新輔助化療對(duì)Ⅰb2－Ⅱb期宮頸癌細(xì)胞凋亡以及其預(yù)后的影響＊

陜西省婦幼保健院婦科（西安710003） 胡春艷 劉 晨 張恩娣 譚宏偉 田燕妮 賈 亮

宮頸癌作為臨床發(fā)病率較高的婦科惡性腫瘤，預(yù)后狀況較差，主要采用放療、手術(shù)等方法進(jìn)行治療。但近年來(lái)在臨床分期ⅠB2以上的宮頸癌患者中所采用的新輔助化療（New adjuvant chemotherapy treatment，NACT）能明顯促進(jìn)腫瘤體積的縮小、預(yù)防復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，并可有效提高生存率［1］。本研究對(duì)新輔助化療標(biāo)本的細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行觀察，并對(duì)術(shù)后宮頸癌患者的預(yù)后狀況進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料和方法

1 一般資料 納入2005年12月至2012年12月期間于本醫(yī)院收治的Ⅰb2－Ⅱb期宮頸癌患者，按照術(shù)前是否給予新輔助化療分為新輔助化療組（A組）50例與未行新輔助化療（B組）50例，并納入50例因子宮多發(fā)肌瘤而進(jìn)行子宮全切術(shù)治療的患者作為對(duì)照組（C組），其宮頸組織的宮頸鱗狀上皮正常。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前行新輔助化療者及其家屬均簽署知情同意治療書(shū)；②宮頸癌患者均經(jīng)宮頸活檢病理檢查后給予確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤史及肝腎功能異常患者；②有化療禁忌證。A、B、C3組患者在臨床分期、病理分化程度、平均年齡及組織學(xué)類型等方面進(jìn)行對(duì)比，差異均無(wú)顯著性（P＞0.05）。

2 化療方法 宮頸癌A組患者術(shù)前給予新輔助化療法，采用紫杉醇聯(lián)合順鉑化療法：紫杉醇劑量135～175mg／m，持續(xù)靜滴3h，順鉑劑量為50mg／m。在進(jìn)行紫杉醇化療前6、12h，分別使用20mg地塞米松，口服；使用順鉑化療前24h及使用當(dāng)天、使用后第1d，均給予靜脈水化?；煰煶?～2個(gè)，每次間隔3周，化療結(jié)束后第二周，A組患者均行廣泛子宮切除術(shù)加雙側(cè)盆腔淋巴結(jié)切除術(shù)加雙側(cè)附件切除術(shù)，宮頸癌B組患者術(shù)前未行新輔助化療，而直接給予手術(shù)治療，手術(shù)方法與A組相同。通過(guò)門診、電話等方式進(jìn)行對(duì)A、B兩組宮頸癌患者進(jìn)行術(shù)后隨訪、隨訪至2015年1月，記錄術(shù)后1、2年的復(fù)發(fā)率與生存率。

3 細(xì)胞凋亡指標(biāo)檢測(cè)法與結(jié)果判定 采用免疫組織化學(xué)法、原位末端標(biāo)記法（TUNEL）對(duì) A、B、C3組患者的細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法均按北京中山生物試劑公司提供的試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，并采用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）替代一抗作為空白對(duì)照，其中，主要試劑包括：原位末端標(biāo)記試劑盒（羅氏公司）、SP系列免疫組化試劑盒、Bcl－2（100）、Bax（N－20）分別為鼠抗人單克隆抗體、兔抗人多克隆抗體）。結(jié)果判定：對(duì)3組患者的組織切片Bcl－2、Bax等表達(dá)狀況進(jìn)行分析，在外部相同條件下，對(duì)低倍鏡下（×100）的圖像進(jìn)行攝取，隨機(jī)選取各張切片的6個(gè)視野，對(duì)場(chǎng)總面積平均光密度值及5個(gè)高倍視野（×400）下的凋亡細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞總數(shù)等進(jìn)行計(jì)算，并求各張組織切片的平均值，凋亡指數(shù)（apoptosis index，AI）＝（凋亡細(xì)胞數(shù)／細(xì)胞總數(shù)）×100.00%。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間計(jì)量資料（ˉx±s）采用F檢驗(yàn)，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料（%）采用χ2檢驗(yàn)，生存率對(duì)比采用Log－rank檢驗(yàn)法，均以α＝0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

結(jié) 果

1 3組患者細(xì)胞凋亡基因檢測(cè)情況對(duì)比 A、B兩組患者的Bcl－2、Bax及 AI均顯著高于C組，Bcl－2／Bax均顯著低于 C組，而 A 組 Bcl－2、Bcl－2／Bax均顯著低于B組患者，且A組患者的AI顯著高于B組患者，差異均具有顯著性（P＜0.05），詳見(jiàn)附表。

