臨時配制的萬古霉素及頭孢他啶滴眼液穩(wěn)定性和體外抗菌活性研究

徐雪姑

(溫州醫(yī)科大學(xué)附屬眼視光醫(yī)院 藥劑科，浙江 溫州 325000)

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臨時配制的萬古霉素及頭孢他啶滴眼液穩(wěn)定性和體外抗菌活性研究

徐雪姑

(溫州醫(yī)科大學(xué)附屬眼視光醫(yī)院 藥劑科，浙江 溫州 325000)

目的 研究臨時配制的萬古霉素和頭孢他啶滴眼液在不同溫度和光照下的穩(wěn)定性和體外抗菌活性。方法 平衡鹽溶液制備頭孢他啶滴眼液(50 mg/mL)和萬古霉素滴眼液(50 mg/mL)。2種滴眼液在光照及避光條件下，分別保存于4 ℃及24 ℃，分別觀察其在0、3、7、14、21和28d的物理性質(zhì)和pH值變化，并評價萬古霉素對金黃色葡萄球菌和頭孢他啶滴眼液對銅綠假單胞菌的最低殺菌濃度。結(jié)果 保存于24 ℃和4 ℃的頭孢他啶滴眼液抗菌活性分別從第3天和第7天起顯著下降，并且與光照與否無關(guān)。溶液pH由弱酸性轉(zhuǎn)變?yōu)槿鯄A性，于第3天pH達到峰值。萬古霉素滴眼液的抗菌活性在4周內(nèi)保持穩(wěn)定，但溶液pH值升高表明其酸性降低。結(jié)論 頭孢他啶平衡鹽溶液在4 ℃時抗銅綠假單胞菌活性可維持7 d以上，但保存于24 ℃時則顯著下降。從頭孢他啶溶液的顏色及其物理性質(zhì)變化可觀察其降解，pH在第3天突然升高需引起重視。萬古霉素平衡鹽溶液在4 ℃或24 ℃均可保存4周以上。

頭孢他啶；萬古霉素；體外；穩(wěn)定性；抗菌活性

由于習(xí)慣性療法和細菌耐藥性的產(chǎn)生，假單胞菌和金黃色葡萄球菌引起的眼部感染往往難以治愈。臨床治療上越來越需要加強的抗菌藥物滴眼液[1-2]。我國白內(nèi)障術(shù)后急性細菌性眼內(nèi)炎專家共識表明臨床上配制萬古霉素滴眼液和頭孢他啶滴眼液可作為眼內(nèi)炎的輔助療法之一[3]。適用于眼部感染的抗菌藥物制劑與靜脈制劑有著相似之處?？咕幬锶绂?內(nèi)酰胺類(青霉素類和頭孢菌素類)在水溶液中相對不穩(wěn)定[4-5]，故其眼用制劑并未上市。頭孢他啶是有著廣譜抗菌作用的第三代頭孢，通常用來治療由銅綠假單胞菌引起的眼部感染，銅綠假單胞菌為醫(yī)院感染的主要病原菌[6]。糖肽類如萬古霉素，類似于β-內(nèi)酰胺類，用來制作眼用制劑并不可取，但可臨時配制來治療由革蘭氏陽性菌如金黃色葡萄球菌引起的眼部感染。萬古霉素體外抗菌活性很強，且很少產(chǎn)生耐藥。本研究觀察了平衡鹽溶液臨時配制的萬古霉素和頭孢他啶滴眼液于4 ℃和24 ℃儲存下的體外抗菌活性，同時也觀察了光照對其的影響。整個試驗周期為4周。

1 材料和方法

1.1 藥品與試劑 注射用頭孢他啶(規(guī)格：1 g)(葛蘭素史克，S.P.A，Verona，Italy，批號：14080013)，注射用鹽酸萬古霉素(規(guī)格：500 mg)(Eli Lilly，Athens，Greece，批號：C192201)，平衡鹽溶液(balanced salt solutions，BBS)(Alcon Inc，F(xiàn)ort Worth，TEXAS，USA，批號：241204F)。MH肉湯來自英國Oxoid公司。

1.2 實驗儀器 梅特勒-托利多PH計(Mettler Toledo，瑞士)；恒溫空氣浴搖床(NBS，美國)；恒溫振蕩水浴培養(yǎng)箱(優(yōu)萊博，美國)。

1.3 方法 取含適量鹽酸萬古霉素和頭孢他啶凍干粉的注射液安瓿，在100級層流罩內(nèi)加入BSS，振搖溶解，使?jié)舛葹闉?0 mg/mL。50 mg/mL濃度為臨床和科研上的常用濃度[7-8]。每種溶液平均分為4份，2份置于24 ℃下，2份置于4 ℃下(冰箱)。同種溫度下的溶液其一用棕色膜覆蓋以評價光照對其的影響。上述溶液分別于0、3、7、14、21和28 d觀察其物理性質(zhì)和pH值變化。

