舒筋活血丸中羥基紅花黃色素A的含量測定

楊銀鳳，幸 而，王 巖，曾源泉

（1.廣東藥學(xué)院，廣東廣州510006；2.廣州諾金制藥有限公司，廣東廣州513024）

舒筋活血丸中羥基紅花黃色素A的含量測定

楊銀鳳1，2，幸 而2，王 巖1，曾源泉2

（1.廣東藥學(xué)院，廣東廣州510006；2.廣州諾金制藥有限公司，廣東廣州513024）

目的 完善舒筋活血丸的企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)提供試驗數(shù)據(jù)。方法 應(yīng)用高效液相色譜法（HPLC）對舒筋活血丸（大蜜丸）中的羥基紅花黃色素A進(jìn)行定量分析。結(jié)果 建立了本品中羥基紅花黃色素A的HPLC定量測定法，色譜圖表明主成分專屬性試驗無干擾；精密度試驗相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.13%；重復(fù)性試驗RSD為1.95%；進(jìn)樣量在0.277 2～2.772 0 μg內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r=0.999 9；12 h內(nèi)連續(xù)多次測定同一舒筋活血丸樣品溶液，RSD為0.80%，表明穩(wěn)定性良好；平均加樣回收率為97.85%，RSD為1.88%。結(jié)論 HPLC法定量檢測舒筋活血丸中羥基紅花黃色素A方法可靠，可用于企業(yè)內(nèi)部控制舒筋活血丸的質(zhì)量。

活血； 筋； 紅花； 色素類； 色譜法，高壓液相； 質(zhì)量控制； 舒筋活血丸； 羥基紅花黃色素A

舒筋活血丸（大蜜丸）主要包括土鱉蟲、紅花、桃仁、大黃、蘇木、續(xù)斷、馬錢子（制）等20味中藥，具有舒筋活絡(luò)功能，臨床上主要用于跌打損傷、瘀血腫痛的治療[1]。原衛(wèi)生部頒布的標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀檢查和制劑通則檢查，未能準(zhǔn)確有效地控制舒筋活血丸的質(zhì)量。本文通過系列試驗研究，應(yīng)用高效液相色譜法（HPLC）定量檢測舒筋活血丸中的羥基紅花黃色素A，對其標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，以有效控制本企業(yè)所生產(chǎn)制劑質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 FC204電子天平，Shimadzu AUW-120D電子天平，KQ-1000DE型數(shù)控超聲波清洗器，TDL-60B離心沉淀機(jī)，Waters Ac Quity H UPLC class液相色譜儀，Waters PDA檢測器，Phenomenex C18柱。

1.1.2 試劑 舒筋活血丸（廣州諾金制藥有限公司，每丸6 g，批號：5A01601），羥基紅花黃色素A對照品（按91.8%計，中國藥品生物制品檢定所，批號：11637-200905），乙腈、甲醇（廣州飛恩新材料科技有限公司，色譜級），其余試劑為分析純，硅藻土（天津市大茂化學(xué)試劑廠）。

1.2 方法[2-9]

1.2.1 色譜條件 Phenomenex C18柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μ）；流動相為乙腈-甲醇-0.7%磷酸溶液（2∶26∶72）[2]，進(jìn)樣量10 μL，流速1.0 mL/min，按表1進(jìn)行梯度洗脫，紫外檢測波長為403 nm。A為甲醇，B為乙腈-0.7%磷酸溶液。

表1 洗脫梯度

1.2.2 對照品溶液制備 以25%甲醇為溶劑，將適量羥基紅花黃色素A對照品（按91.8%計）置于容量瓶中[2]，制成130 μg/mL的對照品溶液，即得。

1.2.3 供試品溶液制備 取舒筋活血丸1丸，精密稱定，加2/3樣品量的硅藻土與樣品混合研細(xì)，充分轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中[4]，精密加入50 mL 25%甲醇，蓋上瓶塞，超聲提?。üβ?00 W，頻率50 kHz）40 min[2]，搖勻，提取液以4500r/min的速率離心15min，取上清液的續(xù)濾液，即得。

1.2.4 陰性樣品溶液制備 取依據(jù)同一工藝要求制成的舒筋活血丸缺紅花陰性制劑，按1.2.3項供試品處理方法，制備紅花陰性樣品溶液[5]，即得。

1.2.5 分析方法 分別將對照品、供試品及陰性樣品溶液用0.22 μm濾頭過濾，按1.2.1項下色譜條件注入液相色譜儀測定，得相應(yīng)峰面積。

1.2.6 專屬性考察 將1.2.2至1.2.4項下各溶液按前述色譜條件分別進(jìn)行測定，得HPLC色譜圖觀察。

1.2.7 精密度考察 取同一份羥基紅花黃色素A對照品溶液，按1.2.1項下所述條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄主峰峰面積，計算得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.2.8 線性試驗 精密稱定羥基紅花黃色素A對照品7.55 mg[2]，置于25 mL容量瓶中，以適量25%甲醇充分溶解，定容，即得。分別精密移取上述溶液1、2、3、5、7mL，加25%甲醇稀釋至10 mL，并對所得6個不同濃度的對照品溶液進(jìn)行測定，記錄色譜峰面積，以樣品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，作回歸曲線，得相關(guān)系數(shù)。

