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    四尾柵藻對壬基酚脅迫的響應(yīng)研究

    2015-07-09 11:02:20劉莉莉王成
    安徽農(nóng)學(xué)通報 2015年12期
    關(guān)鍵詞:脅迫

    劉莉莉+王成

    摘 要:選取水體中廣泛存在的四尾柵藻為代表,研究其在營養(yǎng)鹽限制條件下對壬基酚脅迫的響應(yīng)。實驗設(shè)置3個暴露組(0.041、0.103、0.205mg·L-1)和1個對照組(0mg·L-1),測定了96h內(nèi)四尾柵藻細胞密度、胞外多糖合成、最大光能轉(zhuǎn)化效率(Fv/Fm)以及群體形態(tài)等變化。結(jié)果顯示,隨著NP暴露濃度的增加,四尾柵藻的密度、Fv/Fm 等指標的下降幅度更加顯著;0.041mg·L-1NP暴露對四尾柵藻的生長、葉綠素a含量以及Fv/Fm等均有促進作用,說明四尾柵藻在NP暴露下能夠產(chǎn)生毒物刺激效應(yīng)現(xiàn)象。

    關(guān)鍵詞:壬基酚;四尾柵藻;脅迫;毒性效應(yīng)

    中圖分類號 X592 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731(2015)12-24-04

    Study on Scenedesmus quadricanda Responses to Nonylphenol Stress

    Liu Lili1 et al.

    (1 Jianghuai College of Anhui University,Hefei 230031,China)

    Abstract:In order to study the physiological effects of NP on the fresh algae,Scenedesmus quadricanda was exposed to NP of three concentrations(0.041、0.103、0.205mg·L-1) and a control(0mg·L-1) . Its cell number、maximum light conversion efficiency (Fv/Fm) 、extracellular polysaccharide and cell morphology were measured in 96h exposure. Results show that the cell number and Fv/Fm of microalgae were increased in 0.041mg·L-1 NP ,with the increasing of concentrations of NP, the cell number and Fv/Fm of microalgae were decreased,the growth of Scenedesmus quadricanda was inhibited.

    Key words:Nonylphenol;Scenedesmus quadricanda;Stress;Toxic effect

    壬基酚(Nonylphenol,NP),分子式C15H24O,由苯環(huán)和9個碳原子的碳鏈組成,在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到了廣泛的應(yīng)用,中國年產(chǎn)量約為30 300t,其中的60%會排入污水處理系統(tǒng)并最終排入水環(huán)境中[1]。近年來,我國一些重要的自然水體中均已發(fā)現(xiàn)NP的存在,并且由于其不易降解的特性導(dǎo)致環(huán)境中的NP含量不斷累積[2]。水域生態(tài)系統(tǒng)主要初級生產(chǎn)力淡水微藻對水域生態(tài)系統(tǒng)的平衡和穩(wěn)定起著十分重要的作用,因其個體小、繁殖快、對毒物敏感等特點,已成為評價水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測的重要指標[3]。在富營養(yǎng)化的淡水水域中,四尾柵藻(Scenedesmus quadricanda)是常見的優(yōu)勢藻種之一[4]。

    目前,在淡水微藻室內(nèi)毒理實驗過程中,BG11是常用的淡水藻類培養(yǎng)基,其ρ(TN)和ρ(TP)分別為247.06mg·L-1和7.11mg.L-1,而在自然水體ρ(TN)、ρ(TP)濃度遠遠低于培養(yǎng)基[5-6]。本文主要研究在近似水體營養(yǎng)鹽條件下四尾柵藻對壬基酚脅迫的響應(yīng),包括四尾柵藻細胞密度、最大光能轉(zhuǎn)化效率(Fv/Fm)、胞外多糖含量以及細胞群體形態(tài)的變化,以期為合理評價該類污染物對水域生態(tài)系統(tǒng)的影響提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 主要儀器和試劑 5401-CC275TL型智能人工氣候箱,UV-2450型紫外-可見分光光度計,Handy PEA植物效率分析儀等。壬基酚純品購自上海晶純實業(yè)有限公司。

    1.2 藻種及培養(yǎng)條件 實驗藻種四尾柵藻由暨南大學(xué)水生生物研究所藻種室提供,培養(yǎng)溫度為(23±1)℃,光照強度100μmol·m-2·s-1,光暗比為12h(L)∶12h(D)。

    1.3 實驗設(shè)計 采用營養(yǎng)鹽濃度減少為原濃度1/10的BG-11培養(yǎng)基。無菌條件下,將處于指數(shù)生長期的四尾柵藻離心(3 500rpm,5min,24℃),經(jīng)無菌蒸餾水反復(fù)清洗后接種于1/10的BG-11培養(yǎng)基中,靜置饑餓4d后用于實驗。實驗采用丙酮作為助溶劑,配制丙酮的6個體積濃度系列:0、1、3、5、7和10‰,96h培養(yǎng)后用血球計數(shù)板顯微計數(shù),測定藻細胞的密度,計算得到丙酮對四尾柵藻不可見效應(yīng)劑量(No observed effect level,NOEL)為5‰。將預(yù)處理過的藻液接種到1/10 BG-11培養(yǎng)基中,接種密度為8.63×105cells·mL-1。NP質(zhì)量濃度分別為0(加5‰丙酮作為對照)、0.041、0.103和0.205mg·L-1。每個實驗設(shè)置3個平行,每天搖瓶至少3次,培養(yǎng)96h。

    1.4 測定方法

    1.4.1 藻細胞密度的測定 每隔24h取樣,血球計數(shù)板計數(shù)。每個樣品計數(shù)3次,取其平均值。

    1.4.2 最大光能轉(zhuǎn)化效率的測定 每隔24h取樣,測量前將待測藻液暗適應(yīng)20min。利用Handy PEA植物效率分析儀測定最大光能轉(zhuǎn)化效率(Fv/Fm)。