附表 3組患者細(xì)胞凋亡基因檢測(cè)情況對(duì)比（ˉx±s）

2 宮頸癌A、B兩組患者術(shù)后1年、2年的生存率、復(fù)發(fā)率比較 A組術(shù)后1、2年的復(fù)發(fā)率顯著低于B組，A組術(shù)后1、2年的生存率顯著高于B組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

討 論

雖然宮頸癌患者的病因較明確，但其預(yù)后狀況仍不容樂(lè)觀，病死率一直居高不下，且宮頸癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，根據(jù)對(duì)Ⅰb2－Ⅱb期宮頸癌患者各年代發(fā)病率的調(diào)查研究結(jié)果表明，20世紀(jì)70年代的發(fā)病率僅為9.0%，而在90年代則上升為19.1%。目前臨床上主要采用根治手術(shù)對(duì)該疾病患者進(jìn)行治療，但僅依靠手術(shù)治療仍存在創(chuàng)傷大、術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率高及預(yù)后狀況不理想等問(wèn)題［2］，且手術(shù)范圍常涉及盆腹腔血管、腸管、膀胱等多種器官組織，在一定程度上影響了手術(shù)的整體效果［3］，盡管近年來(lái)宮頸癌根治手術(shù)不斷發(fā)展，但術(shù)后并發(fā)癥仍高達(dá)25%～50%［4］。

正常機(jī)體維持自身穩(wěn)定需要依靠細(xì)胞凋亡，它作為基因調(diào)控機(jī)體的生理機(jī)制之一，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用，并成為臨床腫瘤探討的熱點(diǎn)之一。有研究［5］表明，在腫瘤組織中，細(xì)胞增殖的平衡與細(xì)胞凋亡有關(guān)。而調(diào)控細(xì)胞凋亡的相關(guān)基因較多，其中，與其關(guān)系較密切的基因主要有 Bcl－2、Bax，Bcl－2作為抗凋亡基因之一，可通過(guò)直接抗氧化、維持細(xì)胞鈣穩(wěn)定狀態(tài)、降低線粒體釋放的促凋亡蛋白質(zhì)水平、抑制凋亡蛋白酶激活及抑制促凋亡調(diào)節(jié)蛋白的細(xì)胞毒作用等途徑抑制細(xì)胞凋亡，而作為Bcl－2的拮抗因子，Bax主要通過(guò)與Bcl－2蛋白競(jìng)爭(zhēng)作用靶并與之形成異源二聚合復(fù)合物，再加上本身所形成的同源二聚體，共同起到調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的作用［6］。術(shù)前進(jìn)行新輔助化療已經(jīng)被臨床所建議，以縮小局部腫瘤、減少手術(shù)切除范圍、減輕手術(shù)帶來(lái)的損傷。本研究結(jié)果顯示，采用新輔助化療的 A組Bcl－2、Bcl－2／Bax均顯著低于 B組患者，且 A組患者的AI顯著高于B組患者，差異均具有顯著性（P＜0.05），此外，A組術(shù)后1、2年的復(fù)發(fā)率顯著低于B組，術(shù)后1、2年的生存率顯著高于B組，說(shuō)明新輔助化療可通過(guò)降低Bcl－2／Bax，從而增加凋亡細(xì)胞，抑制腫瘤的惡化發(fā)展，再配合手術(shù)治療，改善患者的預(yù)后狀況。

綜上所述，在Ⅰb2－Ⅱb期宮頸癌患者術(shù)前應(yīng)用新輔助化療，可有效促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡、改善患者預(yù)后，具有較高的臨床價(jià)值。

［1］ 熊銳華，任慶，田秀榮，等.新輔助化療在宮頸癌治療中的臨床研究［J］.腫瘤防治研究，2012，39（6）：719－721.

［2］ 唐 杰，張 晶，王 娟，等.宮頸癌ⅡB期新輔助化療后腹腔鏡下根治術(shù)40例分析［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28（17）：2934－2935.

［3］ 王文翔，范文強(qiáng)，董學(xué)彩，等.小劑量紫杉醇聯(lián)合順鉑周療方案在Ⅰb2～Ⅱb期宮頸癌新輔助化療中的應(yīng)用［J］.山東醫(yī)藥，2012，52（30）：39－40.

［4］ 何超蔓，梁峰冰，陳曼玲，等.術(shù)前新輔助化療治療宮頸癌62例的療效觀察［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，92（5）：327－329.

［5］ 劉絲蓀，熊潔琦，閔慶華，等.二氧化硒調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2014，12（10）：1218－1220.

［6］ 葉春萍，余寧珠.Ⅰb2～Ⅱb期宮頸腺癌患者術(shù)前新輔助化療的療效觀察［J］.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2012，40（5）：562－565.