1.2.9 穩(wěn)定性考察 分別在0、120、240、360、480、600、720 min按照色譜方法對同一份舒筋活血丸樣品溶液進(jìn)行測定，記錄色譜峰面積，得目標(biāo)峰面積的RSD。

1.2.10 重復(fù)性試驗 取6份相同批次的樣品，按1.2.3項下方法制得樣品待測液，按1.2.1所述條件分別測定，得色譜峰面積，計算樣品溶液中主成分含量的RSD。

1.2.11 回收率試驗 精密稱取6份已測知主成分含量的舒筋活血丸3.0 g[9]，各加入2.0 g硅藻土研細(xì)，精密加入對照品溶液1.7 mL（0.277 2 mg/mL）[4]，按照指定方法檢測，得RSD。

2 結(jié) 果

2.1 各組樣品HPLC色譜圖 數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果顯示，舒筋活血丸樣品溶液在羥基紅花黃色素A對照品相同保留時間處有一色譜峰，且陰性樣品溶液在目標(biāo)峰附近無干擾，達(dá)到了系統(tǒng)適應(yīng)性要求。見圖1～3。

2.2 專屬性考察 HPLC色譜圖顯示陰性樣品主成分保留時間附近無干擾。見圖3。

圖1 對照品溶液HPLC色譜圖

圖2 供試品溶液HPLC色譜圖

圖3 陰性樣品溶液HPLC色譜圖

2.3 精密度考察 6次主峰峰面積分別為3 416 008、3 406 401、3 404 738、3 405 946、3 410 298、3 412 327 μV·s，RSD為0.13%，結(jié)果表明本法精密度良好。

2.4 線性試驗 相關(guān)系數(shù)為 0.999 9，回歸方程 Y= 29 000 000X-39 090（n=6），結(jié)果表明進(jìn)樣量在0.277 2～2.772 0 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 穩(wěn)定性考察 目標(biāo)峰面積的RSD為0.80%。結(jié)果表明舒筋活血丸樣品溶液在12 h內(nèi)具有良好穩(wěn)定性。

2.6 重復(fù)性試驗 樣品溶液中主成分含量的RSD為1.95%。

2.7 回收率試驗 RSD為1.88%，見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果

3 討 論

本品為大蜜丸，需要用硅藻土進(jìn)行分散，才能使藥品有效成分得到充分提取。硅藻土的用量約為舒筋活血丸的2/3。由于舒筋活血丸中的藥材細(xì)粉粒直徑小，提取液采用濾紙過濾后，濾液很難通過0.22 μm的濾膜，故采用離心沉淀的方法除去細(xì)粉藥渣，并對離心的時間和轉(zhuǎn)速進(jìn)行了考察，先后采用3 000 r/min 5 min，3 000 r/min 10 min，4 500 r/min 10 min，4 500 r/min 15 min進(jìn)行離心，根據(jù)離心后上層溶液通過0.22 μm微孔濾膜的難易程度，最終選定轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心時間15 min。

傳統(tǒng)工藝采用等度洗脫，20 min內(nèi)各色譜峰分離度良好，但120min處仍有雜質(zhì)峰，若洗脫時間少于120min，雜質(zhì)峰會順延至下一進(jìn)樣的譜圖，影響譜圖的真實(shí)性，故為了減少測定時間，洗除雜質(zhì)，通過試驗研究，改用梯度洗脫，大大提高了測定效率，并對本方法進(jìn)行考察，經(jīng)驗證，方法可靠。因此，本法可作為企業(yè)內(nèi)部控制舒筋活血丸質(zhì)量的項目之一，也為后續(xù)制定法定標(biāo)準(zhǔn)提供了參考。

舒筋活血丸中羥基紅花黃色素A的含量測定目前仍鮮見報道，本文在2010版藥典紅花藥材含量測定項的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，峰型仍舊有些許拖尾，后續(xù)可針對此問題繼續(xù)研究。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.23.042

B

1009-5519（2015）23-3629-03

2015-08-17）

關(guān)于論文“討論”的基本要求

本刊編輯部

楊銀鳳（1989-），女，廣東普寧人，在讀碩士研究生，主要從事中藥制劑研究與開發(fā)工作；E-mail：yangyinfeng1017@163.com。

王巖（E-mail：gdpuwy@126.com）。

現(xiàn)就有關(guān)論文中討論的基本要求介紹如下：（1）討論應(yīng)圍繞論文的主題及中心內(nèi)容，闡明本論文研究的原理和概念；（2）分析結(jié)果中各種數(shù)據(jù)或現(xiàn)象的理論根據(jù)；（3）對結(jié)果的理論或?qū)嵺`意義進(jìn)行科學(xué)評價，但應(yīng)與主題和結(jié)果緊密聯(lián)系；（4）客觀、恰當(dāng)?shù)卦u價研究成果的應(yīng)用價值，指出結(jié)果的可能誤差；（5）指出存在的問題，提出新的研究方向或展望，給讀者以啟迪；（6）用語應(yīng)精煉，避免對前文內(nèi)容、方法與結(jié)果的過多重復(fù)；（7）應(yīng)重點(diǎn)突出，主次分明。