頭孢他啶和萬古霉素的最低殺菌濃度分別以銅綠假單胞菌(ATCC，27853)和金黃色葡萄球菌(ATCC，29213)評價。在每個時間點，均使用肉湯稀釋法來測定最低殺菌濃度。具體操作為待測抗菌藥溶液在測定之前需用BSS稀釋至200 μg/mL。金黃色葡萄球菌于35 ℃在血平板上過夜孵育，銅綠假單胞菌于35 ℃在麥康凱平板上過夜孵育。菌懸液用無菌Mueller-Hinton肉湯制備，調(diào)整到每毫升的菌落形成單位(colony-forming units，CFU)為1.5×108/mL，即相當于0.5麥氏標準比濁管。在Mueller-Hinton肉湯中將抗菌藥溶液稀釋2倍，移液槍吸取1 mL稀釋液轉(zhuǎn)移至無菌試管(16×100 mm)。1 mL濃度為106CFU/mL的菌懸液加到每根試管中，使菌懸液的最終濃度為5×105CFU/mL。于35 ℃需氧條件下孵育24 h。孵育結(jié)束后，不帶有可見菌落生長的溶液需渦旋15 s后再另孵育4 h。過夜孵育后，移取0.1 mL至血瓊脂中，記錄每一個培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)。菌落數(shù)<50的濃度(已殺滅最初菌落的99.9%)為最低殺菌濃度。為排除可能的干擾，每個時間點抽取的溶液都經(jīng)血瓊脂和沙氏葡萄糖培養(yǎng)基質(zhì)量控制。所有試驗重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 頭孢他啶滴眼液的穩(wěn)定性及體外抗抗銅綠假單胞菌菌活性 24 h后保存于室溫及光照下的頭孢他啶溶液將會呈現(xiàn)淡黃色。溶液將會散發(fā)出難聞的氣味，尤其在3 d后，并隨著時間的延長而增強。室溫及避光保存的頭孢他啶溶液亦呈現(xiàn)相似的物理變化，但顏色的改變和散發(fā)出臭味的時間將會延遲。保存于4 ℃下的頭孢他啶溶液1周后僅略顯淡黃色。而且，溶液散發(fā)出的臭味亦遠遠低于保存于24 ℃時的溶液。與溫度及光照無關(guān)。所有的頭孢他啶溶液pH均由弱酸性(pH=6.6)轉(zhuǎn)變?yōu)槿鯄A性(pH=7.6)。并在第3天pH達峰值，見圖1。但4 ℃溶液pH值變化較24 ℃明顯。保存于24 ℃的頭孢他啶溶液抗菌活性于第3天開始顯著下降，保存于4 ℃的溶液則于第7天開始顯著下降，見圖2。光照與否對抗菌活性并無顯著性影響，見圖2。試驗過程中所有的頭孢他啶溶液均保持無菌。

圖1 臨時配制的頭孢他啶平衡鹽溶液在不同光照及溫度下pH變化Fig.1 Change of pH of ceftazidime reconstituted in BSS under different light and temperature conditions

圖2 臨時配制的頭孢他啶平衡鹽溶液在不同光照及溫度下抗銅綠假單胞菌最低殺菌濃度變化Fig.2 Changes of minimum bactericidal concentration(MBC) of ceftazidime against P. aeruginosa reconstituted in BSS under different light and temperature conditions

2.2 萬古霉素滴眼液的穩(wěn)定性及體外抗金黃色葡萄球菌活性 配制24 h后，所有的萬古霉素溶液均發(fā)生混濁。與光照和溫度無關(guān)，試驗過程中所有混懸液的混濁程度保持穩(wěn)定。pH值僅有微小的變化(5.4～5.6)，見圖3。4周的試驗期間，萬古霉素的抗金黃色葡萄球菌活性保持穩(wěn)定(1.56 μg/mL)。保存穩(wěn)定和光照與否與抗菌活性幾乎無相關(guān)性，見圖4。試驗期間萬古霉素混懸液保持無菌。

圖3 臨時配制的萬古霉素平衡鹽溶液在不同光照及溫度下pH變化Fig.3 Change of pH of vancomycin reconstituted in BSS under different light and temperature conditions

圖4 臨時配制的萬古霉素平衡鹽溶液在不同光照及溫度抗金黃色葡萄球菌最低殺菌濃度(MBC)變化Fig.4 Changes of minimum bactericidal concentration(MBC) of vancomycin against S.aureus reconstituted in BSS under different light and temperature conditions