    1.4.3 胞外多糖含量的測定 每隔24h取樣,將藻液通過0.45μm濾膜過濾,吸取2.0mL濾液加入25mL比色管中,以葡萄糖作為標準,用硫酸苯酚法測定胞外多糖的含量[7]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 四尾柵藻細胞密度變化對NP暴露的響應(yīng) 不同質(zhì)量濃度NP對四尾柵藻的細胞密度的影響如圖1。由圖1可知,四尾柵藻細胞起始密度為8.63×105cells·mL-1,在培養(yǎng)過程中,NP質(zhì)量濃度為0.041mg·L-1處理組細胞密度始終均比同期對照組高,藻細胞數(shù)量顯著增加,最終為對照組的1.13倍,差異顯著(P<0.05);在0.103mg·L-1NP處理組中藻細胞密度相比對照組無顯著差異(P>0.05)。在96h后,0.205mg·L-1NP暴露會抑制藻細胞數(shù)量的增加,顯著低于對照組(P<0.05),為對照組的74%。表明低濃度的NP對四尾柵藻的生長有促進作用,高濃度的NP抑制了四尾柵藻的生長,0.205mg·L-1NP處理組藻體顏色相比處理組變淺。

    2.2 四尾柵藻最大光能轉(zhuǎn)化效率(Fv/Fm)對NP暴露的響應(yīng) NP暴露對四尾柵藻Fv/Fm的影響如圖2所示。由圖2可知:96h后,0.041mg·L-1NP處理組明顯提高了四尾柵藻光系統(tǒng)(PSⅡ)的Fv/Fm(n=3,P<0.05),0.103、0.205mg·L-1NP處理則降低了四尾柵藻的Fv/Fm。

    2.3 四尾柵藻胞外多糖合成對NP暴露的響應(yīng) 如圖3所示,培養(yǎng)結(jié)束后,0.205mg·L-1處理組四尾柵藻細胞胞外多糖含量最高,為對照組的1.05倍,0.041mg·L-1處理組中細胞胞外多糖含量低于對照組,且始終低于同期對照組。

    2.4 NP暴露對四尾柵藻群體形成的影響 不同質(zhì)量濃度NP對四尾柵藻細胞群體形態(tài)的影響如圖4所示。由圖4可知,實驗初始階段,對照組和處理組中四尾柵藻單細胞、雙細胞和多細胞群體形態(tài)相對比例為69.2%、22.78%、0.08%,培養(yǎng)期間,NP質(zhì)量濃度0.041mg·L-1處理組中四尾柵藻非單細胞群體相對比例基本均低于對照組;而0.102、0.205mg·L-1處理組中非單細胞群體相對比例在96h后分別比對照組高出3.4%、14.1%。

    3 結(jié)論與討論

    NP對生物的影響是多方面的,通過本次實驗研究表明,低濃度(0.041mg·L-1)的NP對四尾柵藻的生長有一定的促進作用,細胞密度與對照組相比也有所增加,F(xiàn)v/Fm也有所提高。Fv/Fm反映的是PSII反應(yīng)中心原初光能轉(zhuǎn)化效率,即最大光化學(xué)效率,可以反應(yīng)植物所受脅迫程度以及植物的光合效能[8]。實驗結(jié)果表明,低質(zhì)量濃度(0.041mg·L-1)NP暴露促進了四尾柵藻藻Fv/Fm的升高,這與王山杉等人在固氮魚腥藻的研究相一致[9]。所以低質(zhì)量濃度NP對四尾柵藻生長的刺激效應(yīng),很可能是因為NP暴露提高了微藻的Fv/Fm,促進了細胞中光合色素和蛋白質(zhì)等物質(zhì)的轉(zhuǎn)化合成,從而刺激了微藻細胞相對較快的增長繁殖,致使單個細胞所負擔(dān)污染物濃度降低,且受損藻細胞逐漸恢復(fù)的結(jié)果。

    而在NP暴露濃度為0.205mg·L-1的處理組中,柵藻細胞中雙細胞、多細胞群體明顯增多,與單細胞相對比例增大,高于對照組。四尾柵藻群體特征的出現(xiàn),說明原先的單細胞表面的黏性增強,也就是說與細胞表面粘性有關(guān)的胞外多糖含量可能增高了。而本實驗通過測定培養(yǎng)過程中四尾柵藻細胞胞外多糖合成的變化也證實了這一點,處理組中藻細胞胞外多糖含量顯著高于對照組??梢姡奈矕旁迦后w的形成與胞外多糖分泌量密切相關(guān),與楊州在銅綠微囊藻中的研究相一致[10]。由于藻類群體的形成,減小了其比表面積和包裹效應(yīng)(package-effect)的影響,使得藻類群體單位體表面積吸收的光能減少[11],影響了光合作用的進行;同時,群體形態(tài)的維持需要更多的能量用于合成胞外多糖,減少了其他成分(如蛋白質(zhì)、脂肪)的合成量,從而不利于細胞的增殖和生長[12]。實驗測定的細胞密度和Fv/Fm的變化也證實了這一點。

    低濃度NP暴露對四尾柵藻的生長、葉綠素a含量以及Fv/Fm等均有促進作用,這表明四尾柵藻可以通過在身代謝的調(diào)整來適應(yīng)低濃度的NP脅迫,低濃度的NP對四尾柵藻產(chǎn)生了毒物刺激效應(yīng)現(xiàn)象,在一定程度上促進了四尾柵藻細胞的代謝活動,增強了其光合作用效能,其中的促進機理有待于進一步的研究。

    參考文獻

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    (責(zé)編:張宏民)

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