(yǎng)以MS培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，設3個處理，分別為A1：MS+1 mg/L NAA+ 1 mg/L 6-BA；B1：MS+0 5 mg/L NAA+0 5 mg/L 6-BA；C1：MS+0 5 mg/L NAA。每個培養(yǎng)基中均加入30 g/L蔗糖、8 g/L 瓊脂、1 g/L活性炭，pH值調至5 8±1 0，每處理接種20瓶，置于培養(yǎng)溫度為（25±2） ℃、光照度為1 500～2 000 lx、光照時間12 h/d條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)30 d后，統(tǒng)計組培苗的生根數、根長、株高等。

1 2 2 組培苗移栽基質的篩選

選取在壯苗生根培養(yǎng)基中生長狀況良好、株高4～5 cm、根長4 cm、具有5條長根的組培苗移栽。首先將組培苗移至室外通風處煉苗2周左右，煉苗溫度為20～25 ℃，將組培瓶蓋逐日擰松，移栽前2 d揭蓋，使組培苗逐漸適應自然環(huán)境。將培養(yǎng)基與小苗一起取出，先用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗幾遍。移栽基質選用泥炭土、樹皮、刨花、碎磚、細鋸末進行不同比例（體積比）搭配，設計不同的移栽基質。移栽基質分別為A：泥炭土 ∶ 樹皮 ∶ 刨花=3 ∶ 3 ∶ 4；B：泥炭土 ∶ 樹皮 ∶ 碎磚=2 ∶ 3 ∶ 5；C：泥炭土 ∶ 樹皮 ∶ 細鋸末=2 ∶ 4 ∶ 4，均覆蓋活苔蘚。每處理重復3次，移栽后7、30 d分別統(tǒng)計鐵皮石斛組培苗移栽成活率。

2 結果與分析

2 1 壯苗生根培養(yǎng)基優(yōu)化試驗

由表1可知，接種30 d后，A1處理下組培苗平均根長為2 3 cm，平均根數為3 4條，平均株高為3 7 cm。B1處理下組培苗平均根長為3 8 cm，平均根數為6 5條，平均株高 4 8 cm，叢生芽較少且生根率較高，試管苗葉片增大，呈長橢圓形，葉片變厚，呈深綠色，部分組培苗還長出較長的氣生根，暴露于空氣中。C1處理下組培苗平均根長為2 8 cm，平均根數為2 3條，叢生芽較多，生根率較低，葉片較小，呈淺綠色。由此可見，以上3種培養(yǎng)基中，組培苗在B1培養(yǎng)基中生長狀態(tài)最佳，生根率可達100%，根長、根數、葉片形態(tài)更適于移栽（圖1）?？梢姡砑硬煌瑵舛萅AA、6-BA對于組培苗生根壯苗影響不同，同時添加了NAA、6-BA的組培苗比單獨使用NAA的組培苗根長且多，葉片厚大。因此，B1處理（MS+ 0 5 mg/L NAA+0 5 mg/L 6-BA+30 g/L 蔗糖+8 g/L 瓊脂+ 1 g/L 活性炭）更適合鐵皮石斛組培苗生根壯苗。

2 2 移栽基質優(yōu)化試驗

移栽時，試管苗由人工控制溫度、光照、水分、養(yǎng)分的理想化無菌環(huán)境逐步轉換到自然條件，移栽后根系由在原培養(yǎng)基內被動吸收水分、養(yǎng)分轉變?yōu)橹鲃游?[8]。鐵皮石斛組培苗的移栽基質應以疏松、通透性好且不易發(fā)霉長菌的原料為主，并配合使用保水保肥的原料才能獲得最佳成活率。以泥炭土、樹皮、刨花、碎磚、細鋸末等基質為材料，對鐵皮石斛移栽基質進行初步篩選結果表明，移栽后7 d，A（泥炭土+樹皮+刨花+活苔蘚）、B（泥炭土+樹皮+碎磚+活苔蘚）、C（泥炭土+樹皮+細鋸末+活苔蘚）3種基質上組培苗移栽成活率分別為89%、92%、90%，可見組培苗移栽后7 d內，這3種基 質上組培苗移栽成活率無明顯差異。移栽后30 d，處理B下組培苗移栽成活率最高，達90%；處理A下組培苗移栽成活 率達到85%；處理C下組培苗移栽成活率達到77%（表2）?？梢?，碎磚透氣性、透水性強，因此較適合被添加在基質中進行組培苗移栽。活苔蘚保水效果較好，苔蘚能夠提供鐵皮石斛生長所需的共生菌，鐵皮石斛共生菌能夠提高其移栽成活率 [9-10]。

3 結論與討論

3 1 壯苗生根

鐵皮石斛的壯苗生根是快速繁殖的關鍵階段，關系到組培[CM（25]苗的整體質量 [4，11]。孟志霞等對比1/2 MS、MS、B5、N6等

4種培養(yǎng)基，認為MS、1/2 MS培養(yǎng)基效果明顯好于其他2種培養(yǎng)基 [12]。本試驗以MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，結果表明，在MS基本培養(yǎng)基中添加0 5 mg/L NAA、0 5 mg/L 6-BA 比較適合鐵皮石斛的壯苗生根。唐桂香等研究表明，NAA濃度為0 5 mg/L時，鐵皮石斛平均根數最多、根長最長 [7]。單獨添加NAA的培養(yǎng)基效果不佳，說明6-BA對鐵皮石斛的壯苗生根有重要作用 [13-16]。同時，NAA、6-BA濃度不宜過高，本試驗中添加0 5 mg/L NAA、6-BA效果要優(yōu)于添加1 mg/L NAA、6-BA。在壯苗生根培養(yǎng)基中常加入的添加物有香蕉汁、馬鈴薯汁、蘋果汁、水解酪蛋白等。陳兆貴等研究發(fā)現，鐵皮石斛壯苗生根培養(yǎng)基中加入10%香蕉提取液為最佳 [17]。周江明研究8種有機物對浙江省江山市江郎山鐵皮石斛試管苗生長發(fā)育的影響，結果表明，生根以加入香蕉提取液為佳 [18]。魏梅娟等認為，香蕉對鐵皮石斛根系生長具有顯著促進作用 [19]。本試驗中壯苗生根培養(yǎng)基也以 100 mL/L 香蕉汁作為添加物。

3 2 移栽

鐵皮石斛的移栽基質以疏松透氣、排水良好、肥料適量、無病菌蟲害潛藏者為宜 [20-21]。袁正仿等研究發(fā)現，以泥炭土（100%）效果最好 [22]。付開聰等認為，無論是鐵皮石斛的成活率、產量、粗壯程度還是高度，均以木塊+苔蘚移栽基質效果最好 [23]。朱艷等研究表明，最適宜的移栽基質是1/3泥炭+1/3鋸末+1/3珍珠巖，覆以苔蘚 [24]。吳雅等篩選出泥炭 ∶ 樹皮 ∶ 刨花=2 ∶ 4 ∶ 4的基質配比作為鐵皮石斛組培苗移栽的最佳基質 [25]。本試驗表明，移栽效果最佳的組合是泥炭土+樹皮+碎磚+活苔蘚，該組合下鐵皮石斛組培苗移栽成活率最高，且組培苗的長勢也較好。

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