3 討論

近年來，對臨時配制抗菌藥的抗菌活性和穩(wěn)定性進行了大量研究[9]。雖然溫度為影響穩(wěn)定性最關(guān)鍵的因素，但溶劑的選擇不僅影響溶液的穩(wěn)定性，也與患者的耐受性息息相關(guān)。

當前的研究中，臨時配制的頭孢他啶平衡鹽溶液最初pH值為6.58，接近之前報道的最穩(wěn)定pH(4.5～6.5)[10]。頭孢他啶平衡液溶液在第3天pH值達峰，并于第7天趨于平衡并呈弱堿性。這可能與頭孢他啶逐漸水解為吡啶類化合物有關(guān)。隨著水解產(chǎn)物內(nèi)酰胺環(huán)和環(huán)己烷的增加，pH值趨于平衡[11-12]。以往的研究表明，頭孢他啶在25 ℃時水解產(chǎn)生吡啶類化合物的量大于7 ℃[7]，但本研究中頭孢他啶保存于4 ℃時pH升高程度則大于24 ℃時的pH。

考慮到溫度對頭孢他啶抗菌活性的影響，本研究臨時配制的頭孢他啶溶液需低溫避光保存。其抗菌活性可在7 d內(nèi)有效[12]。一些研究者用高效液相色譜法證明頭孢他啶溶液在配制后7 d內(nèi)是有效的[13]。同樣，加入了防腐劑和聚乙烯醇的頭孢他啶溶液在4 ℃時可延長其抗菌活性的有效時間[14]。然而本研究則表明與24 ℃相比，保存于4 ℃時的pH值升高更為明顯。該結(jié)果表明，頭孢他啶平衡鹽溶液保存于24 ℃更為合適。

與溶解于其他溶劑中相比，萬古霉素平衡鹽混懸液的pH接近中性，因此大大降低了其眼部刺激性[1，15]。研究中，隨著時間的推移，pH值呈穩(wěn)定地增加，保存于24 ℃時更為明顯。與平衡液相比，分散在注射用水或生理鹽水中的萬古霉素酸性更大。整個試驗過程中，萬古霉素的抗菌活性無顯著變化，表明萬古霉素平衡鹽混懸液始終保持穩(wěn)定，與溫度及光照無關(guān)。

綜上所述，本研究表明臨床上使用的頭孢他啶平衡鹽溶液可以在7 d內(nèi)保持有效的抗菌活性(保存于4 ℃時)。其pH變化與光照和溫度無關(guān)，于第3天時達峰。滴眼液pH升高可能造成眼部刺激。此外，與保存條件無關(guān)，萬古霉素平衡鹽混懸液可在4周內(nèi)保持有效的抗菌活性。在此期間，pH的變化亦可被患者接受。

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(編校：王冬梅)

Stability and antibacterial activity in vitro of temporary preparation ceftazidime and vancomycin eyedrops

XU Xue-gu

(Department of Pharmacy, Optometry and Ophthalmology Hospital Affiliated to Wenzhou Medical University, Wenzhou 325000, China)

ObjectiveTo study the stability and antibacterial activity in vitro of temporary preparation ceftazidime and vancomycin eyedrops respectively under different storage temperatures and light conditions.MethodsSolutions of ceftazidime 50 mg/mL and vancomycin 50 mg/mL were prepared by reconstituting with balanced salt solution (BSS) and stored at 4 ℃ and 24 ℃ with and without exposure to light, respectively.Changes in pH values and physical characteristics of the solutions were recorded and minimum bactericidal concentrations againstP.aeruginosa andS.aureus were measured at 0, 3, 7, 14, 21 and 28d respectively.ResultsThe antibacterial potency of ceftazidime decreased significantly from days 3 and 7 at storage temperatures of 24 ℃ and 4 ℃, respectively, but was not affected by light exposure.The pH value progressed from acidic to alkaline, reached maxium value at 3 day, in all solutions.The antibacterial potency of vancomycin remained stable during the four-week period, but its pH increased showed that acidity decreased.ConclusionCeftazidime eyedrops in BSS appears to remain effective againstP.aeruginosa 7 days above when stored at 4 ℃, but are less effective when stored at 24 ℃.The degradation was observed using the color changes of ceftazidime solution and its physical properties, which should be pay attention to the suddenly rise in the 3rd day, however, as it may affect patients’ tolerance.Vancomycin eyedrops in BSS can be safely used for 4 weeks above, stored at either 4 ℃ or 24 ℃.

ceftazidime; vancomycin; in vitro; stability; antibacterial activity

徐雪姑，女，碩士，藥師，研究方向：臨床藥學(xué)，E-mail：xuxuegu1104@126.com。

R917

A

1005-1678(2015)03-0048-03